Name: Lencapsulation des cardiomyocytes dans un hydrogel de fibrine pour lingénierie du tissu cardiaque (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 18 s
Description: Apprenez l'encapsulation de cardiomyocytes néonataux de rat dans un hydrogel de fibrine pour l'ingénierie tissulaire cardiaque. Cette méthode permet d'évaluer la fonctionnalité et la viabilité des tissus cardiaques.

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Ce travail a été soutenu par le National Institutes of Health - National Heart, Lung and Blood Institute (Prix # R00HL093358 au LDB).

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<li>Grassl, E. D., Oegema, T. R., Tranquillo, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fibrin-based+arterial+media+equivalent%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+biomedical+materials+research.+66+%28Part+A%22%5BJournal%5D)">A fibrin-based arterial media equivalent.</a> Journal of biomedical materials research. 66 (Part A. , 550-561 (2003).</li>
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<li>Invitrogen. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22%3ELIVE%2FDEAD+Viability%2FCytotoxicity+Kit+%2Afor+mammalian+cells%22">>LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit *for mammalian cells</a>. , Invitrogen. (2005).</li>
</ol>

Aucun conflit d&#39;intérêt déclaré.

L&#39;encapsulation des cardiomyocytes de rat nouveau-né dans les résultats des gels de fibrine dans une approche cohérente et viable en trois dimensions dans le modèle in vitro du système du myocarde. La fibrine est un biomatériau préféré parce que quand les cellules sont piégées, elles sont métaboliquement actif et capable de compactage, de remodelage et de recréer une matrice extracellulaire qui est compatible avec les tissus du cœur natif 12. Parce que nous permettent les cardiomyocytes de s&#39;aligner dans cet environnement, leur fonctionnalité est plus caractéristique du muscle cardiaque résultant en grande force de la contraction par rapport aux tissus isotrope 6. Pour des applications thérapeutiques potentielles, il est nécessaire d&#39;encapsuler des cellules au sein d&#39;un matériau qui favorise à la fois la viabilité et la fonctionnalité. Les protocoles présentés ici démontrent un moyen efficace et précis pour la création d&#39;un réseau de fibrine pour contrôler le comportement des cellules cardiaques dans un microenvironnement tridimensionnel. Quelques problèmes potentiels peuvent survenir lors de la création et la culture de ces constructions. Un problème potentiel est le maintien de la viabilité cellulaire avant d&#39;encapsulation, qui affectera considérablement la fonctionnalité de la construire. Des efforts devraient être faits pour limiter la mort cellulaire suite à l&#39;isolement en réduisant le délai entre l&#39;isolement et l&#39;encapsulation des cellules à l&#39;intérieur du gel de fibrine. Construit devraient être fournis les médias tous les autres jours sur un calendrier strict. En outre, il est important d&#39;assurer l&#39;homogénéité dans l&#39;ensemble des solutions utilisées. Si le mélange de fibrinogène, la thrombine et les cellules produisent un environnement hétérogène, la capacité des cellules à remodeler l&#39;ECM, mécaniquement couple et du contrat est potentiellement obstrué. Il est également important pour éviter la formation de bulles d&#39;air lors de l&#39;injection des constructions afin d&#39;éviter des perturbations dans la continuité de l&#39;ingénierie tissulaire. Une façon de pallier ce problème est attirer plus de gel que nécessaire pour faire la construction dans la seringue et injecter lentement. Enfin, une fois la matrice de fibrine s&#39;est fixé et a été en milieu de culture pendant 24 heures, il est indispensable de détacher le construire à partir des côtés du moule de bague de promouvoir la compaction des cellules à base de gel de fibrine. Garder la construction au milieu du moule facilite l&#39;échange de gaz et des nutriments. L&#39;adhésion à des côtés du moule anneau peut aussi perturber l&#39;alignement désiré cellulaire. Il est important de noter que la décapitation conscient est utilisé comme méthode d&#39;euthanasie dans ce protocole, qui est une méthode acceptable en vertu des directives à la fois du National Institutes of Health et de l&#39;American Veterinary Medical Association. Toutefois, certaines institutions recommandent l&#39;utilisation d&#39;anesthésie suivie par décapitation pour les rats néonatals. Nous avons choisi la décapitation consciente parce qu&#39;elle garantit le minimum de temps dans des conditions hypoxiques pour le tissu cardiaque excisée / cellules. Quantités relativement faibles de l&#39;hypoxie peut entraîner une ischémie des myocytes et la mort potentiellement myocytes, ce qui pourrait affecter significativement les résultats de ce protocole.

