Oeufs Poulet fenêtrage d'études du développement

Bienvenue au Kramer Lab. Je m’appelle Matt Korn, je suis au département de neurobiologie et de comportement de l’Université de Californie à Irvine. Aujourd’hui, je vais vous montrer comment préparer des œufs de poule pour une variété de manipulations, y compris le placement de billes, l’injection de colorants ou l’exploration in ovo.

Alors, sans plus tarder, commençons. D’accord, nous allons donc aller de l’avant et nettoyer l’œuf. La raison en est qu’il y a beaucoup de choses qui pourraient être mises en place dans l’incubateur.

Nous allons le sceller avec du ruban adhésif. Nous ne voulons pas que de petits morceaux se retrouvent là où la fenêtre va obtenir l’ovule et augmenter le risque que l’embryon meure au moment où nous voulons le retirer. Donc, si vous avez vu de l’incubateur, les œufs sont assis avec le grand côté vers le haut.

Donc, ce que nous allons faire, c’est aller de l’avant et prendre l’œuf et le tourner simplement sur le côté. Et cela va faire deux choses. Premièrement, notre fenêtre sera juste ici, et deuxièmement, l’embryon doit flotter vers le haut pour que nous puissions faire tout type de manipulations.

Je vais donc en présenter quelques-uns ici, de l’étagère qui se trouvait dans l’incubateur à un porte-œufs en carton. Il s’agit en fait de la pièce qui entre dans la boîte lorsque les œufs sont livrés. Donc, pour aujourd’hui, nous allons aller de l’avant et l’utiliser uniquement pour contenir les œufs.

Maintenant, l’arrangement dépend, c’est à vous. J’aime le faire de cette façon parce que je peux accéder à tous les œufs à tout moment et aucun d’entre eux ne se touche. Au cas où j’en trouverais un qui était lâche et qui avait une fissure et que je devais le laisser tomber, ils ont tous un peu d’espace les uns des autres.

Je vais donc aller de l’avant et prendre ma gaze ici et simplement sortir une belle pile comme celle-ci et la diviser en deux. Je vais prendre de l’alcool à 70 % ici et je vais juste le remplir jusqu’à ce que je puisse sentir le fond devenir humide. Et c’est parce que je vais utiliser toute cette pile pour écouvillonner tous les œufs.

Ensuite, je vais juste en enlever quelques-uns du haut, aller de l’avant et vraiment faire le dessus, mais en fait, je contourne presque tout l’œuf ici. Et une fois que c’est fait, l’alcool sèche assez rapidement, puis nous pouvons aller de l’avant et mettre du ruban adhésif dessus. Le ruban adhésif collera bien et au moment où je termine une série, le premier est généralement sec et nous pouvons passer à l’étape suivante de la préparation de nos œufs.

Encore une fois, remettez-le à la poubelle et nous sommes prêts à passer à l’étape suivante. D’accord, maintenant que tous nos œufs ont été tamponnés avec de l’alcool, nous pouvons aller de l’avant et faire un trou de drainage sur le grand côté de l’œuf, à la base de l’œuf. Et cela nous permettra d’y aller et d’extraire de l’albumine, car si nous n’extrayons pas l’albumine, l’embryon ne tient pas correctement.

Nous ne pouvons pas faire de manipulations. Il s’agit donc simplement de prendre une lame et de prendre ce ruban en plastique. C’est un peu élastique, ce qui est génial.

Non seulement cela nous permet de nous étendre sur un trou s’il est un peu plus grand que nous le souhaiterions, mais lorsque nous couvrirons réellement tout l’œuf, nous devrons l’étirer. Ainsi, la zone où se trouvera la fenêtre est entièrement couverte. Je vais donc simplement couper le morceau comme ceci, puis faire une bande d’environ un millimètre.

Et puis à partir de là, je peux faire un morceau de ruban d’environ un millimètre carré. Et puis à partir de là, je vais simplement aller de l’avant et le placer juste au-dessus à gauche de la date. Il suffit de le mettre là et vous pouvez le voir.

Il colle très bien. Ensuite, je peux revenir à la bande que j’ai déjà faite, couper un autre morceau de ruban adhésif d’un millimètre. Et encore une fois, placez-le simplement à gauche du chiffre qui s’y trouve, qui est en fait le haut de l’œuf.

Maintenant que nous l’avons tourné sur le côté, c’est vers la droite. Et un autre élément ici. Maintenant, je ne porte plus de gants parce que le port de gants fera coller ce ruban adhésif aux gants et je me suis lavé les mains.

