$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
L’échantillonnage de cellules uniques permet d’isoler une seule cellule vivante d’une suspension de cellules cancéreuses pour une analyse en aval.
Commencez l’isolement avec une suspension de cellules cancéreuses. Transférez le volume souhaité de cette suspension sur une diapositive de verre. Laissez la lame intacte pendant un certain temps pour réduire le mouvement des particules et permettre aux cellules de se stabiliser.
Maintenant, transférez la lame sous un microscope équipé d’un micromanipulateur relié à une pointe microcapillaire. Cet instrument de haute précision facilite l’interaction physique avec les cellules de l’échantillon au niveau microscopique.
Dirigez l’extrémité microcapillaire à proximité d’une seule cellule cible. En appliquant une aspiration, collectez la cellule cible dans le microcapillaire. Maintenant, transférez le microcapillaire directement dans un tube contenant le tampon de collecte souhaité.
Éjectez le contenu microcapillaire pour libérer la cellule unique capturée dans le tampon. Conservez la cellule isolée sur de la glace jusqu’à ce qu’une analyse plus approfondie soit effectuée.
Pour la micromanipulation, transférez les 100 microlitres de suspension cellulaire sur une lame de verre. Ensuite, placez la lame de verre sur un microscope équipé d’un micromanipulateur et laissez les cellules se déposer pendant 5 minutes. Ensuite, dans des tubes PCR de 0,2 millilitre, pipetez 2 microlitres de mélange principal de lyse cellulaire et transférez-les sur de la glace. Utilisez le micromanipulateur pour prélever une seule cellule dans 1 microlitre de solution saline tamponnée au phosphate 1X.
Ensuite, transférez la cellule directement dans 2 microlitres de mélange maître de lyse cellulaire. À l’aide d’un microfuge de bureau, faites tourner rapidement les échantillons à 2000 x g pendant 3 secondes pour recueillir le liquide au fond du tube.