Name: Canulation de la glande salivaire sous-maxillaire de la souris via le conduit de Wharton (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Apprenez la canulation du canal de Wharton chez la souris pour délivrer des cellules souches dans la glande salivaire sous-maxillaire. Cette technique de médecine régénérative visualisée au bleu de trypan offre des applications cliniques prometteuses.

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Les auteurs tiennent à remercier le Dr Ana Cotrim de consultation technique et le Dr Monzur Murshed pour l&#39;équipement. Ce travail a été en partie financée par les Instituts de recherche en santé.

1. Description du procédurale <ol><li> Voie sous-cutanée injecter 1 poids corporel ul / g de 0,5 mg / ml monohydrate de sulfate d'atropine (Cat # 11330, Fluka, USA) dans chaque souris pour empêcher les sécrétions salivaires de perturber le mouvement des perfusions. </li><li> Anesthésier chaque souris avec 1 poids corporel ul / g de 100 mg / ml de kétamine et 20 mg / ml de xylazine (Phoenix scientifique, AR, USA) solution injecté par voie intra-péritonéale (IP) </li><li> Placez la souris sur une plate-forme en plastique sur mesure en position ventrale: les incisives supérieures sont bloqués sur un fil métallique, et les incisives mandibulaires sont accrochés sur une corde élastique pour maintenir la bouche ouverte. </li><li> Utilisez une seringue à insuline avec une aiguille 29-gauge (Cat # 600145, Tyco Healthcare, MA, USA) placé à l'intérieur d'un tube de 0,58 mm de diamètre en polyéthylène (Cat # 427410, Becton Dickinson, MD, USA; Figure 2). Le tube de polyéthylène est insérée au-dessus de 5 mm de la pointe d'un manomètre 29-néedle. L'aiguille est utilisé comme un guide rigide pour déplacer le tube de polyéthylène dans le canal de Wharton. Le tube de polyéthylène est insérée 3-5 mm à l'intérieur du conduit. Notez que seul le tube de polyéthylène entre dans le canal de la glande salivaire alors que l'aiguille reste en dehors de la gaine. Injecter 50 ul de solution à 0,4% filtrée tache bleu trypan (Cat # 15250, Gibco, USA) dans la glande sous-maxillaire par le conduit de la Wharton, qui se trouve juste sous la langue. La perfusion est délivré de façon régulière avec une pression positive sur le piston de la seringue, le doigt reste sur le piston, même après la perfusion de tous ont été livrés à la glande, afin d'empêcher un reflux de la perfusion intra-orale. La solution de bleu trypan est utilisé dans la vidéo en tant que colorant pour démontrer la technique. </li><li> près avoir l'injection de la solution de bleu trypan, la souris a été euthanasiée avant la dissection. Les glandes salivaires est exposé chirurgicalement afin de déterminer dans quelle mesure les perfusions ont effectivement restés dans laglande. </li></ol> 2. Les résultats représentatifs: Après les injections ont été injectés, la souris a été disséquée chirurgicalement exposer la glande salivaire post-canule. Comme le montre l'image-2, la coloration foncée de la gaine de la Wharton fournit la preuve que la solution de bleu trypan a été infusé avec succès. <img src="/files/ftp_upload/3074/3074fig1.jpg" alt="Figure 1"> Figure 1. Canulation de la glande sous-maxillaire de la souris. <img src="/files/ftp_upload/3074/3074fig2.jpg" alt="Figure 2"> Tube de polyéthylène figure 2. Est enveloppé autour de la pointe d'une aiguille 29-gauge. L'aiguille de la seringue est utilisée comme un guide rigide pour déplacer le tube de polyéthylène dans le canal de Wharton. Le tube de polyéthylène est insérée (perforé) 3-5 mm à l'intérieur du conduit. Notez que seul le tube de polyéthylène entre dans le canal de la glande salivaire alors que l'aiguille reste en dehors de la gaine.

<ol><li>Fox, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquired+salivary+dysfunction.+Drugs+and+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Acquired salivary dysfunction. Drugs and radiation.</a> Ann N Y Acad Sci. 842, 132-137 (1998).</li>
<li>Bhide, S. A., Miah, A. B., Harrington, K. J., Newbold, K. L., Nutting, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation-induced+xerostomia%3A+pathophysiology%2C+prevention+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oncol+%28R+Coll+Radiol%29%22%5BJournal%5D)">Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, prevention and treatment.</a> Clin Oncol (R Coll Radiol). 21, 737-744 (2009).</li>
<li>Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dispersed+donor+salivary+gland+cells+are+widely+distributed+in+the+recipient+gland+when+infused+up+the+ductal+tree%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree.</a> Biotech Histochem. 84, 253-260 (2009).</li>
</ol>

Toutes les expériences ont été approuvés par le Comité de protection des animaux et de l&#39;Université étaient en conformité avec les lignes directrices du Conseil canadien de protection des animaux.

