Name: Microdissection laser des tissus de mammifères (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 34 s
Description: Découvrez la microdissection laser de tissus de mammifères avec le microscope Leica A-S-L-M-D. Cette technique permet d'isoler précisément des échantillons tissulaires pour l'analyse en neurosciences et biologie.

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microdissection laser des tissus de mammifères

Laser Capture Microdissection of Mammalian Tissue

Microscopie à capture laser, également connu sous le nom de microdissection laser (LMD), permet à l&#39;utilisateur d&#39;isoler un petit nombre de cellules ou de tissus congelés ou fixés au formol, des coupes de tissus inclus en paraffine. Techniques LMD compter sur une membrane thermo labiles soit placé sur le dessus de, ou en dessous, la section de tissu. Dans une méthode, l&#39;énergie laser focalisé est utilisé pour faire fondre la membrane sur les cellules sous-jacentes, qui peuvent ensuite être sortis de la section des tissus. Dans l&#39;autre, l&#39;énergie du laser vaporise la feuille long d&#39;un chemin &quot;tiré&quot; sur le tissu, ce qui permet aux cellules sélectionnées pour tomber dans un dispositif de collecte. Chaque technique permet la sélection de cellules avec une résolution minimale de quelques microns. ADN, ARN, protéines, lipides et les échantillons peuvent être isolées et analysées à partir des micro-disséqués échantillons. Dans cette vidéo, nous démontrons l&#39;utilisation du Leica AS-LMD instrument de microdissection laser en sept segments, y compris une introduction aux principes du LMD, l&#39;initialisation de l&#39;instrument pour l&#39;utilisation, les considérations générales pour la préparation des échantillons, l&#39;échantillon de montage et mise en place des tubes de capture , en alignant le microscope, en ajustant les commandes de capture, et la capture des spécimens de tissus. Laser-capture microdissection permet à l&#39;enquêteur d&#39;isoler des échantillons de populations de cellules pures aussi petit qu&#39;une cellule peu d&#39;équivalents. Cela permet l&#39;analyse de cellules d&#39;intérêt qui sont exemptes de contaminants voisins, qui pourrait fausser les résultats expérimentaux.

Microdissection laser des tissus de mammifères

La microscopie par capture laser, également connue sous le nom de microdissection laser (LMD), permet à l'utilisateur d'isoler un petit nombre de cellules ou de tissus à partir de coupes congelées ou...

Bonjour, je m'appelle Rob Edwards. Je suis directeur de la plateforme de microscopie par capture au laser de l'Université de Californie à Irvine. Je vais vous décrire l'utilisation du microscope par capture au laser que nous avons ici.Notre instrument est un Leica A-S-L-M-D, que nous avons acheté il y a environ trois ans. Il existe deux types différents de systèmes de capture laser. L'un peut être comparé à un point de soudure, dans lequel un fragment de tissu est placé sur une lame de verre recouverte d'une membrane plastique, qui recouvre le tissu.Une source laser est ensuite utilisée pour fondre la membrane, créant en effet une soudure ponctuelle du tissu sur la membrane, puis cette membrane est retirée, emportant avec elle le tissu capturé. Pour commencer, nous allons allumer plusieurs instruments en séquence afin de démarrer le système de microdissection par capture laser. Nous commencerons par la boîte de commande A-S-L-M-D, que nous allumons ici.Nous allumons ensuite l'ordinateur, ce qui est assez simple. Si vous avez un échantillon nécessitant des optiques de fluorescence pour identifier les cellules à capturer, vous allumerez la lampe au mercure pour l'illumination en fluo

laser-capture-microdissection-of-mammalian-tissue

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JoVE Journal

Biology

Biologie

La vidéo décrit la dissection laser du modèle de co-culture organotypique 3D avec une précision au micron. Dans les modèles organotypiques 3D, les constituants stromaux tels que les fibroblastes sont co-cultivés en 3 dimensions avec des cellules épithéliales cancéreuses. Le modèle 3D sert d’outil expérimental qui permet d’étudier l’invasion et les interactions cancer-stroma dans des conditions quasi physiologiques.

Microdissection laser : une technique pour isoler les cellules envahissantes du cancer colorectal à partir d’un modèle de culture organotypique 3D

Microdissection a été largement utilisé pour l'examen de l'ADN, de l'ARN et de la protéine dans le tissu. microscopie de capture laser (LCM) est la méthode la plus couramment utilisée, mais une nouvelle technique de fraisage, mesodissection, est disponible depuis peu. Nous démontrons extraction d'ARN à partir mesodissected formol paraffine fixe des lames de tissus intégrés de granulomes de Mycobacterium tuberculosis.