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom de réactif </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th><th> Commentaires </th></tr><tr><td> Le chlorure de sodium </td><td> Sigma </td><td> S7653 </td><td> PBS </td></tr><tr><td> Le chlorure de potassium </td><td> Sigma </td><td> P9333 </td><td> PBS </td></tr><tr><td> Phosphate disodique </td><td> Sigma </td><td> S7907 </td><td> PBS </td></tr><tr><td> Phosphate de potassium monobasique </td><td> Sigma </td><td> P5655 </td><td> PBS </td></tr><tr><td> Le glucose </td><td> Sigma </td><td> G5400 </td><td> Isolement </td></tr><tr><td> hémostatique </td><td> Outils Fine Science </td><td> 91308-12 </td><td> Isolement </td></tr><tr><td> fines pinces </td><td> Outils Fine Science </td><td> 11251-20 </td><td> Isolement </td></tr><tr><td> gros ciseaux </td><td> Outils Fine Science </td><td> 91401-14 </td><td> Isolement </td></tr><tr><td> micro-ciseaux </td><td> Outils Fine Science </td><td> 91501-09 </td><td> Isolement </td></tr><tr><td> Manche de bistouri </td><td> Outils Fine Science </td><td> 10008-13 </td><td> Isolement </td></tr><tr><td> bistouri lame </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08 à 918-5A </td><td> Isolement </td></tr><tr><td> Thibaude banc Absorbant </td><td> VWR </td><td> 56617-014 </td><td> Isolement </td></tr><tr><td> champ stérile </td><td> Fisher Scientific </td><td> GM42526 </td><td> Isolement </td></tr><tr><td> Sac autoclave </td><td> Fisher </td><td> 01-812-54 </td><td> Isolement </td></tr><tr><td> tampon de gaze </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-761-52 </td><td> Isolement </td></tr><tr><td> bétadine </td><td> Produits de Purdue </td><td> 67618-150-01 </td><td> Isolement </td></tr><tr><td> des gants stériles </td><td> Fisher Scientific </td><td> 19-020 </td><td> Isolement </td></tr><tr><td> pipette de transfert stérile </td><td> Fisher Scientific </td><td> 9962 </td><td> Isolement </td></tr><tr><td> collagénase </td><td> Worthington </td><td> CLS2 </td><td> Isolement </td></tr><tr><td> Teflon tige 1 / 4 pouce de diamètre </td><td> McMaster-Carr </td><td> 8546K11 </td><td> Partie de moule </td></tr><tr><td> ID tube en téflon 1 / 4 pouce, 1 / 2 pouce OD </td><td> McMaster-Carr </td><td> 8547K31 </td><td> Partie de moule </td></tr><tr><td> Silicone O-Ring ID 1 / 4 pouce, 1 / 2 pouce OD </td><td> McMaster-Carr </td><td> 9396K204 </td><td> Partie de moule </td></tr><tr><td> Tube en téflon 1 / 4 pouces ID, 5 / 16 pouces OD </td><td> McMaster-Carr </td><td> 52355K14 </td><td> Partie de moule </td></tr><tr><td> Kendall seringues Monoject 6cc </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05-561-41 </td><td> Partie de moule </td></tr><tr><td> BD seringue 3cc </td><td> Fisher Scientific </td><td> 309585 </td><td> Partie de moule </td></tr><tr><td> Fibrinogène Bovin </td><td> Sigma </td><td> F8630 </td><td> Construire des </td></tr><tr><td> Thrombine bovine </td><td> Sigma </td><td> T7513 </td><td> Construire des </td></tr><tr><td> 1 M HEPES </td><td> Sigma </td><td> H0887 </td><td> Construire des </td></tr><tr><td> Chlorure de sodium </td><td> Sigma </td><td> S7653 </td><td> Construire des </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 10569 </td><td> Construire des </td></tr><tr><td> Pluronic F-127 </td><td> Sigma </td><td> P2443 </td><td> Construire des </td></tr><tr><td> Chlorure de calcium </td><td> Sigma </td><td> 383147 </td><td> Construire des </td></tr><tr><td> 0,2 micron </td><td> Fisher Scientific </td><td> SCGVT05RE </td><td> Construire des </td></tr><tr><td> Crépines de cellules de 40 microns </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-363-547 </td><td> Construire des </td></tr><tr><td> Filtre de 0,45 microns bouchon de bouteille </td><td> Corning </td><td> 430627 </td><td> Construire des </td></tr><tr><td> de verre pré-filtre </td><td> Millipore </td><td> AP2007500 </td><td> Construire des </td></tr><tr><td> 18G 1 1 / 2 pouce de long aiguilles </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14 à 826-5D </td><td> Construire des </td></tr><tr><td> Aiguille 21G 1 pouce </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-826C </td><td> Construire des </td></tr><tr><td> construire des jarres </td><td> Fisher Scientific </td><td> 2116 </td><td> Construire des </td></tr><tr><td> Pénicilline-streptomycine </td><td> Invitrogen </td><td> 15140 </td><td> Médias </td></tr><tr><td> sérum de cheval </td><td> Sigma </td><td> H1138 </td><td> Médias </td></tr><tr><td> Sérum fœtal bovin </td><td> Invitrogen </td><td> 16000 </td><td> Médias </td></tr><tr><td> l&#39;acide aminocaproïque </td><td> Acros Organics </td><td> 103305000 </td><td> Médias </td></tr><tr><td> l&#39;acide ascorbique </td><td> Sigma </td><td> A5960 </td><td> Médias </td></tr><tr><td> l&#39;insuline </td><td> Sigma </td><td> I9278 </td><td> Médias </td></tr><tr><td> Paraformaldéhyde, 16% </td><td> Sciences Electron Microscopy </td><td> 15710 </td><td> Histologie </td></tr><tr><td> Température de coupe optimale (PTOM) </td><td> Ted Pella </td><td> 27050 </td><td> Histologie </td></tr><tr><td> 2-méthylbutane </td><td> Fisher </td><td> 03551-4 </td><td> Histologie </td></tr><tr><td> Souris MYH1/2/4/6 anticorps primaire </td><td> Santa Cruz Biotechnology </td><td> SC-32732 </td><td> Histologie </td></tr><tr><td> Lapin connexine 43 anticorps primaire </td><td> Technologie signalisation cellulaire </td><td> 3512 </td><td> Histologie </td></tr><tr><td> Dylight 549-conjugué âne anti-souris anticorps secondaire </td><td> Jackson ImmunoResearch Laboratories </td><td> 715-505-151 </td><td> Histologie </td></tr><tr><td> Dylight 488-conjugué Donke anticorps anti-lapin secondaire </td><td> Jackson ImmunoResearch Laboratories </td><td> 711-485-152 </td><td> Histologie </td></tr><tr><td> Live / Dead test </td><td> Invitrogen </td><td> L-3224 </td><td> Analyse </td></tr></tbody></table>

