Réaction en chaîne par polymérase numérique en gouttelettes : une méthode pour générer des réactions PCR de nanogouttelettes pour détecter des mutations tumorales rares

La technologie dPCR (réaction en chaîne par polymérase numérique par gouttelettes) divise les réactifs d’une seule réaction PCR en millions de réactions PCR de nanogouttelettes. Cette partition de masse suivie d’une amplification détecte une quantité infime d’ADN mutant sur un large fond d’ADN de type sauvage, permettant une détection précoce du cancer.

Pour commencer, aspirez un mélange maître dPCR contenant des oligonucléotides marqués par fluorescence ainsi que d’autres réactifs PCR et une huile stabilisatrice de gouttelettes. Ajoutez ce mélange principal directement au fond de chaque puits dans un tube de bandelette PCR pour éviter les bulles d’air. Ensuite, ajoutez des échantillons d’ADN au mélange réactionnel et pipetez plusieurs fois pour mélanger.

Maintenant, transférez l’intégralité du mélange réactionnel dans une puce spécialisée d’un instrument générateur de gouttelettes. Montez un tube de bandelette PCR fraîche sur l’instrument générateur de gouttelettes. Le générateur de gouttelettes combine l’échantillon et l’huile pour former des nanogouttelettes discrètes avec une zone encapsulée qui empêche la contamination croisée entre les gouttelettes.

Une fois la gouttelétisati