Name: Placer du facteur de croissance des billes recouvertes sur les premiers embryons de poulet scène (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: Découvrez la préparation in ovo pour étudier le destin cellulaire chez les embryons de poulet E2.5. Cette méthode utilise des billes imbibées de facteurs de croissance pour explorer la différenciation tissulaire en neurobiologie.

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1. Retirer les oeufs de l&#39;incubateur A E2-2.5 (~ 17 Saint HH), retirez les oeufs et les préparer en conséquence. Ils peuvent être travaillés immédiatement ou retournés à la couveuse pendant quelques heures. Les œufs peuvent être placés à la température ambiante en toute sécurité pendant plus d&#39;une heure. Les œufs peuvent rester en dehors, pour la durée des manipulations. Parfois, ils peuvent prendre une heure ou plus. Remarque: Plus ils restent longtemps à température ambiante, moins ils sont susceptibles de survivre. 2. Préparation de l&#39;encre de Chine <ol><li> Préparer une solution fraîche de l&#39;encre de Chine 4% dans du PBS stérile. </li><li> Remplir une seringue de 3 ml avec la solution. </li><li> Placer une aiguille de calibre 27 ½, pouce sur la seringue. </li><li> En utilisant une paire de pinces hémostatiques, plier l&#39;aiguille à un angle de 90 °. </li></ol> 3. Ouverture des œufs et l&#39;injection d&#39;encre de Chine <ol><li> En utilisant une paire de forceps, peler la cassette et ouvrez la fenêtre, en le fixant en utilisant le verso de la bande sur la face arrière de l&#39;œuf. </li><li> Guide de l&#39;aiguille inclinée jusqu&#39;à ce qu&#39;elle se situe juste en dessous de l&#39;embryon. Placer l&#39;aiguille sous le disque flottant assure que l&#39;encre, qui est toxique pour l&#39;embryon, ne viendra pas en contact direct. </li><li> Vous devez seulement d&#39;injecter suffisamment d&#39;encre pour créer un contraste confortable. Cela est généralement inférieur à mL ¼. </li></ol> 4. L&#39;ouverture du tube neural <ol><li> Prenez une paire de ciseaux de dissection fine et couper la fine membrane qui se trouve sur le dessus, ou parfois autour de l&#39;embryon. </li><li> Prenez une paire de pince 55 ou une sonde de tungstène et d&#39;ouvrir le tube neural d&#39;arrière en avant. Assurez-vous que l&#39;ouverture est assez grand pour placer un cordon en elle. </li></ol> Remarque: Selon l&#39;âge, une sonde de fin de tungstène peuvent être utilisés pour faire la même chose. 5. Récupération d&#39;un revêtement en acrylique perles héparine <ol><li> En utilisant une paire de pince 55, de trouver une perle intacte dans la solution. Laissez le cordon de s&#39;attacher à la pointe, fermer lentement la pince. </li><li> Retirer le cordon de la solution et l&#39;amener plus sur le sommet de l&#39;œuf. </li><li> Une fois que la bille est hors de sa solution, il ne sera probablement pas se détacher jusqu&#39;à ce qu&#39;il ait été placé dans l&#39;albumine. </li></ol> 6. Placer le cordon de <ol><li> Une fois la perle a été placé sur le dessus de la zone cible, l&#39;utilisation d&#39;une sonde de tungstène pour le guider vers le cerveau antérieur ou le fixer dans le cerveau postérieur. </li><li> Ajouter quelques gouttes de PBS à l&#39;aide d&#39;une pipette 10 ul. </li></ol> 7. Fermeture de l&#39;oeuf <ol><li> Fermer l&#39;œuf à l&#39;aide du petit morceau de ruban adhésif pour fermer la fenêtre. </li><li> Sceau de l&#39;œuf, selon le protocole apprêter, disponible à <a href="http://jove.com/index/Details.stp?ID=306" target="_blank">http://jove.com/index/Details.stp?ID=306</a> . </li></ol>

