Titre encapsulation cellulaire par des gouttelettes

Je m'appelle Hang Moon. Je travaille avec le professeur des préservatifs. Lui et moi travaillons avec le stade XYJ pour créer une structure tridimensionnelle de cellule.

Bonjour, je suis PE et Lynn, et je travaille sur le projet d’impression cellulaire avec l’encapsulation cellulaire et les milieux et gels. Ceci est un solénoïde destiné à l’éjection d’une cellule et d’un mélange cellulaire à travers le milieu cellulaire. Le robinet solénoïde est activé par deux lignes de signal.

La ligne de signal provient d'une carte sèche ici. Le signal provient d'ici. Cette ligne traverse cette autre ligne, celle-ci étant le premier générateur de fonction.

Tout d'abord, le signal est généré selon notre méthode programmée. Ainsi, si vous souhaitez modifier le débit, vous pouvez modifier le programme à l’aide de la ligne de commutation ou bien contrôler ce générateur de processus depuis l’ordinateur. La vanne cellulaire s’ouvre et se ferme grâce à un signal électrique, mais la cellule est alimentée par cette ligne.

La cellule et le milieu ou le gel agaroïde sont fournis par l'intermédiaire de seringues. Les seringues se trouvent dans l'eau ; la pression légère à l'intérieur de la seringue est exercée par l'air. L'air comprimé est fourni à partir d'un réservoir, comme ici par la ligne.

Ainsi, le petit conduit et l'air ionisé circulent à travers le filtre à air. Le filtre à air retient la poussière et les autres types de saletés. Ce générateur de pression, comme nous l'appelons, produit le signal utilisé pour ouvrir ou fermer la vanne d'air solaire ; l'ordinateur est connecté via un connecteur P-I-B-U-S-V.

Nous pouvons donc utiliser le port USB en le reliant directement à notre ordinateur, l'ordinateur portable. Celui-ci est connecté à ce côté ici. Ensuite, nous pouvons contrôler via l'ordinateur de commande situé ici.

Ainsi, si nous souhaitons synchroniser le mouvement de la platine et l'ouverture de la cloche, cela peut être contrôlé par le même contrôleur qu'un ordinateur portable. Nous pouvons donc contrôler le moment d'ouverture, de fermeture, de déplacement et d'arrêt. Et nous pouvons synchroniser le mouvement et l'ouverture de la cloche.

Cette étape est la platine motorisée. Elle est déplacée automatiquement par l'intermédiaire de la ligne de signal de mort et du moteur. Ainsi, la motorisation est de 0,1 micromètre.

Ainsi, idéalement, il peut tracer la ligne jusqu’à la graduation de 100 millimètres. L’axe du jet se déplace donc, montant et descendant de cette manière. Il contrôle ainsi l’écart entre le substrat et la courroie solaire.

Ainsi, cela permet de contrôler la hauteur d'éjection. Ce substrat est relié aux étages XY ici, X ici et Y là. Il se déplace donc dans un plan XY.

Ainsi, il active une démonstration de certaines fonctionnalités aux étapes précises définies par trois axes : X, Y et G. L'axe du jet ou axe XY est contrôlé par un signal ici. La ligne de signal est connectée au contrôleur de mouvement ici. Ce contrôleur de mouvement ne possède aucun commutateur manuel, car il ne peut pas être commandé manuellement.

Il est contrôlé via l'ordinateur portable. L'ordinateur portable est donc connecté. À l'arrière du contrôleur, nous avons trois xs pour une cellule d'impression XY jet.

Ainsi, cela génère trois types de signaux distincts de manière indépendante. Ensuite, le contrôleur de mouvement communique via les connecteurs RF 2, 3, 2 qui sont directement reliés à l'USV. Puis l'USV est connecté à un ordinateur portable.

Ainsi, l'emprunteur contrôle l'ordinateur portable. Nous utilisons le programme AutoCAD, nous créons un chemin de génération A de cette manière, vlan. Ensuite, il se transforme en langage machine comme cela.

Ainsi, le langage machine est transféré de manière à ce que les caractères simples et les chiffres soient comme cela. Chaque position est associée aux axes X, Y, Z. Ici, je choisis le fichier contenant ce type de programme, puis j'ouvre le programme de téléchargement de cette manière. Ensuite, je choisis à partir du fichier exactement de la même façon, le fichier texte.

Seul le fichier texte est téléchargé, sélectionnez le fichier texte et téléchargez-le automatiquement depuis l'ordinateur portable vers le contrôleur d'exécution de mouvement, puis il devient le caractère BAM comme je l'ai mentionné précédemment, BAM. Dans ce flacon se trouvent des cellules de fibroblaste murin NIH/3T3. Et je vais d'abord aspirer l'ancien milieu.

Ce protocole consiste à repiquer les cellules, qui sont adhérentes au fond du flacon. Après avoir aspiré le milieu, j'ajoute six RYS, qui est une enzyme. D'accord ? Une fois la trypsine ajoutée dans le flacon, il faut attendre de trois à cinq minutes pour que les cellules se détachent du fond du flacon.

