Détection d’auto-anticorps d’îlots humains à l’aide d’un test d’électrochimiluminescence

Pour détecter les auto-anticorps des îlots de Langerhans – un biomarqueur du diabète de type 1 – prélevez des échantillons de sérum humain et ajoutez de l’acide acétique pour inhiber les composants interférents.

Incuber puis ajouter un tampon alcalin pour neutraliser l’acide.

Transférez le sérum traité dans une plaque multipuits contenant un mélange d’auto-antigènes d’îlots humains, y compris des antigènes de capture biotinylés et des antigènes conjugués au ruthénium, chacun à une concentration optimale pour le dosage.

L’auto-anticorps des îlots de Langerhans dans l’échantillon positif fait le lien entre l’antigène conjugué au ruthénium et l’antigène de capture biotinylé, formant un complexe antigène-anticorps.

Transvaser le mélange dans une plaque d’électrochimiluminescence enrobée de streptavidine prétraitée avec un agent bloquant et équipée d’électrodes de travail et de contre-électrodes.

Incuber pour permettre des interactions complexes biotinylées avec la streptavidine liée, puis laver.

Ajoutez un tampon contenant de la tripropylamine ou du TPA.

Dans un instrument d’électrochimiluminescence, l’application de tension entre les électrodes initie l’oxydation du ruthénium et du TP