Name: Oeufs Poulet fenêtrage détudes du développement (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 1 s
Description: Découvrez une méthode optimisée de préparation d'œufs de poule pour la cartographie du destin cellulaire en neurobiologie. Cette technique améliore la survie embryonnaire et permet des manipulations in ovo fiables pour la recherche en développement.

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1. Retirer les oeufs de l&#39;incubateur <ol><li> Maintenir à 37 ° C avec une humidité relative de 60% fixé au-dessus. </li><li> Retirer les oeufs, tourner les œufs à 90 ° de telle sorte que la grande base est horizontale. </li></ol> 2. Swab pour stériliser les oeufs <ol><li> Saturer une pile de gaze non stérile avec de l&#39;éthanol à 70%. </li><li> Utilisez deux à trois pièces au coton-tige à 5 œufs. Jeter lors de la gaze est sale. </li></ol> 3. Préparation du site retrait albumine <ol><li> Couper et placer un 1 &quot;x 1&quot; morceau de ruban adhésif 3M juste à gauche de la base afin de protéger la zone où l&#39;albumine sera tirée. </li></ol> 4. Suppression de l&#39;albumine <ol><li> Utilisez le point d&#39;une paire de ciseaux pour faire un petit trou dans le milieu de la bande. </li><li> En utilisant une seringue de 10 cc avec une jauge de 18, 1 pouces aiguille, lentement forage l&#39;aiguille dans le trou fait par les ciseaux. </li><li> Disque de l&#39;aiguille à un angle de 45 ° C vers le bas de l&#39;œuf. </li><li> Inclinez l&#39;aiguille vers le centre et dresser 3 à 4 ml d&#39;albumine. </li></ol> 5. Fenêtrage <ol><li> Coupez un 3 &quot;x 3&quot; morceau de ruban de plastique et l&#39;étirer pour tenir sur le sommet de l&#39;œuf. Étendre les coins de la place autour des extrémités arrondies de la surface horizontale des œufs, en faisant attention à ne pas tirer trop fort. Tirez sur la bande de sorte qu&#39;il est bien serré contre la surface des œufs sans plis. </li><li> En utilisant une paire d&#39;arêtes droites 4 ciseaux de dissection &quot;, tordre un trou dans le centre du fond de la zone où la bande a été placée. Lentement guider la lame inférieure des ciseaux dans l&#39;oeuf étant sûr de garder les astuces contre l&#39;intérieur de le shell. directe de la lame vers le bas et lentement commencer à couper la coquille. Procéder de façon anti-horaire, s&#39;arrêtant juste avant d&#39;atteindre le haut au centre. Enlever la paire de ciseaux et répétez va dans le sens opposé jusqu&#39;à ce que seul un petit peu de la oeuf reste attaché. Vérifiez que l&#39;ovule est fécondé. Fermez la fenêtre. </li></ol> 6. Fermeture, de réouverture et d&#39;étanchéité de l&#39;œuf. <ol><li> Coupez environ un 2-3 &quot;de long par 1 / 2&quot; ruban adhésif large et fermer la fenêtre pour qu&#39;elle s&#39;ajuste dans le trou qui a été coupé. Prenez un autre de 1 x 1 &quot;morceau de ruban adhésif et sceller le trou par lequel l&#39;œuf a été drainé. Utilisez une pince à rouvrir l&#39;œuf pour faire toutes les manipulations. Lorsque vous êtes prêt à retourner les œufs dans l&#39;incubateur, couper un morceau de la bande qui est assez grande pour sceller les fenêtres et couvrir toute la surface horizontale de l&#39;œuf. </li></ol>

<ol><li>Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 224, 138-151 (2000).</li>
<li>Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 269, 26-35 (2004).</li>
<li>Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. Dev Biol. 295, 76-89 (2006).</li>
<li>Huffman, K. J., Cramer, K. S. Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).</li>
<li>Krull, C. E. Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).</li>
<li>Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).</li>
</ol>

Cette méthode permet des temps de survie à long suivantes manipulations expérimentales. Par exemple, la teinture-étiquetage études ont permis la survie à E10 ou tard dans une étude de la cartographie sort (1). En outre, il a été utilisé pour des études électroporation in ovo qui fournissent l&#39;altération des niveaux d&#39;expression des gènes et de développement requis pour procéder à des étapes ultérieures de développement (2-6). Cette technique de fenêtrage peut être utilisé en combinaison avec une procédure qui nécessite de survie apr...