Maintenant, nous sommes prêts à ajouter le milieu et à transférer les cellules dans un tube centrifuge. Il s'agit d'une dilution un pour un. J'ajoute donc six millilitres de ce milieu ici et je vais rincer légèrement les scies pour m'assurer que toutes les cellules sont transférées.

Et maintenant, les cellules sont prêtes à être centrifugées dans ce tube. Nous allons maintenant centrifuger ces cellules à mille tr/min pendant trois à cinq minutes. Maintenant que les cellules ont été regroupées en un culot, je vais aspirer le surnageant.

Maintenant, je vais laver les cellules avec du PBS. Ceci sert à colorer les cellules. Les colorants que nous utilisons sont des substrats d'estérase.

Très bien, maintenant nous allons procéder à une nouvelle centrifugation pour déposer les cellules en culot. Je vais ensuite aspirer le PBS et resuspendre les cellules dans le milieu destiné au comptage.

Je mélange les cellules afin que, lorsque nous prélevons un échantillon, la concentration soit homogène dans tout le tube. Maintenant, je vais prélever cent microlitres des cellules pour mesurer la densité cellulaire. Maintenant, j'ajoute cent microlitres de colorant Trypan bleu, qui est un colorant.

Nous allons attendre trois à cinq minutes afin que le colorant pénètre les membranes des cellules mortes. Lors du comptage des cellules, nous n'incluons pas celles qui sont bleues. Les cellules sont prêtes à être comptées avec le cytomètre sanguin ; je vais transférer 50 microlitres du mélange cellulaire de chaque côté du cytomètre sanguin.

D'accord, je vais le recouvrir avec le côté d'une lame de verre. Le compteur d'hémocytes possède deux côtés. Je vais compter le premier côté, puis, après avoir compté les deux côtés, je ferai la moyenne et multiplierai par deux, car nous avons effectué une dilution au un pour un avec le type en bleu.

Donc, fondamentalement, notre densité cellulaire sera de 135 fois 10 puissance quatre cellules par millilitre. Pour notre expérience, nous utiliserons une solution cellulaire ayant une concentration de cinq cent mille cellules par millilitre. Et puisque nous avons 13,5 millions de cellules, je vais resuspendre les cellules dans 27 millilitres de milieu.

Nous utilisons deux types différents de colorants. Il s'agit d'un test vivant-mort de Molecular Probes. Notre premier colorant s'appelle le calcium AM.

Notre deuxième colorant s'appelle l'homodimère AUM. Il colore les cellules mortes. Nous utilisons une excitation bleue pour obtenir une fluorescence verte et une excitation verte pour obtenir une fluorescence rouge. Pour ces deux colorants, lorsque nous effectuons l'imagerie, notre solution de coloration sera préparée dans du PBS.

Donc, tout d'abord, je vais transférer cinq millilitres de PBS dans un tube, soit du tampon salin phosphate. C'est une solution saline. Maintenant, je vais ajouter un demi-microlitre de chlorure de calcium par millilitre.

Je vais maintenant ajouter 2,5 microlitres de calcium am au tube et 2 microlitres du homodimère athe par millilitre de PBS. Voici la machine btex. Elle assure une répartition homogène des cellules et du milieu dans tout le volume.

Maintenant, nous chargeons la cellule de 200 microlitres sur le sept ici. Ensuite, nous mettons le bouchon, qui est hermétiquement scellé de cette manière. Ici, j'ouvre la vanne, puis l'air sous pression pénètre, et ensuite j'ajuste la courroie ainsi. Puis, je modifie la pression.

Donc, j'ajuste. La pression est de cinq PSI. La pression à l'intérieur du tube est de cinq PSI.

De ce point à celui-ci, cela s'est connecté à travers l'intérieur du trou. Nous ouvrons donc simplement le clocheton ici, puis la cellule est injectée avec une pression de cinq PSI, puis commence à s'ouvrir. Ensuite, la vanne Sona commence à fonctionner.

Ensuite, nous positionnons le substrat. Le substrat est simplement une lame en verre. Puis nous déposons la quantité appropriée et j'ajoute un ruban adhésif pour fixer le substrat de cette manière, n'est-ce pas ?

Et simplement, je le fixe. Ainsi, nous mettons en place l'ensemble, comprenant la cellule, le clapet ary, et le substrat, pendant le déplacement du clapet ary et le démarrage de son fonctionnement. Nous installons donc tout le dispositif, puis ouvrons le clapet ary pour commencer.

Ensuite, nous déplaçons la platine comme ceci, n'est-ce pas ? Puis nous créons un motif sur le substrat, un motif sur le substrat, et hop, le personnage apparaît. Je vais immerger ces gouttelettes que nous avons imprimées dans la solution colorante que nous avons préparée précédemment.

Et maintenant, les gouttelettes seront incubées pendant 10 minutes, puis observées. Je vais d'abord régler l'image à travers l'oculaire. Notre première image est simplement une image en champ clair.

J'éteins la lumière et je change le filtre pour avoir une excitation bleue, qui montrera une fluorescence verte. La troisième image que nous prendrons correspond aux cellules mortes, marquées avec le Thm Homodimer. Avec une lumière verte, nous obtiendrons une fluorescence rouge.