Détection du signal RNA CISH : une technique pour détecter les signaux chromogènes lors de l’hybridation in situ de l’ARN dans des échantillons de tissus intacts

Pour détecter les signaux chromogènes lors de l’hybridation de l’ARN, commencez par prélever une coupe de tissu sur une lame de verre. Cette section contient de l’ARN cible, pré-hybridé avec une sonde d’ARN marquée à la peroxydase de raifort.

Versez quelques gouttes de diaminobenzidine ou DAB, un substrat de détection, sur la section de tissu et incuber.

Le DAB pénètre dans la cellule et l’enzyme peroxydase du raifort l’oxyde pour former un précipité brun. Cette réaction donne une couleur brune à des séquences d’ARN spécifiques dans la cellule. Les cellules qui ne contiennent pas d’ARN cible n’auront pas d’activité peroxydase et resteront non colorées.

Ensuite, contre-colorez la section de tissu avec de l’hématoxyline. L’hématoxyline se lie à l’ADN et confère une tache violette à la section du tissu.

Traitez la section de tissu avec de l’eau ammoniacale - une solution bleuissante. Il réduit l’intensité de la coloration violette, rendant les cellules bleues. Cette étape est essentielle pour une visualisation claire des taches brunes à l’intérieur des cellules.

Maintenant, immergez la section de tissu dans des concentrations croissantes d’éthanol et traitez-la ensuite avec du xylène