<ol><li>Korn, M. J., Cramer, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Windowing+Chicken+Eggs+for+Developmental+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22Jounal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies.</a> Jounal of Visualized Experiments. 8, 

 <a target="_blank" href="http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=306">http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=306</a> (2007).</li>
<li>Crossley, P. H., Martinez, S., Ohkubo, Y., Rubenstein, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordinate+expression+of+Fgf8%2C+Otx2%2C+Bmp4%2C+and+Shh+in+the+rostral+prosencephalon+during+development+of+the+telencephalic+and+optic+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Coordinate expression of Fgf8, Otx2, Bmp4, and Shh in the rostral prosencephalon during development of the telencephalic and optic vesicles.</a> Neuroscience. 108, 183-206 (2001).</li>
<li>Alexandre, P., Bachy, I., Marcou, M., Wassef, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+and+negative+regulations+by+FGF8+contribute+to+midbrain+roof+plate+developmental+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Development+%22%5BJournal%5D)">Positive and negative regulations by FGF8 contribute to midbrain roof plate developmental plasticity.</a> Development . 133, 2905-2913 (2006).</li>
</ol>

Les auteurs n'ont rien à divulguer.

Selon les protéines que vous souhaitez utiliser, il existe des protocoles différents sur la façon de préparer les perles. Dans ces expériences, nous utilisons l&#39;héparine acryliques perles, mais Affi-Gel perles peuvent également être utilisés. Nous avons trouvé que les billes d&#39;héparine-acryliques sont plus faciles à manipuler dans l&#39;environnement aqueux de l&#39;albumine d&#39;oeuf. Les perles sont trempés dans 5 l de protéines nuit à 4 ° C. Perles de contrôle sont placés dans du PBS stérile jusqu&#39;au moment du placement. L&#...

<table><tbody><tr><td>Œufs</td><td>Animal</td><td></td><td></td><td>Fecondés, E2-2,5 (~ stade 17 HH)</td></tr><tr><td>Incubateur</td><td>Profi-I</td><td>Lyon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Encre de Chine</td><td>Outil</td><td>Higgins</td><td></td><td>Préparer une solution à 4 % dans du PBS stérile.</td></tr><tr><td>PBS stérile</td><td></td><td></td><td></td><td>Alternativement, un cocktail d'anticorps peut être utilisé</td></tr><tr><td>Seringue de 1 ml</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aiguilles 27G 1/2</td><td>Outil</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td>Inclinées à 90 degrés</td></tr><tr><td>Pinces</td><td>Outil</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td></td><td>taille 55</td></tr><tr><td>Pinces hémostatiques</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux de dissection</td><td>Outil</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>500086</td><td>vannas, 8,5 cm</td></tr><tr><td>Bande de Parafilm</td><td></td><td></td><td></td><td>pour sceller les œufs</td></tr><tr><td>Microsonde au tungstène</td><td>Outil</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>62091</td><td>Outil n°24. Poignée en option.</td></tr></tbody></table>

placer du facteur de croissance des billes recouvertes sur les premiers embryons de poulet scène

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

Le tube neural exprime de nombreuses protéines spécifiques dans les schémas spatio-temporelle pendant le développement. Ces protéines ont été montré pour être critique pour la détermination du destin cellulaire, migration cellulaire, et la formation des circuits neuronaux. L&#39;induction neuronale et la structuration impliquent des protéines morphogénétiques osseuses (BMP), Sonic hedgehog (SHH), facteur de croissance des fibroblastes (FGF), entre autres. En particulier, le profil d&#39;expression de Fgf8 est à proximité de régions BMP4 et SHH exprimer. Ce schéma d&#39;expression est compatible avec les interactions de développement qui facilitent la structuration dans le télencéphale. Ici, nous offrir une démonstration visuelle d&#39;une méthode dans laquelle une préparation ovo peut être utilisé pour tester les effets des FGF dans la formation du cerveau antérieur. Perles sont revêtues de protéines et placé dans le tube neural de développement à fournir une exposition prolongée. Parce que la procédure utilise de petites perles soigneusement placé, il est peu invasive et permet plusieurs perles pour être placé dans un seul tube neural. Par ailleurs, la méthode permet le développement continu de sorte que les embryons peuvent être analysées à un stade plus mature pour détecter des changements dans l&#39;anatomie et à la structuration neuronale. Ce protocole simple mais utile pour l&#39;imagerie permet en temps réel. Il fournit un moyen de faire spatialement et temporellement des changements limités à des niveaux de protéine endogène.