Je ne suis pas vraiment préoccupé par le fait que quoi que ce soit d’autre contamine l’actif à ce stade. Je vais donc prendre une paire de ciseaux avec la pointe acérée. Je vais aller au centre de l’endroit où j’ai placé le ruban et je vais juste le tourner dans le sens inverse des aiguilles d’une montre dans le sens des aiguilles d’une montre jusqu’à ce que je le remplisse un peu.

Et vous verrez qu’il y a un petit trou là-bas. Maintenant, le trou n’a pas besoin d’être très grand, car une fois que nous y aurons mis cette seringue, cela rendra le trou assez grand. Mais c’est pour que nous n’allions pas directement avec une aiguille et que nous essayions de casser l’œuf avec, car souvent, cela conduira à la rupture de tout le côté de l’œuf.

Ensuite, nous ne pouvons plus utiliser l’œuf. D’accord, maintenant je vais aller de l’avant et égoutter l’œuf. Nous avons ce joli petit trou sur le côté et je vais utiliser cette seringue de 10 millilitres et une aiguille de calibre assez grand pour aller de l’avant et extraire l’albumine.

Maintenant, je veux environ trois ou quatre millilitres, certainement plus de trois, pas beaucoup plus de quatre et demi ou cinq. Cela permettra à notre embryon qui se trouve maintenant sur le dessus de tomber un peu loin de la coquille. Et alors nous pourrons faire nos manipulations.

Donc, en entrant à un angle de 45 degrés, je suis sous le jaune. Ensuite, je veux juste le tourner un peu vers ma droite, juste pour me faufiler là-dessous et vous pouvez en quelque sorte sentir la pointe de l’aiguille toucher le fond de l’œuf. Et je vais aller de l’avant et extraire juste trois ou quatre et ça sort assez bien.

Je vais aller de l’avant et mettre cette albumine dans mon seau de taille ici et maintenant je peux continuer avec les autres œufs. D’accord, je vais donc continuer et continuer. Et vous verrez ici que le trou que j’ai fait pour la vidange est un peu plus grand que je ne le souhaiterais, mais que cela s’avère correct.

Ce dont je veux me soucier, c’est qu’en enfonçant l’aiguille, je ne la fissure plus. Je vais donc aller de l’avant et le faire. D’accord, donc je peux déjà voir que l’œuf a un peu de fissure dedans.

Maintenant, les petites fissures sont acceptables, mais vous devez vous inquiéter lorsqu’elles s’étendent à un autre plan de l’œuf. Et dans ce cas, c’est le cas. Vous pouvez le voir depuis le trou.

Il s’étend à peu près jusqu’au sommet. Et en fait, c’est là que va se trouver notre fenêtre. Donc, malheureusement pour cet œuf, nous allons devoir le jeter et le jeter.

Et il n’y a rien de spécial à s’en débarrasser. Vous n’avez pas besoin d’écrire un protocole particulier ou quoi que ce soit. Je vais juste aller de l’avant et le mettre dans le seau à déchets.

Nous utilisons ces poubelles noires pour les désigner comme des déchets animaux, mais à part cela, ils ont déjà été pris en charge. Nous pouvons passer à l’œuf suivant. D’accord, maintenant que nous avons vidé tous nos œufs, nous pouvons aller de l’avant et couvrir le trou de drainage.

Maintenant, c’est important parce que si nous ne mettons pas l’intérieur de l’incubateur, nous pouvons obtenir une énorme évaporation de tout ce qui reste de l’albumine. Et puis un œuf qui est sec est un œuf qui est mort. Nous allons donc prendre à peu près la même taille de ruban adhésif et le placer sur le trou et nous n’aurons pas à nous soucier d’entrer à nouveau dans ce trou.

Dans certains cas, si vous décidez d’essayer d’égoutter plus d’albumine d’un œuf, une fois ouvert, ce trou agit comme une zone un peu scellée dans laquelle vous pouvez ensuite insérer une aiguille et vous ne perdrez pas beaucoup d’albumine. D’accord, n’est-ce pas ? D’accord, alors maintenant, nous allons aller de l’avant et couvrir les œufs avec un morceau de ruban adhésif de bonne taille.

Et je compare un peu cela à mettre un morceau de ruban adhésif sur un ballon avant d’y mettre une petite épingle. Ce qui est cool, c’est que le ballon n’éclate pas et dans ce cas, un peu de ruban adhésif sur l’œuf. L’œuf ne se fissure pas à plusieurs endroits, puis la fenêtre peut alors être scellée, puis lorsque la fenêtre se ferme, parce que nous l’avons utilisé avec du ruban adhésif, cela crée en quelque sorte un joli petit joint et nous n’avons pas à nous soucier de l’évaporation.

