Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
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Place une tranche d’hippocampe d’un cerveau de souris dans un puits contenant un tampon. La tranche contient un réseau de neurones qui communiquent par le biais de synapses.
Les terminaisons neuronales présynaptiques contiennent des vésicules remplies de neurotransmetteurs avec des transporteurs transmembranaires caractéristiques, tandis que les terminaisons postsynaptiques présentent des protéines d’échafaudage caractéristiques qui régulent les récepteurs des neurotransmetteurs. Les deux servent de marqueurs clés pour les structures synaptiques.
Remplacez le tampon par une solution bloquant la perméabilisation et incubez avec agitation pour perméabiliser les membranes cellulaires et bloquer les sites de liaison non spécifiques.
Ajouter des anticorps primaires ciblant les marqueurs présynaptiques et postsynaptiques et incuber avec agitation pour permettre la liaison.
Laver la tranche, ajouter des anticorps secondaires conjugués aux fluorophores spécifiques aux anticorps primaires, et incuber en agitant dans l’obscurité.
Lavez la tranche, puis montez-la sur une diapositive.
À l’aide d’un microscope confocal, identifiez la région d’intérêt et agrandissez-la pour visualiser les synapses.
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