Une variété de facteurs de croissance et les protéines interagissent pour induire les cellules à prendre sur le destin des cellules différentes lors du développement. Ici nous démontrons l&#39;utilisation d&#39;un en préparation pour répondre ovo interactions possibles entre les différentes protéines dans le développement en plaçant des perles sur E2.5 embryons de poulet.

Placer du facteur de croissance des billes recouvertes sur les premiers embryons de poulet scène

Le tube neural exprime de nombreuses protéines selon des schémas spatiotemporels spécifiques au cours du développement. Il a été démontré que ces protéines sont essentielles pour la cellule...

Bienvenue dans le laboratoire Raburn. Je suis Matt Korn, du département de Neurobiologie et de Comportement de l'Université de Californie à Irvine. Aujourd'hui, nous allons prendre un œuf, l'ouvrir et y placer une perle imprégnée de facteur de croissance.La préparation remarquable d'un œuf nous permettra d'ajouter un facteur de croissance afin de modifier le destin d'un certain nombre de types de tissus différents à ce stade précoce du développement embryonnaire. Deux jours et demi, ou stade 17. Très bien, nous sommes donc ici au microscope.J'ai mes œufs et tous mes outils. Alors, allez-y, prenez simplement un œuf ici et vous pouvez voir où se trouve notre ruban. Joint de vitrage.J'ai ce joli petit beignet. Il est simplement fabriqué en argile artistique que l'on peut trouver dans une boutique d'art. Et je vais prendre une paire de forceps très médiocre.Ils existent depuis longtemps. Les extrémités sont assez émoussées, mais elles fonctionnent très bien pour soulever légèrement le ruban adhésif afin que la fenêtre apparaisse. Je peux les poser.Je vais simplement replier ceci et glisser l'œuf, cette fenêtre, derrière comme ceci. Maintenant, je peux le placer sous le microscope et ef

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Cette vidéo montre deux méthodes de préparation et de placer des perles, qui ont été revêtues d'un facteur de croissance, sur des explants du cortex cérébral de développement. Ces perles peuvent être utilisées pour induire l'expression des gènes dans l'espace restreint sur le développement du tissu neural comme explants prosencéphale. Les méthodes sont donnés pour l'utilisation de deux Affi-Gel perles et perles acrylique héparine.

Facteur-Coated Croissance Placement billes sur des explants du cerveau antérieur dorsal

Cette vidéo montre la nouvelle culture, une méthode par laquelle les embryons de poulet sont cultivées en dehors de l'œuf jusqu'à 24 heures. Cette méthode permet d'étudier le développement précoce (ligne primitive à 14 soms.), Une période correspondant à E7-9 chez la souris. Les applications de cette technique comprennent l'électroporation, l'hybridation in situ et immunohistochimie.

Méthode pour la culture d&#39;embryons de poulet Early ex vivo (Nouvelle Culture)

Cet article décrit l'étiquetage de surface...

Suivi des déformations des tissus morphogénétiques dans l&#39;embryon de poulet Early

Une approche pour l'analyse des migrations et le destin éventuel de cellules aviaires de la crête neurale chez la caille-poulet embryons chimériques est décrite. Cette méthode est une technique simple et directe pour le traçage des cellules de la crête neurale au cours de la migration et la différenciation qui seraient autrement difficiles à distinguer au sein d'un embryon de poulet non manipulée.

