Name: T CD4 + des lymphocytes capturer en utilisant une puce jetable microfluidiques pour le VIH (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T13:03:52.000+00:00
Duration: 12 min 44 s
Description: Découvrez la capture de lymphocytes T CD4+ à l'aide d'un dispositif microfluidique jetable en PDMS pour le diagnostic VIH. Cette méthode précise permet l'analyse cellulaire dans des environnements à ressources limitées.

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<ol><li> Préparer canal microfluidique avec des anti-CD4 + de surface biotinlayted. </li><li> Injecter 10 ml de l&#39;échantillon sanguin à 5 ml / min dans le canal microfluidique avec pompe seringue. </li><li> Rincer le sang à 20 ml / min pendant 20 min avec du PBS. </li><li> Injecter une solution diluée d&#39;FACS lyse (dilué à 10% de la solution stock avec PBS) à 5ul/min pendant 15 min. </li><li> Incuber pendant 15 min. </li><li> Injecter CD3 + solution d&#39;anticorps primaire (dilué à 10% de solution stock avec du PBS) à 5 ml / min pendant 20 min. </li><li> Incuber pendant 2 heures. </li><li> Rincer le canal avec du PBS à 5 ml / min pendant 15 min. </li><li> Injecter 20% AF488 CD4 +, 0,2% d&#39;une solution stock de DAPI, et 10% CD3 + anticorps secondaires à 5 ml / min pendant 20 min dans le même temps. </li><li> Incuber pendant 20 min. </li><li> Rincer le canal avec du PBS à 5 ml / min pendant 15 min. </li><li> Comptez cellules sous microscope à fluorescence: <ol><li> Blanc (optique) - Noir et blanc: la cellule et de la poussière </li><li> UV (DAPI) - Bleu: seule cellule </li><li> Bleu (CD4 +) - Vert: des lymphocytes T et des monocytes </li><li> Green (CD3 +) - Rouge: les lymphocytes T ne </li></ol></li></ol>

<table><tbody><tr><td>Microcanal en PDMS</td><td></td><td></td><td></td><td>Fabriqué à l’aide d’un moule en SU-8</td></tr><tr><td>Sang</td><td></td><td></td><td></td><td>Sang provenant de donneurs humains sains. Mass General Hospital, 10 X leucocytes à haute densité ou Brigham and Women&amp;rsquo;s Hospital.</td></tr><tr><td>PBS</td><td> Tampon</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td>Solution saline tamponnée au phosphate de Dulbecco&amp;rsquo;s à 1x.</td></tr><tr><td>Solution de lyse FACS</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>349202</td><td>Diluée à 10 % à partir de la solution mère avec du PBS.</td></tr><tr><td>Ac anti-CD4+ biotinylé</td><td></td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>IM0704</td><td>Surface préparée avec un Ac anti-CD4+ biotinylé, dilué à 10 % à partir de la solution mère avec du PBS/BSA après mélange de 0,2 mg de solution mère et de 1 ml d’eau déionisée.</td></tr><tr><td>Ac polyclonal caprin anti-hCD3delta</td><td>pAB</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-1128</td><td>Dilué à 10 % à partir de la solution mère avec du PBS</td></tr><tr><td>Ac secondaire IgG caprine anti-caprine marqué PE</td><td></td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-3755</td><td>Ac secondaire pour l’Ac anti-CD3, dilué à 10 % à partir de la solution mère avec du PBS</td></tr><tr><td>Ac anti-CD4+ humain</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>557695</td><td>Marqué avec Alexa Fluor 488, dilué à 20 % à partir de la solution mère avec du PBS.</td></tr><tr><td>DAPI</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td>Solution de 4&amp;rsquo;,6-dianidino-2-phénylindole, dihydrochlorure, diluée à 0,2 % à partir de la solution mère avec du PBS.</td></tr></tbody></table>

t cd4 + des lymphocytes capturer en utilisant une puce jetable microfluidiques pour le vih

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

T CD4 + des lymphocytes capturer en utilisant une puce jetable microfluidiques pour le VIH

Bonjour, je m'appelle Richard Lin et je suis chercheur au sein du groupe de la professeure TI Mercy, à la Division des sciences et technologies de la santé du MIT et de Harvard. Le projet sur lequel je travaille consiste à quantifier et à capturer les lymphocytes T CD4 positifs et C3 positifs. Le sang du patient doit être utilisé dans des contextes à ressources limitées.Juste devant moi, nous avons un dispositif microfill composé de PDMS, qui est du Polyméthylsiloxane. Le dispositif, le canal lui-même, a une hauteur de 50 micromètres et le volume total dans le dispositif est de 10 microlitres. Il s'agit donc d'un dispositif extrêmement précis que nous allons utiliser pour capturer les lymphocytes T auxiliaires.Fondamentalement, la référence diagnostique pour les patients infectés par le VIH. La surface du dispositif microfluidique a déjà été préparée avec des protéines et des anticorps spécifiques des cellules CD4 présents dans la seringue. Pour l'instant, nous avons uniquement un tampon biologique PBS à un pH de 7,4, que nous allons maintenant faire circuler dans le canal afin d'éliminer l'excès d'anticorps anti-CD4.À ce stade, le débit n'a pas besoin d'être contrôlé, car nous che

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Capturez cellule à l&#39;aide d&#39;un dispositif microfluidique

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T CD4 + des lymphocytes capturer en utilisant une puce jetable microfluidiques pour le VIH

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