l&#39;encapsulation des cardiomyocytes dans un hydrogel de fibrine pour l&#39;ingénierie du tissu cardiaque

Encapsulation of Cardiomyocytes in a Fibrin Hydrogel for Cardiac Tissue Engineering 

La culture de cellules dans un environnement en trois dimensions d&#39;hydrogel est une technique importante pour développer des constructions pour l&#39;ingénierie tissulaire ainsi que l&#39;étude des réponses cellulaires sous diverses conditions de culture in vitro. L&#39;environnement en trois dimensions de plus près ce qui imite les cellules d&#39;observer in vivo en raison de l&#39;application de stimuli mécaniques et chimiques dans toutes les dimensions 1. Trois dimensions hydrogels peuvent être fabriqués à partir de polymères synthétiques tels que le PEG-DA 2 et 3 ou PLGA un certain nombre de protéines naturelles telles que le collagène 4, 5 d&#39;acide hyaluronique ou de fibrine 6,7. Les hydrogels créés à partir de la fibrine, une protéine du sang d&#39;origine naturelle de la coagulation, peut se polymériser pour former un maillage qui fait partie de la guérison du corps enroulé processus naturels 8. La fibrine est la cellule-dégradables et potentiellement autologue 9, ce qui en fait un idéal d&#39;échafaudage provisoire pour l&#39;ingénierie tissulaire. Nous décrivons ici en détail l&#39;isolement des cardiomyocytes néonataux de trois chiots jour vieux rat et la préparation des cellules pour l&#39;encapsulation dans les constructions d&#39;hydrogel de fibrine pour l&#39;ingénierie tissulaire. Myocytes néonataux sont une source de cellules couramment utilisées pour les études in vitro la formation des tissus cardiaques et d&#39;ingénierie 4. Fibrine gel est créé par le fibrinogène mélange avec l&#39;enzyme thrombine. La thrombine clive FPA et FPB fibrinopeptides à partir du fibrinogène, révélant les sites de liaison qui interagissent avec d&#39;autres monomères 10. Ces interactions provoquer des monomères de s&#39;auto-assembler en fibres qui forment le maillage d&#39;hydrogel. Parce que le timing de cette réaction enzymatique peut être ajusté en modifiant le rapport de la thrombine au fibrinogène, ou le ratio du calcium à la thrombine, on peut moulage par injection des constructions avec un certain nombre de différentes géométries 11,12. En outre, nous pouvons générer l&#39;alignement du tissu obtenu par la façon dont nous contraindre le gel au cours de la culture 13. Après culture des constructions conçues tissu cardiaque pendant deux semaines dans des conditions statiques, les cellules cardiaques ont commencé à remodeler le construire et peut générer une force de contraction dans les conditions rythme électrique 6. Dans le cadre de ce protocole, nous avons également décrire les méthodes d&#39;analyse de l&#39;ingénierie tissulaire du myocarde après la période de culture, y compris l&#39;analyse fonctionnelle de la force active générée par le muscle cardiaque construire sur la stimulation électrique, ainsi que des méthodes pour déterminer la viabilité cellulaire finale (Live-Morte dosage) et la coloration immunohistochimique pour examiner l&#39;expression et la morphologie des protéines typiques important pour la contraction (chaînes lourdes de myosine ou CMH) et le couplage cellulaire (connexine 43 ou Cx43) entre les myocytes.

Nous décrivons l&#39;isolement des cardiomyocytes néonataux et la préparation des cellules pour l&#39;encapsulation dans les constructions d&#39;hydrogel de fibrine pour l&#39;ingénierie tissulaire. Nous décrivons des méthodes d&#39;analyse de l&#39;ingénierie tissulaire du myocarde après la période de culture, y compris force active générée lors de la stimulation électrique et la viabilité des cellules et la coloration immunohistochimique.

L&#39;encapsulation des cardiomyocytes dans un hydrogel de fibrine pour l&#39;ingénierie du tissu cardiaque

La culture de cellules dans un environnement d'hydrogel tridimensionnel est une technique importante pour le développement de constructions destinées à l'ingénierie tissulaire ainsi que pour l'étude de...