<table><tbody><tr><td>Incubateur rotatif</td><td> </td><td>Profi</td><td></td><td>Maintenir à 37&amp;deg; C avec une humidité relative réglée à plus de 60 %</td></tr><tr><td>Éthanol à 70 %</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>Compresse</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>Ruban plastique 3M</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>Seringue de 10 cc</td><td> </td><td></td><td></td><td>1/œuf</td></tr><tr><td>Aiguilles de 18G</td><td> </td><td></td><td></td><td>Aiguille de 1&amp;#189; pouce, 1 par seringue</td></tr><tr><td>Ciseaux de dissection</td><td> </td><td></td><td></td><td>Lames droites effilées de 4&quot;</td></tr><tr><td>Œufs fécondés</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr></tbody></table>

oeufs poulet fenêtrage d&#39;études du développement

Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies

L&#39;étude du développement a été grandement facilitée par l&#39;utilisation de l&#39;embryon de poulet comme modèle expérimental. La facilité d&#39;accès de l&#39;embryon a permis de cartographier les expériences destinées cellulaires en utilisant plusieurs méthodes, y compris les poussins de caille chimères et d&#39;étiquetage de teinture focale. En outre, il permet de perturbations moléculaires de plusieurs types, y compris le placement de protéines billes recouvertes et l&#39;introduction d&#39;ADN plasmidique en utilisant l&#39;électroporation in ovo. Ces expériences ont fourni des données importantes sur le développement des systèmes nerveux central et périphérique. Pour beaucoup de ces études, il est nécessaire d&#39;ouvrir la coquille et se refermer sans perturber la croissance de l&#39;embryon. L&#39;embryon peut être examiné à étapes successives de développement par la réouverture de la coquille. Bien qu&#39;il existe plusieurs excellentes méthodes pour l&#39;ouverture des oeufs de poule, dans cet article, nous démontrons une méthode qui a été optimisé pour les durées de survie longue. Dans cette méthode, l&#39;œuf repose sur son côté et une petite fenêtre est coupé dans la coquille. Après la procédure expérimentale, le shell est utilisé pour couvrir l&#39;œuf pour la durée de son développement. Effacer ruban de plastique recouvrant la coquille protège l&#39;embryon et aide à retenir l&#39;hydratation pendant le reste de la période d&#39;incubation. Cette méthode a été utilisée à partir de deux jours d&#39;incubation et a permis la survie à travers les âges mûrs embryonnaire.

La facilité d&#39;accès de l&#39;embryon a permis de cartographier les expériences destinées cellulaires en utilisant plusieurs méthodes, y compris les poussins de caille chimères et d&#39;étiquetage de teinture focale. Dans cet article, nous démontrons une méthode de préparation d&#39;oeuf qui a été optimisé pour les temps de survie longue.

Oeufs Poulet fenêtrage d&#39;études du développement

L'étude du développement a été considérablement facilitée par l'utilisation de l'embryon de poulet comme modèle expérimental. La facilité d'accès à l'embryon a...

Bienvenue au laboratoire Kramer. Je suis Matt Korn, du département de neurobiologie et de comportement de l'Université de Californie à Irvine. Aujourd'hui, je vais vous montrer comment préparer des œufs de poulet pour diverses manipulations, notamment le placement de billes, l'injection de colorants ou l'exploration in ovo.Alors, sans plus tarder, commençons. Très bien, nous allons donc procéder au nettoyage de l'œuf. La raison en est qu'il peut y avoir de nombreuses substances présentes dans l'incubateur.Nous allons sceller ceci avec du ruban adhésif. Nous ne voulons pas que de petits débris pénètrent autour de l'endroit où la fenêtre sera pratiquée pour accéder à l'œuf, ce qui augmenterait le risque que l'embryon meure d'ici le moment où nous souhaitons l'extraire. Donc, comme vous l'avez vu depuis l'incubateur, les œufs sont placés avec le côté le plus gros orienté vers le haut.Ce que nous allons faire, c'est prendre l'œuf et simplement le tourner sur le côté. Cela va permettre deux choses. Premièrement, notre fenêtre se trouvera juste ici, et deuxièmement, l'embryon doit remonter à la surface afin que nous puissions effectuer tous types de manipulations.Je vais donc sortir quel

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Research

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JoVE Journal

Biology

Biologie

Une approche pour l'analyse des migrations et le destin éventuel de cellules aviaires de la crête neurale chez la caille-poulet embryons chimériques est décrite. Cette méthode est une technique simple et directe pour le traçage des cellules de la crête neurale au cours de la migration et la différenciation qui seraient autrement difficiles à distinguer au sein d'un embryon de poulet non manipulée.