Analyse de la migration des crêtes neurales et la différenciation par la Croix-espèces transplantation

Il peut être difficile de visualiser et d’accéder à l’embryon de poulet pendant le développement. Nous avons développé une méthode ex ovo qui est simple, rentable et qui peut facilement être utilisée dans une salle de classe ou un cadre de recherche. Cette méthode permet d’accéder à l’embryon dans les derniers stades du développement embryonnaire (HH 40).

Optimisé Ex-ovo Culture des embryons de poulet aux stades avancés de développement

Ici nous rapportons le double étiquetage des cellules neurales de crête et des vaisseaux sanguins utilisant la greffe intraspecies de tube neuralde poussin GFP combinée avec l’injection intra-vasculaire de DiI. Cette technique expérimentale nous permet de visualiser et d’étudier simultanément le développement du système nerveux (entérique) dérivé de la CCN et du système vasculaire, au cours de l’organogenèse.

Double étiquetage des cellules de la crête neurale et des vaisseaux sanguins dans des embryons de poulet à l’aide de la greffe de tube neuralChick GFP et de l’injection de diI de colorant de carbocyanine

En greffant des billes imbibées de facteurs de croissance ou d’inhibiteurs spécifiques des voies de signalisation dans les embryons en développement, il est possible de tester directement leurs effets in vivo. Dans ce protocole, des billes sont greffées dans le bourgeon du membre pour déterminer les effets de ces molécules sur l’expression des gènes et la transduction du signal.

Intensification des Perles dans le développement d&#39;embryons de poulet Limbs pour identifier les voies de transduction du signal influant sur l&#39;expression des gènes

Des protocoles utilisant des barrières imperméables pour bloquer les événements d’induction entre les tissus de l’axe principal du corps et du flanc de l’embryon de poussin nécessaires à la formation des membres sont décrits. Des billes imprégnées de signaux inductifs candidats sont utilisées pour surmonter l’effet du placement de la barrière et l’analyse de l’expression des gènes le confirme.

Application des barrières imperméables combinées avec le facteur de candidat Perles Soaked pour étudier les signaux inductifs dans le poussin

Ici, nous présentons une nouvelle technique de culture d’embryons de poussin ex ovo pour l’imagerie en accéléré à l’aide de la lumière transmise et de la microscopie à fluorescence. Le sandwich de papier filtre immergé est une variante de la technique bien établie du support de papier filtre1 qui permet de cultiver des embryons de poussins entièrement immergés dans un milieu de culture liquide.

Un filtre Sandwich de papier Submergé Long terme Ovo Ex Time-lapse Imaging of Early Chick Embryons

Dans cette méthode, les tissus cardiaques embryonnaires sont chirurgicalement microdissected, dissocié, fluorescent étiquetés et implanté dans les tissus embryonnaires de l’hôte. Ceci fournit une plate-forme pour l’étude de l’organisation du développement niveau individuel ou de tissus dans des conditions hémodynamiques ectopiques, et/ou altération paracrine/juxtacrine environnements.

Microinjection-based System for In Vivo l’Implantation des Cardiomyocytes embryonnaires chez l’embryon aviaire

Le test des billes trempées implique l’administration ciblée de réactif de test à n’importe quel moment du développement pour étudier la régulation de la différenciation cellulaire et de la morphogenèse. Un protocole détaillé, applicable à tout modèle animal expérimental, pour préparer trois types différents de perles trempées et les implanter dans l’interdigit d’un embryon de poulet est présenté.

Analyse de la différenciation cellulaire, de la morphogenèse et de la modelation au cours de l’embryogenèse du poulet à l’aide du test des perles trempées

Découvrez la préparation in ovo pour étudier le destin cellulaire chez les embryons de poulet E2.5. Cette méthode utilise des billes imbibées de facteurs de croissance pour explorer la différenciation tissulaire en neurobiologie.

Placer du facteur de croissance des billes recouvertes sur les premiers embryons de poulet scène

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