Isolement des astrocytes : une méthode pour obtenir une préparation pure d’astrocytes corticaux de souris
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0 vues • 6:41 min • April 30th, 2023
La culture in vitro d’astrocytes permet d’étudier le rôle biologique des astrocytes - les cellules cérébrales les plus abondantes.
Commençons par un cerveau de souris nouveau-née placé sous un microscope à dissection.
Retirez les bulbes olfactifs et le cervelet.
Effectuez une incision médiane entre les deux hémisphères pour séparer le cortex.
Retirez les méninges pour éviter la contamination de la culture d’astrocytes par les fibroblastes et les cellules méningées.
Transférez les hémisphères du cortex dans un milieu glacé et hachez-les en petits morceaux.
Recueillez les morceaux corticaux dans un tube contenant de la trypsine. La trypsine, une enzyme protéase, digère les protéines d’adhésion cellulaire, facilitant ainsi la séparation cellulaire.
Centrifugeuse pour granuler le tissu digéré.
Retirez le surnageant et ajoutez un milieu astrocytaire à la cuillère. Pipetez vigoureusement pour libérer une population cellulaire mixte d’astrocytes, de cellules microgliales et de cellules précurseurs d’oligodendrocytes ou OPC.
Ensemencez cette suspension cellulaire dans un flacon de culture tissulaire enrobé de polylysine et incubez.
Les cellules chargées négativement se fixent à la polylysi
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