Analyse de la migration des crêtes neurales et la différenciation par la Croix-espèces transplantation

Dans cette vidéo, nous décrivons une technique pour ouvrir la coquille d’un œuf de poule fécondé afin d’exposer sa membrane chorioallantoïdienne ou CAM portant un réseau de vaisseaux sanguins ramifiés. Le CAM exposé peut être utilisé pour la modélisation tumorale in ovo.

Fenêtrage d’œuf : une méthode d’ouverture de la coquille d’œuf de poule fécondée pour exposer la vascularisation de la membrane chorioallantoïde

Il peut être difficile de visualiser et d’accéder à l’embryon de poulet pendant le développement. Nous avons développé une méthode ex ovo qui est simple, rentable et qui peut facilement être utilisée dans une salle de classe ou un cadre de recherche. Cette méthode permet d’accéder à l’embryon dans les derniers stades du développement embryonnaire (HH 40).

Optimisé Ex-ovo Culture des embryons de poulet aux stades avancés de développement

Ce protocole décrit trois méthodes sur la façon d’obtenir et d’utiliser des embryons de poulet âgés de 5 à 8 jours et leur membrane chorio-allantoïdienne (CAM) comme modèle in vivo pour étudier l’imagerie par ultrasons à contraste amélioré et l’administration de médicaments médiée par microbulles.

La préparation d’embryons ex ovo de poulet et de vaisseaux membranaires chorio-allantoïdiens comme modèle in vivo pour l’imagerie par ultrasons à contraste amélioré et les études d’administration de médicaments médiées par microbulles

Il s’agit d’une méthode efficace pour dépister les suppresseurs ou les facteurs de métastases cancéreuses. Les cellules, transduites avec une bibliothèque d’expressions, sont injectées dans le système vasculaire de la membrane chorioallantoïque du poulet pour former des colonies métastatiques. Les colonies ayant un caractère invasif diminué ou accru sont excisées, élargies, réinjectées pour confirmer leur phénotype et, enfin, analysées à l’aide d’un séquençage à haut débit.

Découverte de régulateurs métastatiques à l’aide d’un modèle de membrane chorioallantoïque intravitale rapide et quantitative du poussin

Les embryons de poulet, en tant que modèle de développement classique, sont utilisés dans notre laboratoire pour évaluer les cardiotoxicités développementales après une exposition à divers contaminants environnementaux. Les méthodes d’exposition et les méthodes d’évaluation morphologique/fonctionnelle établies sont décrites dans ce manuscrit.

Utilisation de l’embryon de poulet comme outil puissant dans l’évaluation des cardiotoxicités développementales

Une méthodologie robuste a été développée pour mener des essais de recherche sur l’alimentation en utilisant des œufs de chair commerciaux non incubés pour tester la capacité des composés naturels et synthétiques, dans ce cas, le nicotinamide riboside, à influencer le développement et la croissance musculaires.

À Ovo Alimentation des œufs de poulets de chair commerciaux: une méthode précise et reproductible pour affecter le développement et la croissance musculaires

Le test des billes trempées implique l’administration ciblée de réactif de test à n’importe quel moment du développement pour étudier la régulation de la différenciation cellulaire et de la morphogenèse. Un protocole détaillé, applicable à tout modèle animal expérimental, pour préparer trois types différents de perles trempées et les implanter dans l’interdigit d’un embryon de poulet est présenté.

Analyse de la différenciation cellulaire, de la morphogenèse et de la modelation au cours de l’embryogenèse du poulet à l’aide du test des perles trempées

Nous avons utilisé des techniques standard de réponse auditive du tronc cérébral (ABR) et les avons appliquées à des poulets nouveau-nés, un modèle aviaire précoce pour la fonction auditive. Le protocole décrit en détail les techniques de préparation animale et d’acquisition ABR, avec des étapes qui pourraient se traduire par d’autres modèles aviaires ou rongeurs.

Évaluation de la réponse auditive du tronc cérébral chez les nouveau-nés de poulet

Le poussin est un organisme modèle rentable, accessible et largement disponible pour une variété d’études. Ici, une série de protocoles est détaillée pour comprendre les mécanismes moléculaires sous-jacents au développement et à la régénération de l’oreille interne aviaire.

Méthodes in ovo et ex ovo pour étudier le développement de l’oreille interne aviaire

Découvrez une méthode optimisée de préparation d'œufs de poule pour la cartographie du destin cellulaire en neurobiologie. Cette technique améliore la survie embryonnaire et permet des manipulations in ovo fiables pour la recherche en développement.

Oeufs Poulet fenêtrage d'études du développement

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