Une difficulté avec cette méthode canulation est d&#39;empêcher le reflux de la solution injectée. Même si la solution de bleu trypan a temporairement migré dans la glande salivaire succès, la sécrétion de salive pourrait interférer avec les perfusions et provoquer le reflux de la solution de bleu trypan hors de la glande. Par mesure de précaution, en plus d&#39;utiliser l&#39;atropine pour inhiber la sécrétion de la salive, la canule polyéthylène doit rester dans le conduit de Wharton et le piston de la seringue mainte...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Type </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires (optionnel) </td></tr><tr><td> L&#39;atropine </td><td> Drogue </td><td> Fluka </td><td> 11330 </td><td> Pour inhiber la sécrétion de la salive </td></tr><tr><td> La kétamine </td><td> Drogue </td><td> Phoenix scientifique </td><td></td><td> Sédation </td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> Drogue </td><td> Phoenix scientifique </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Tuyaux en polyéthylène (0,58 mm de diamètre) </td><td> Tube </td><td> Intramedic PE-10, Becton Dickinson Diagnostic Systems </td><td> 427410 </td><td> Pour insérer sur la pointe de l&#39;aiguille pour éviter les blessures des tissus lors de l&#39;insertion dans le conduit de Wharton. </td></tr><tr><td> Ultra seringue d&#39;insuline Comfort (avecune aiguille 29G) </td><td> Seringue </td><td> Tyco Healthcare </td><td> 600145 </td><td></td></tr><tr><td> 4% de bleu trypan </td><td> Tache </td><td> Gibco </td><td> 15250 </td><td></td></tr></tbody></table>

canulation de la glande salivaire sous-maxillaire de la souris via le conduit de wharton

Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct

Sévère hypofonction des glandes salivaires est fréquemment retrouvée chez les patients atteints du syndrome de Gougerot-Sjögren et ceux qui recevoir une irradiation thérapeutique dans leur tête et du cou pour le traitement du cancer. Les deux groupes de patients éprouvent des symptômes tels que la xérostomie (bouche sèche), dysphagie (mastication et de la déglutition altérée), caries dentaires graves, altération du goût, des infections oro-pharyngées (candidose), inflammation des muqueuses, des douleurs et de l&#39;inconfort. Une approche novatrice de la médecine régénérative pour le traitement de la glande salivaire hypo-fonction est spéculé RS Redman, E Mezey et al, 2009:. Cellules souches peuvent être déposés directement par canulation dans la glande comme une méthode efficace pour relancer les fonctions de l&#39;altération organe. On peut supposer que les cellules souches ont migré étrangers se différencier en cellules glandulaires à fonctionner dans le cadre de la glande salivaire hôte. En outre, cette technique de canulation est une méthode de livraison rapide et efficace pour les essais cliniquesdemande de transfert de gène. Ici, nous illustrons les étapes à suivre pour effectuer la procédure de cathétérisme de la glande salivaire sous-maxillaire de la souris via le conduit de la Wharton (figure 1). C3H souris (Charles River, Montréal, QC, Canada) sont utilisés pour cette expérience, qui ont été gardés sous des conditions conventionnelles propres au centre de l&#39;Université McGill ressources animales. Toutes les expériences ont été approuvés par le Comité de protection des animaux et de l&#39;Université étaient en conformité avec les lignes directrices du Conseil canadien de protection des animaux. Pour cette expérience, un bleu trypan solution est perfusée dans la glande à travers l&#39;ouverture de la gaine de Wharton en utilisant une seringue à insuline avec une aiguille de calibre 29-enfermé à l&#39;intérieur d&#39;un tube de polyéthylène. Par la suite, la souris est disséqué pour montrer que les perfusions migré dans la glande succès.

Un protocole pour la canulation de la glande salivaire sous-maxillaire de la souris via le conduit de la Wharton est décrite. Pour cette expérience, la solution de bleu trypan est utilisé comme un teinturier de démontrer comment cette technique délivre effectivement des perfusions dans la glande cible, et de suggérer la fiabilité de cette nouvelle approche comme un potentiel clinique des médicaments / thérapie cellulaire pour la régénération des glandes salivaires.

