Visualisation par immunofluorescence des interactions entre les protéines de réparation de l’ADN

Les cassures double brin de l’ADN induites par les radiations, ou DSB, déclenchent le recrutement de protéines de réparation de l’ADN sur le site endommagé, activant ainsi la réparation de l’ADN.

Pour détecter les protéines de réparation de l’ADN γH2AX et 53BP1 sur les sites DSB par immunofluorescence indirecte, prélever des lamelles contenant des cellules épithéliales. Irradiez un sous-ensemble des cellules. Incuber, permettant au contrôle des cellules non irradiées et irradiées de se développer pendant des temps spécifiques.

Traiter avec un tampon pour extraire les noyaux cellulaires. Fixer les noyaux cellulaires pour préserver leur morphologie. Traiter avec une solution bloquante pour minimiser la liaison des anticorps primaires non spécifiques.

Ajoutez des anticorps primaires ciblant les deux protéines de réparation de l’ADN. Les anticorps se lient aux protéines respectives.

Incuber avec des anticorps secondaires marqués avec des fluorophores rouges et verts, respectivement. Les anticorps secondaires – spécifiques à chaque anticorps primaire – se lient à leurs cibles. Ajoutez un support de montage contenant du DAPI sur une lame de verre. Montez les lamelles dessus pour l’imager