Oeufs Poulet fenêtrage d'études du développement

Bienvenue au laboratoire Kramer. Je suis Matt Korn, du département de neurobiologie et de comportement de l'Université de Californie à Irvine. Aujourd'hui, je vais vous montrer comment préparer des œufs de poulet pour diverses manipulations, notamment le placement de billes, l'injection de colorants ou l'exploration in ovo.

Alors, sans plus tarder, commençons. Très bien, nous allons donc procéder au nettoyage de l'œuf. La raison en est qu'il peut y avoir de nombreuses substances présentes dans l'incubateur.

Nous allons sceller ceci avec du ruban adhésif. Nous ne voulons pas que de petits débris pénètrent autour de l'endroit où la fenêtre sera pratiquée pour accéder à l'œuf, ce qui augmenterait le risque que l'embryon meure d'ici le moment où nous souhaitons l'extraire. Donc, comme vous l'avez vu depuis l'incubateur, les œufs sont placés avec le côté le plus gros orienté vers le haut.

Ce que nous allons faire, c'est prendre l'œuf et simplement le tourner sur le côté. Cela va permettre deux choses. Premièrement, notre fenêtre se trouvera juste ici, et deuxièmement, l'embryon doit remonter à la surface afin que nous puissions effectuer tous types de manipulations.

Je vais donc sortir quelques œufs du support qui se trouvait dans l'incubateur pour les placer dans un porte-œufs en carton. Il s'agit en réalité de l'élément fourni dans la boîte lors de la livraison des œufs. Ainsi, pour aujourd'hui, nous allons simplement l'utiliser pour maintenir les œufs en place.

Maintenant, l'arrangement est une question de choix. J'aime procéder ainsi parce que j'ai accès à tous les œufs à tout moment, et aucun ne se touche. Au cas où j'en trouverais un fissuré ou abîmé, et que je le laissais tomber, ils auraient tous un peu d'espace entre eux.

Je vais donc prendre mon pansement en gaze ici et en extraire un joli tas comme celui-ci, puis le diviser en deux. Je vais prendre de l'alcool à 70 % ici et le verser jusqu'à ce que je sente le fond devenir légèrement humide. C'est parce que je vais utiliser tout ce tas pour nettoyer la surface de tous les œufs.

Ensuite, je vais simplement enlever quelques gouttes du haut, en me concentrant bien sur la partie supérieure, mais en pratique en couvrant presque toute la surface de l'œuf. Une fois cette étape terminée, l'alcool s'évapore rapidement, et nous pouvons alors appliquer du ruban adhésif. Le ruban adhère bien, et d'ici la fin de la pose d'un ensemble, le premier est généralement sec, ce qui nous permet de passer à l'étape suivante de la préparation de l'œuf.

Encore une fois, remettez cela dans la poubelle et nous sommes prêts à passer à l'étape suivante. Maintenant que tous nos œufs ont été frottés avec de l'alcool, nous pouvons procéder à la création d'un trou d'écoulement du côté large de l'œuf, à la base de celui-ci. Cela nous permettra d'extraire un peu d'albumen, car si nous ne retirons pas l'albumen, l'embryon ne prend pas correctement sa position.

Nous ne pouvons effectuer aucune manipulation. Il s'agit donc simplement pour moi de prendre une lame et ce ruban en plastique. Il est légèrement élastique, ce qui est idéal.

Non seulement cela nous permet d'élargir un peu plus un trou s'il est légèrement plus grand que souhaité, mais lorsque nous recouvrirons entièrement l'œuf, nous devrons étirer ce matériau. Ainsi, la zone où se trouvera la fenêtre sera complètement recouverte. Je vais donc simplement découper un morceau comme ceci, puis réaliser une bande d'environ un millimètre.

Ensuite, à partir de cela, je peux obtenir un morceau de ruban d’environ un millimètre carré. Puis, à partir de cela, je vais simplement le placer juste au-dessus et à gauche de la date. Placez-le exactement là, et vous pouvez le voir.

Il adhère très bien. Ensuite, je peux revenir au ruban que j'ai déjà préparé, couper un autre morceau de ruban d'un millimètre. Et encore, le placer simplement à gauche du chiffre indiqué, qui correspond en réalité au sommet de l'œuf.

Maintenant que nous l'avons tourné sur le côté, il est à droite. Et encore un autre morceau ici. Je ne porte pas de gants car le fait d'en porter ferait coller ce ruban aux gants, et j'ai lavé mes mains.