Une nouvelle approche microdissection de la récupération<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Transcriptions spécifiques de formol paraffine fixe embarqué poumon granulomes

L'isolement des neurones dopaminergiques individuels ou l'aire tegmentale ventrale par immunohistochimie directe ou indirecte est démontrée en utilisant microdissection laser. Les paramètres pour l'isolement d'un tissu à partir d'une lame de verre en utilisant un laser infrarouge et de diapositives membrane en utilisant la combinaison d'un laser infrarouge et ultraviolet sont discutés.

Microdissection laser - une démonstration de l&#39;isolement de la dopamine neurones individuels et de l&#39;Espace ventrale tegmentale entière

L’objectif de ce protocole est d’utiliser la micro-dissection par capture laser comme méthode efficace pour isoler des populations pures de types cellulaires à partir de tissus prostatiques hétérogènes pour l’analyse de l’ARN en aval.

Laser-microdissection de la prostate humaine épithélium pour l&#39;analyse de l&#39;ARN

Nous décrivons ici un protocole pour une microdissection laser reproductible de la saisie (LCM) pour isoler le réseau trabéculaire (TM) pour l’analyse en aval de RNA. La capacité d’analyser les changements dans l’expression des gènes dans le TM aidera à comprendre les mécanismes moléculaires sous-jacents des maladies oculaires liées au TM.

Saisie Microdissection de trabéculum très Pure de souris yeux de laser pour l’analyse de l’Expression génique

Un protocole de microdissection de capture laser (LCM) a été développé pour obtenir une quantité suffisante d'ARN de haute qualité pour l'analyse d'expression génique dans les cellules osseuses. L'étude actuelle se concentre sur les sections de fémur de souris. Cependant, le protocole LCM rapporté ici peut être utilisé pour étudier l'expression des gènes dans les cellules de tout tissu dur.

Un protocole de microdissection de capture de laser qui donne l'ARN de haute qualité des os frais-congelés de souris

Ce protocole décrit la microdissection de capture de laser pour l'isolement du cartilage et de l'os des sections congelées fraîches de l'embryon de souris. Le cartilage et l'os peuvent être rapidement visualisés par la coloration violette de cresyl et rassemblés précisément pour produire l'ARN de haute qualité pour l'analyse transcriptomique.

Microdissection de capture laser du cartilage embryonnaire de souris et de l'os pour l'analyse d'expression génique

La microdissection laser (LMD) est une technique sensible et hautement reproductible qui peut être utilisée pour découvrir des voies qui médité glioma hétérogénéité et invasion. Ici, nous décrivons un protocole optimisé pour isoler les zones discrètes du tissu de gliome utilisant le LMD laser suivi de l’analyse transcriptomique.

Microdissection laser de sous-régions de Glioma pour la caractérisation spatiale et moléculaire de l’hétérogénéité intratumorale, des oncostreams et de l’invasion

Un protocole est décrit qui utilise la microdissection laser pour isoler des tissus de nématodes individuels pour le séquençage de l’ARN. Le protocole ne nécessite pas de boîtes à outils génétiques spécifiques à l’espèce, ce qui permet de comparer les profils d’expression génique entre différentes espèces au niveau d’échantillons de tissus uniques.

Microdissection laser pour les applications mono-tissulaires indépendantes des espèces

Ce protocole décrit un flux de travail à haut débit pour la segmentation basée sur l’intelligence artificielle des régions d’intérêt confirmées par la pathologie à partir d’images de coupes de tissus minces et colorées pour l’enrichissement des populations cellulaires résolues par histologie à l’aide de la microdissection laser. Cette stratégie comprend un nouvel algorithme permettant le transfert de démarcations désignant des populations cellulaires d’intérêt directement aux microscopes laser.

Microdissection laser industrialisée guidée par l’intelligence artificielle pour l’analyse protéomique à micro-échelle du microenvironnement tumoral

Ce protocole décrit une méthode pour isoler l’ARN à partir de régions histologiques définies de tissu hépatique de souris fixé au paraformaldéhyde et à la température optimale de coupe, en utilisant une microdissection par capture laser, permettant une analyse ciblée de l’expression génique en aval.

Microdissection par capture laser du tissu hépatique de souris fixé au paraformodéhyde pour l’analyse de l’ARN

Découvrez la microdissection laser de tissus de mammifères avec le microscope Leica A-S-L-M-D. Cette technique permet d'isoler précisément des échantillons tissulaires pour l'analyse en neurosciences et biologie.

Microdissection laser des tissus de mammifères

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