L'objectif général de cette procédure est d'encapsuler des cardiomyocytes de rat néonatal dans un hydrogel FI pour l'ingénierie tissulaire cardiaque. Cela est réalisé en isolant d'abord les cœurs de rats nouveau-nés âgés de deux à trois jours. Ensuite, les cœurs sont digérés dans de la collagénase.Pour séparer les cellules cardiaques de la matrice extracellulaire, les cellules cardiaques sont ensuite encapsulées dans un hydrogel de fibrine. Enfin, les constructions sont cultivées pendant deux semaines. En définitive, les résultats montrent que les constructions ont la capacité de générer une force de contraction d'environ 1,3 milli Newtons en réponse à une stimulation électrique.En outre, la structure alignée du construct peut être observée par coloration histologique des protéines des myocytes. Les construct cardiaques ingéniés peuvent constituer une thérapie potentielle de l'infarctus du myocarde en permettant la réparation ou le remplacement du tissu cicatriciel par un tissu ingénierisé, améliorant ainsi la fonction cardiaque après une lésion ou une maladie. Ces construct peuvent servir de modèle in vitro précieux pour l'étude des effets de divers stimuli sur les forces contractiles ainsi que sur le développement cardiaque normal et pathophysiologique.Après avoir préparé le milieu et stérilisé les instruments chirurgicaux pour chaque personne, placez un drap absorbant sous le capot, sur la surface de travail, et recouvrez-le d'un champ stérile. Disposez les instruments chirurgicaux stériles et un pansement de gaze quatre par quatre sur le champ stérile. Sans toucher les instruments, ouvrez une lame de scalpel stérile numéro 20 et placez-la sur le champ.Après avoir décapité un petit, tamponnez la poitrine avec un coton imbibé de Bétadine. Maintenez le petit en pinçant les omoplates ensemble. Effectuez une thoracotomie partielle pour exposer le cœur, puis augmentez la pression appliquée sur les omoplates, ce qui fera sortir le cœur au-dessus des côtes.Pour la dissection de l'omoplate, passez la lame du scalpel derrière le cœur afin de sectionner les gros vaisseaux et retirez l'organe. Placez le cœur sur de la glace dans une boîte de Pétri contenant du PBS glucosé. Une fois les cœurs isolés, éliminez tout sang résiduel et tissu conjonctif en les rinçant dans du PBS glucosé glacé.Retirez le tiers supérieur de chaque cœur, de sorte que les deux tiers inférieurs restent. Pour isoler uniquement la majeure partie du tissu ventriculaire, placez le tissu dans une boîte de Pétri fraîche contenant du PBS froid additionné de glucose. À l’aide de ciseaux et de pinces stériles, hachez soigneusement les cœurs en morceaux d’environ un millimètre cube.Transférez le tissu dans un tube conique de 50 millilitres et retirez tout le tampon sauf 10 millilitres. Ajoutez sept millilitres de solution de collagénase. Agitez le mélange de tissu et de collagénase à 37 degrés Celsius pendant sept minutes.Effectuez doucement 10 pipetages pour fragmenter les morceaux de tissu. Laissez les morceaux se déposer, puis aspirez le liquide et jetez-le. Ajoutez 7 mL de collagénase aux morceaux de tissu et effectuez une nouvelle digestion pendant 7 minutes.Pour chaque étape restante, pipetez doucement 10 fois afin de fragmenter les morceaux de tissu. Après leur décantation, aspirez le surnageant et recueillez-le dans un tube conique séparé de 50 millilitres, ajoutez sept millilitres de collagénase aux morceaux de tissu et effectuez une nouvelle digestion pendant sept minutes. À chaque tube de surnageant, ajoutez 10 millilitres de solution d'arrêt à l’aide d’une pipette sérologique différente après chaque ajout de surnageant provenant de la digestion.Pour préparer la coulée de constructs en gel de fibrine, veuillez consulter la partie écrite du protocole. Placer les mandrins précédemment construits dans les carcasses de seringues de six cm³ en utilisant la seringue de trois cm³ comme piston afin d'obtenir un joint étanche entre les joints toriques et les rondelles en téflon. Pour préparer un millilitre de gel de fibrine, préparer la solution F dans un tube conique en ajoutant 112 microlitres de la solution mère de fibrinogène à 558 microlitres de HEPES 20 millimolaire.Tampon dans une solution saline à 0,9 % dans un tube conique séparé. Préparer une solution T en ajoutant 17 microlitres de la solution mère de thrombine et 1,3 microlitre de solution de calcium normal à 135 microlitres de DMEM. Dans un troisième tube conique, centrifuger les cellules et les resuspendre à une concentration de 29,4 millions de cellules par millilitre, soit six fois la concentration finale souhaitée des cellules dans le dispositif.En général, les personnes novices dans cette méthode éprouveront des difficultés lors de l'étape de fabrication du construct. Après avoir mélangé les solutions de fibrinogène et de thrombine, la polymérisation du fibrine se produit rapidement. Ainsi, les utilisateurs doivent travailler rapidement afin d'obtenir une solution homogène tout en évitant l'incorporation de bulles d'air dans l'hydrogel lors de l'injection dans le moule