Je ne suis pas vraiment préoccupé par toute autre contamination de l'agent actif à ce stade. Je vais donc prendre une paire de ciseaux à pointe fine. Je vais pénétrer au centre de l'endroit où j'ai placé le ruban adhésif et je vais simplement tourner dans un mouvement horaire puis anti-horaire jusqu'à ce que je perce légèrement.

Vous verrez qu'il y a un petit trou à cet endroit. Ce trou n'a pas besoin d'être très grand, car une fois que nous aurons inséré cette seringue, elle agrandira suffisamment l'orifice. Cela permet d'éviter d'insérer directement une aiguille pour tenter de briser l'œuf, ce qui entraîne souvent la rupture complète d'un côté de l'œuf.

Ensuite, nous ne pouvons plus utiliser l'œuf. Très bien, maintenant je vais procéder au vidage de l'œuf. Nous avons ce petit trou sur le côté, et je vais utiliser cette seringue de 10 millilitres ainsi qu'une aiguille de calibre assez grand pour extraire l'albumen.

Maintenant, je veux environ trois ou quatre millilitres, certainement plus de trois, mais pas beaucoup plus de quatre virgule cinq ou cinq. Cela permettra à notre embryon, qui se trouve actuellement au sommet, de s'éloigner légèrement de la coquille. Ensuite, nous pourrons effectuer nos manipulations.

En pénétrant selon un angle de 45 degrés, je me retrouve sous le jaune. Ensuite, je veux simplement tourner un peu vers la droite afin de glisser discrètement en dessous, et on peut sentir légèrement la pointe de l'aiguille toucher le fond de l'œuf. Je vais donc procéder à l'extraction d'environ trois ou quatre microlitres, et cela sort assez proprement.

Je vais aller de l'avant et mettre cet albumine dans mon seau de taille ici, et maintenant je peux continuer avec les autres œufs. Très bien, donc je vais poursuivre. Et vous verrez ici que le trou que j'ai fait pour l'écoulement est un peu plus grand que ce que je souhaiterais, mais cela s'avère être acceptable.

Ce qui me préoccupe, c'est que lorsque j'enfonce l'aiguille, je ne la casse pas davantage. Je vais donc procéder ainsi. Bon, je vois déjà que l'œuf présente une petite fêlure.

Maintenant, de petites fissures sont acceptables, mais vous devez vous inquiéter lorsqu'elles s'étendent à un autre plan de l'œuf. Et c'est le cas ici. Vous pouvez le voir à partir du trou.

Il s'étend presque jusqu'en haut. Et en fait, c'est précisément là que sera placée notre fenêtre. Malheureusement pour cet œuf, nous allons devoir le mettre de côté et le jeter.

Et il n'y a rien de particulier à jeter cela. Vous n'avez pas besoin de rédiger un protocole spécifique ou quoi que ce soit. Il suffit de le mettre directement dans le seau de déchets.

Nous utilisons ces poubelles noires pour les désigner comme contenant des déchets animaux, mais autrement, cela a déjà été pris en charge. Nous pouvons passer à l’œuf suivant. Très bien, maintenant que nous avons vidé tous nos œufs, nous pouvons procéder à la fermeture du trou d’évacuation.

Or, ceci est important car, si nous ne le faisons pas à l'intérieur de l'incubateur, nous pouvons assister à une évaporation considérable de ce qui reste de l'albumine. Et un œuf sec est un œuf mort. Nous allons donc prendre un morceau de ruban d'environ la même taille et le placer au-dessus du trou, et nous n'aurons plus à nous soucier de devoir réintervenir dans ce trou.

Dans certains cas, si vous décidez de vouloir extraire davantage d'albumine d'un œuf une fois qu'il est ouvert, ce trou forme une zone partiellement scellée dans laquelle vous pouvez insérer une aiguille sans perdre beaucoup d'albumine. D'accord, est-ce que cela fonctionne ? Très bien, nous allons maintenant recouvrir les œufs avec un morceau de ruban adhésif de taille appropriée.

Et j'assimile cela à la pose d'un morceau de ruban adhésif sur un ballon avant d'y insérer une petite épingle. Le point intéressant, c'est que le ballon n'éclate pas, tout comme, dans ce cas, un petit morceau de ruban sur l'œuf. L'œuf ne se fissure pas à plusieurs endroits, puis la fenêtre peut alors être scellée. Ensuite, lorsque la fenêtre se ferme, grâce au ruban utilisé, cela crée une bonne petite étanchéité, et nous n'avons plus à nous soucier de l'évaporation.