Vous pouvez donc voir que la taille du ruban est probablement la plus grande que j’ai coupée jusqu’à présent, mais même dans ce cas, je vais aller de l’avant et l’étirer un peu et vraiment tirer dessus, un peu de tension là et le placer sur l’œuf. Et je vais venir à l’arrière ici et l’étirer très soigneusement sur l’œuf afin qu’il n’y ait pas de plis juste au-dessus de ma fenêtre. Et vous pouvez réinitialiser un peu la bande.

C’est, ce n’est pas tellement collant que vous devez vous inquiéter. Une fois que c’est coincé, c’est coincé. Et vous pouvez voir cette zone générale ici, c’est là que je vais aller de l’avant et couper la fenêtre.

D’accord, maintenant que nous avons du ruban adhésif sur tous les œufs, nous pouvons aller de l’avant et découper une fenêtre sur le dessus. Cela peut être la partie la plus difficile et c’est souvent là que vous perdrez la majorité de vos ovules. Je vais donc juste aller de l’avant et bien essuyer mes ciseaux avec de la gaze sur laquelle il y avait de l’alcool, puis aller de l’avant et le sécher.

L’alcool sèche à peu près tout seul, mais vous ne voulez pas que l’alcool pénètre directement dans l’œuf. Je vais donc simplement aller au milieu de l’endroit où se trouve la bande et, encore une fois, utiliser ce mouvement dans le sens des aiguilles d’une montre dans le sens inverse des aiguilles d’une montre jusqu’à ce que je l’entende craquer un peu. Et puis je sais que ma lame est dedans.

Ensuite, j’ai envie de sortir mes ciseaux pour qu’ils soient presque à plat contre la surface de l’œuf. Et puis je fais juste de minuscules cisailles jusqu’à ce que je puisse y mettre tout le morceau de ciseaux. Et je vais revenir dans l’autre sens une fois que j’aurai fait environ un demi-cercle et que je ne veux pas terminer le cercle parce que je veux une fenêtre, mais je peux ensuite aller de l’avant et ouvrir l’œuf.

Et à l’heure actuelle, il semble qu’ils aient à peu près l’âge auquel je m’attendais, qu’ils n’aient pas beaucoup de vaisseaux sanguins, mais qu’il y ait un peu de sang autour de l’endroit où se trouve l’embryon, principalement de la région du lion où le sang a maintenant commencé et le rythme cardiaque a disparu. Alors je vais juste fermer ça, le laisser reposer sur le dessus comme ça et revenir et je vais aller de l’avant et fermer les fenêtres. Et encore une fois, juste, juste à plat vers la surface et retour dans l’autre sens.

Et d’accord, nous avons donc quelques bulles ici et il s’avère que l’embryon est sur le côté. Maintenant, il y a deux choses que nous pouvons faire dès maintenant. Si nous avons beaucoup d’œufs et que nous ne nous soucions pas d’utiliser chacun d’entre eux, nous pouvons aller de l’avant et jeter ceci.

Ou ce que nous pouvons faire, c’est fermer la fenêtre et la régler de manière à ce que l’embryon flotte en quelque sorte vers le haut où nous le voulons à nouveau. Et au moment où nous y arriverons dans nos manipulations, il se peut qu’il soit là où nous le voulons. Sinon, nous pouvons nous en débarrasser à ce moment-là.

Donc, ce que j’ai fait ici, c’est simplement le régler à un angle. Vous aurez un peu d’écoulement d’albumine, mais cela aidera cet embryon à revenir là où il doit être. D’accord, maintenant que nous avons toutes ces fenêtres, nous, nous devons nous assurer qu’elles sont fermées et nous voulons simplement qu’elles soient fermées avant de faire des manipulations.

Ensuite, nous pouvons refermer l’œuf. Mais si nous avons une fenêtre ouverte, parfois le joug peut glisser. Si vous savez que l’œuf bascule un peu lorsque vous marchez d’une pièce à l’autre, vous ne voulez pas que tout tombe.

Donc, tout ce que je fais, c’est couper un autre morceau de ruban en plastique d’un millimètre de long, ou je suis désolé, d’un millimètre de large, probablement d’environ trois, deux ou trois millimètres et une longueur de ruban adhésif. Et j’aime bien le mettre là juste au milieu. Et si je peux le tirer vers le bas devant l’œuf, alors cela le rend en quelque sorte serré.

Et vous pouvez voir où la fenêtre s’insère, là où se trouvait l’autre ruban, où nous avons coupé la fenêtre et cela la rend assez étanche pour cette fois. Je veux dire, nous allons aller de l’avant et faire quelques manipulations en une minute, donc il n’a pas besoin d’être entièrement étanche. C’est ainsi que vous préparez et fenêtrez vos œufs.

Alors bonne chance pour vos expériences.