Canulation de la glande salivaire sous-maxillaire de la souris via le conduit de Wharton

Une hypofonction salivaire sévère est fréquemment observée chez les patients atteints du syndrome de Sjögren ainsi que chez ceux recevant une irradiation thérapeutique au niveau de leur...

Toutes les expériences ont été approuvées par le Comité de soins aux animaux de l'Université McGill, et nous respectons les lignes directrices du Conseil canadien de protection des animaux. L'objectif de cette expérience est d'injecter des cellules progénitrices ou des cellules souches dans la glande salivaire mandibulaire de la souris par canulation du canal de Wharton. Pour cette vidéo, une solution de bleu de trypan est utilisée comme colorant afin de visualiser l'infusion cellulaire.L'hypofonction des glandes salivaires est l'un des effets secondaires les plus fréquents du syndrome de Sjögren et de l'irradiation thérapeutique dans le traitement du cancer des régions de la tête et du cou. Un dysfonctionnement des glandes salivaires peut souvent entraîner des maladies dentaires, telles qu'une infection de la muqueuse buccale et des caries dentaires. L'une des approches innovantes de la médecine régénérative pour le traitement des glandes salivaires endommagées est la suivante.Les cellules souches peuvent être directement déposées dans la glande par canulation via les canaux de la glande salivaire, une méthode puissante pour restaurer les fonctions de la glande altérée ; les cellules souches étrangères migrées devraient vraisemblablement se différencier en cellules glandulaires et fonctionner comme partie intégrante de la glande salivaire. Nous détaillons ici les étapes nécessaires pour réaliser la procédure de canulation sur la glande salivaire sous-mandibulaire de la souris par le canal de Wharton. Pour cette expérience, une solution trip et bleue est injectée dans la glande par l'orifice du canal de Wharton à l'aide d'une aiguille et d'une seringue ultra confortables de 29 g.Ensuite, la souris est disséquée afin de montrer que les perfusions ont migré avec succès dans la glande. Étape un : un microlitre par gramme de poids corporel d'une solution d'atropine sulfate monohydraté à 0,5 milligramme par millilitre est injecté par voie sous-cutanée chez chaque souris afin d'empêcher les sécrétions salivaires de perturber le déplacement des perfusions. Étape deux : un microlitre par gramme de poids corporel d'une solution contenant 100 milligrammes par millilitre de kétamine et 20 milligrammes par millilitre de xylazine est injecté par voie intrapéritonéale chez chaque souris afin de la séder. Étape trois. Après le processus de sédation, la souris est placée sur une plateforme. En position ventrale, l'incisive maxillaire est fixée à un fil métallique et l'incisive mandibulaire est accrochée à un cordon élastique afin de maintenir la bouche ouverte.Étape quatre, une solution filtrée de bleu de Trian à 0,4 % est injectée dans la glande salivaire sous-mandibulaire à l’aide d’une aiguille ultra confort de 29 G et d’une seringue, par le conduit de Wharton, situé juste sous la langue. L’aiguille est désormais orientée vers l’orifice du conduit de Wharton et vient d’entrer dans le conduit afin d’administrer l’infusion. Étape cinq.Immédiatement après la procédure de canulation, la glande salivaire est exposée chirurgicalement afin de déterminer quelle quantité des perfusions est effectivement restée dans la glande. Après l'injection des perfusions, la souris a été disséquée pour exposer chirurgicalement la glande salivaire post-canulation. Comme vous pouvez le voir sur cette image, la coloration foncée du canal de Wharton constitue une preuve forte que la solution bleue trippin a été perfusée avec succès dans le cas d'une hypofonction de la glande salivaire.L'application locale, à savoir l'injection de médicaments et de cellules par le biais de cette procédure de canulation, peut être perçue comme un moyen plus direct et plus efficace de restaurer les fonctions des glandes salivaires parotides, sous-mandibulaires et sous-linguales. Comme le montrent les résultats représentatifs, les perfusions, ici constituées par la solution de bleu Trian, ont été correctement déposées dans la glande salivaire sous-mandibulaire de la souris via le canal de Wharton. Cette technique de canulation peut donc être utilisée comme un modèle fiable en médecine régénérative des glandes salivaires chez la souris.Et comme perspective d'avenir, cette procédure pourrait constituer une méthode pratique pour l'application clinique du transfert génique. Ce serait un grand plaisir que cet article illustré serve d'outil efficace pour les étudiants et les chercheurs intéressés par des études approfondies en médecine régénérative de la glande salivaire.

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