Vous pouvez ainsi voir que la taille du ruban est probablement la plus grande que j’aie découpée jusqu’à présent, mais même dans ce cas, je vais tout de même l’étirer légèrement, en tirant un peu dessus avec une légère tension, puis le positionner sur l’œuf. Je vais ensuite passer à l’arrière et l’étirer très soigneusement sur l’œuf afin qu’il n’y ait aucun pli exactement là où se trouvera ma fenêtre. Vous pouvez ajuster légèrement le ruban.

Ça ne colle pas tant que ça, donc vous n'avez pas à vous inquiéter. Une fois que c'est collé, c'est collé. Et vous pouvez voir que cette zone générale ici est là où je vais procéder à la découpe de la fenêtre.

Très bien, maintenant que nous avons appliqué du ruban adhésif sur tous les œufs, nous pouvons procéder à la découpe d'une fenêtre sur le dessus. Cette étape peut être la plus délicate et c'est souvent à ce stade que vous perdrez la majorité de vos œufs. Je vais donc simplement bien essuyer mes ciseaux avec un morceau de gaze imprégnée d'alcool, puis les sécher soigneusement.

L'alcool s'évapore pratiquement seul, mais vous ne voulez pas que l'alcool pénètre directement dans l'œuf. Je vais donc simplement insérer la lame au milieu de l'endroit où se trouve le ruban, et encore une fois, utiliser ce mouvement dans le sens horaire puis antihoraire jusqu'à ce que j'entende un petit craquement. À ce moment-là, je sais que ma lame est bien en place.

Ensuite, je veux un peu éloigner mes ciseaux afin qu’ils soient presque à plat contre la surface de l’œuf. Puis je fais de petites incisions jusqu’à pouvoir insérer complètement la lame des ciseaux à l’intérieur. Une fois que j’ai réalisé environ un demi-cercle, je repars en sens inverse, sans fermer complètement le cercle, car je souhaite conserver une fenêtre, puis je peux simplement ouvrir l’œuf.

Et pour l'instant, ils semblent avoir l'âge que je leur prévoyais, ne possèdent pas beaucoup de vaisseaux sanguins, mais il y a un peu de sang autour de l'embryon, provenant principalement de la région du delion, où le flux sanguin a commencé et où les battements cardiaques ont cessé. Je vais donc simplement fermer cela, le laisser reposer ainsi en surface, faire le tour à nouveau, puis je vais fermer les fenêtres. Et encore une fois, juste à plat contre la surface, puis en sens inverse.

Et bien, nous avons ici quelques bulles et il s'avère que l'embryon est situé sur le côté. Nous avons maintenant deux possibilités. Si nous disposons de suffisamment d'ovules et que nous ne sommes pas préoccupés par l'utilisation de chacun d'entre eux, nous pouvons simplement éliminer celui-ci.

Ou bien, nous pouvons fermer la fenêtre et simplement régler la position pour que l'embryon remonte en flottant vers le haut, là où nous le souhaitons à nouveau. Et d'ici que nous intervenions lors de nos manipulations, il pourrait se trouver à l'endroit voulu. Sinon, nous pouvons l'écarter à ce moment-là.

Ce que j'ai fait ici, c'est simplement de l'incliner selon un angle. Vous aurez un léger écoulement d'albumine, mais cela aidera l'embryon à revenir à l'endroit où il doit être. Bien, maintenant que nous avons toutes ces fenêtres, nous devons nous assurer qu'elles sont bien fermées, et nous voulons qu'elles le restent avant d'effectuer la moindre manipulation.

Ensuite, nous pouvons procéder à la reconstitution de l'œuf. Toutefois, si une ouverture est présente, le jaune peut parfois s'échapper. Si vous savez que l'œuf bascule légèrement lorsque vous vous déplacez d'une pièce à l'autre, vous ne voulez pas qu'il s'écoule entièrement.

Donc, je coupe simplement un autre morceau de ruban plastique d'environ deux ou trois millimètres de long et d'un millimètre de large. J'aime bien le placer au milieu. Et si je peux le tirer vers le bas devant l'œuf, cela le tend un peu.

Et vous pouvez voir où s'insère la fenêtre, exactement là où se trouvait l'autre bande adhésive, là où nous avons découpé la fenêtre, ce qui assure une bonne étanchéité pour le moment. Je veux dire, nous allons bientôt effectuer quelques manipulations, donc il n'est pas nécessaire que ce soit complètement hermétique. Voilà donc comment vous préparez et ouvrez une fenêtre dans vos œufs.

Bonne chance avec vos expériences.