Détection par puce peptidique d’allo-anticorps HLA anti-donneur chez les receveurs d’organes

Prenons l’exemple d’un réseau de peptides dérivé de la séquence HLA d’un antigène leucocytaire humain ou HLA d’un donneur d’organe, comprenant différents peptides sur une membrane cellulosique.

Chaque peptide porte au moins une discordance d’acide aminé entre la séquence HLA du donneur et du receveur, représentant un épitope potentiel pour le rejet d’organe médié par les anticorps.

Traiter avec un tampon bloquant pour éviter l’interaction non spécifique des anticorps.

Ajouter le sérum du receveur prélevé après la transplantation d’organe, contenant des allo-anticorps.

Ces anticorps, formés contre le HLA du donneur, se lient à leur épitope cible.

Ajoutez un anticorps secondaire conjugué à la peroxydase qui se lie à l’alloanticorps.

Ajouter un substrat chimiluminescent et du peroxyde d’hydrogène. La peroxydase utilise du peroxyde d’hydrogène pour oxyder le substrat, émettant de la lumière.

Scannez la membrane pour obtenir une image.

Ajoutez un tampon pour éliminer les anticorps liés. Sondez avec du sérum receveur pré-transplantation et obtenez une image.

Par rapport à l’image pré-transplantation, les taches sombres sur l’image post-transplantation indiquent des épitopes HLA spécifiqu