de moulage.Lorsque vous êtes prêt à couler le construct de gel de fibrine, préparez une seringue d'un millilitre équipée d'une aiguille de 18 gauge et de 1,5 pouce. Ayez également à portée de main une aiguille de 21 gauge et de 1 pouce. Pour préparer un millilitre de solution de gel de fibrine, ajoutez 667 microlitres de solution F dans un tube conique de 50 millilitres, puis 167 microlitres de solution cellulaire.Et enfin, 167 microlitres de solution T. Pipeter soigneusement le mélange afin de ne pas introduire de bulles d'air. À ce stade, la réaction a commencé et l'injection du construct doit être effectuée immédiatement.Utilisez la seringue et l'aiguille de calibre 18 pour prélever la solution de fibrine. Veillez à ne pas retourner la seringue afin d'éviter que des bulles n'entrent dans l'aiguille. Remplacez l'aiguille de calibre 18 par une aiguille de calibre 21.Tapotez doucement la seringue pour chasser toutes les bulles d'air. Ensuite, insérez la seringue dans le moule entre le bouchon englobant, en suivant la rainure de l'anneau torique en téflon, et injectez la solution dans le moule. Inclinez le moule pour en assurer le remplissage complet.Remplissez ensuite les moules restants. Emballez les moules dans du film parafilm par groupes de trois et placez-les dans l'incubateur ou le four à 37 degrés Celsius. Incubez les gels pendant 20 minutes afin de laisser suffisamment de temps à la fibrine pour polymériser complètement.Remplissez chaque bocal de culture avec 21 millilitres de milieu pour construct myocardique par construct. Utilisez la carcasse stérile d'une seringue de trois cc comme piston pour faire passer le mandrin portant le construct dans une grande boîte de Pétri contenant du DMEM. Ensuite, placez le construct dans le bocal d'échantillon.Incuber les bocaux à 37 degrés Celsius pendant deux semaines. Pour commencer l'analyse d'un échantillon de fibrine, fixer les pinces crocodile du câble provenant du stimulateur aux fils des électrodes dans le bain. Mettre sous tension la carte d'acquisition de données, le générateur d'impulsions et le transducteur de force.Régler le transducteur de force sur le réglage 5G et l'initialiser à zéro. Ouvrir un programme personnalisé de laboratoire qui affiche et enregistre les données provenant du transducteur de force. Créer un nouveau fichier texte vide dans le dossier de données pour chaque échantillon ; à l’aide de pinces, retirer le montage du support mandrin en faisant doucement glisser l’anneau du montage hors du support en téflon, puis le placer sur le poteau métallique fixe du système de mesure de force.Bain moyen. Utilisez la pince pour pousser et soulever le montage autour du poteau du transducteur de force. Placez l'autre extrémité du montage sur le bras du transducteur et serrez jusqu'à ce que le transducteur affiche une lecture.1,0 G de force sur le stimulateur cardiaque. Régler la tension d'impulsion à 20 volts, la durée à six millisecondes et la fréquence à un hertz. Démarrer la stimulation électrique en appuyant sur le bouton de sortie marche/arrêt.Commencer l'enregistrement jusqu'à ce que l'onde devienne régulière. Analyser l'onde à l'aide de MATLAB afin de déterminer la vitesse de contraction et la vitesse de relâchement. Le construct de fibrine de cardiomyocyte couvre initialement toute la largeur du moule.Après deux semaines de culture, il se contracte jusqu'à environ un cinquième de sa largeur initiale. Le balayage électrique de la préparation génère des données de force de contraction comme indiqué ici. Des forces de contraction d'environ 1,3 millinewtons sont attendues.La viabilité cellulaire du construct dépend de la distance des cellules par rapport à la surface du construct en contact avec le milieu de culture, en raison des limitations de diffusion de l'oxygène dans le construct. À la surface du construct, une forte viabilité cellulaire est observée à l’aide de la microscopie confocale. La structure alignée du construct est observée par coloration de la chaîne lourde de la myosine en rouge et de la Connexine 43, qui est nécessaire au couplage cellulaire entre les myocytes, en vert.Une fois maîtrisé, l'ensemble du protocole doit prendre environ cinq heures. La partie d'isolement I prendra environ trois heures, tandis que la partie de fabrication du dispositif prendra environ deux heures. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de toujours maintenir l'aiguille orientée vers le bas afin d'éviter l'incorporation de bulles d'air dans le réseau de fibrine.En outre, incliner le moule maintiendra toujours le trou de l'aiguille au point le plus élevé pendant l'injection, ce qui garantira que le moulage du moule est entièrement rempli de la solution de fibrine. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment encapsuler des cardiomyocytes dans des hydrogels de fibrine en forme d'anneau, en isolant d'abord les cardiomyocytes de rats néonataux, puis en réalisant un moulage par injection de la solution de fibrine dans des moules cylindriques faciles à assembler.

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