Name: Enrichissement des cellules NK du sang humain avec le Kit de RosetteSep StemCell Technologies (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 52 s
Description: Apprenez à isoler les cellules NK du sang humain par sélection négative avec le kit RosetteSep StemCell Technologies. Cette méthode garantit une haute pureté et viabilité cellulaire pour vos recherches en immunologie.

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Un protocole détaillé est inclus avec chaque cocktail Rosette isolement Sep et est disponible en ligne sur le site StemCell technologies 1.

<ol><li>Procedures and instruction manuals. , 
	
 <a target="_blank" href="http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx">http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx</a> Forthcoming.</li>
</ol>

Les cellules isolées en utilisant cette technique peut encore être séparées en différentes populations en utilisant d&#39;autres kits de séparation des cellules.

PBS supplémenté avec 2% de FCS et de solutions Histopaque doit être porté à la température ambiante avant le début de la procédure.

enrichissement des cellules nk du sang humain avec le kit de rosettesep stemcell technologies

Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies

Natural killer (NK) sont de grands lymphocytes cytotoxiques granulaires qui appartiennent au système immunitaire inné et jouent un rôle majeur dans la lutte contre le cancer et les infections, mais sont également impliqués dans les premiers stades de la grossesse et le rejet de greffe. Ces cellules sont présentes dans le sang périphérique, d&#39;où ils peuvent être isolés. Les cellules peuvent être isolées en utilisant la sélection positive ou négative. Pour la sélection positive, nous utilisons des anticorps dirigés contre un marqueur de surface présents uniquement sur les cellules d&#39;intérêt alors que pour la sélection négative, nous utilisons des cocktails d&#39;anticorps ciblés pour des marqueurs de surface présents sur toutes les cellules, mais les cellules d&#39;intérêt. Cette dernière technique présente l&#39;avantage de laisser les cellules d&#39;intérêt exempt d&#39;anticorps, réduisant ainsi le risque d&#39;activation des cellules indésirables ou de différenciation. Dans cette vidéo-protocole, nous démontrons comment séparer les cellules NK du sang humain par une sélection négative, en utilisant le kit de RosetteSep StemCell Technologies. La procédure consiste à obtenir du sang périphérique humain (sous une revue institutionnelle approuvée par le conseil protocole pour protéger les sujets humains) et le mélanger avec un cocktail d&#39;anticorps qui se lient à des marqueurs absents sur les cellules NK, mais présent sur toutes les autres cellules mononucléaires périphériques présents dans le sang (par exemple, les lymphocytes T, les monocytes ...). Les anticorps présents dans le cocktail sont conjugués à des anticorps dirigés contre la glycophorine A érythrocytes de suite. Toutes les cellules non désirées et les globules rouges seront donc pris au piège dans les complexes. Le mélange de sang et un cocktail d&#39;anticorps est ensuite diluée, superposé sur un gradient Histopaque, et centrifugé. Les cellules NK (&gt; 80% pur) peuvent être collectées à l&#39;interface entre les Histopaque et le plasma dilué. Cocktails similaires sont disponibles pour l&#39;enrichissement des autres populations cellulaires, telles que les lymphocytes T humains.

Les cellules tueuses naturelles sont une petite population de lymphocytes. Ici, nous montrons comment isoler ces cellules du sang humain par une sélection négative, en utilisant un kit de StemCell Technologies. Les cellules obtenues sont viables et épargnée par les anticorps, et donc prêt à être utilisé pour un certain nombre de procédures.

Enrichissement des cellules NK du sang humain avec le Kit de RosetteSep StemCell Technologies

Les cellules natural killer (NK) sont de grands lymphocytes cytotoxiques granulaires appartenant au système immunitaire inné et jouent des rôles majeurs dans la lutte contre le cancer ...

Bonjour, je suis Christine Beaton. Je suis chercheuse assistante dans le laboratoire de George Chen au Département de physiologie et de biophysique de l'Université de Californie à Irvine. Aujourd'hui, je vais vous montrer comment sélectionner négativement des cellules natural killer à partir de sang humain en utilisant les kits en cocktail de Stem Cell Technologies.La raison pour laquelle nous utilisons ce kit de Stem Cell Technologies est qu'il nous permet d'obtenir une pureté cellulaire très élevée, et la sélection négative nous permet d'isoler des cellules qui n'ont pas été liées à un anticorps. Ainsi, aucune réaction inattendue ne se produit avec ces cellules. Le fonctionnement du kit Tsep repose sur l'utilisation d'anticorps qui se lient à toutes les cellules présentes dans le sang auxquelles on n'est pas intéressé.Dans mon cas, les cellules T, les cellules B, les monocytes, puis vous avez les anticorps qui vont se lier à la glycophorine A des globules rouges ; ce qu’ils ont fait, c’est lier un anticorps dirigé contre une cellule blanche à un anticorps dirigé contre un globule rouge. Ce qui va donc se produire, c’est la formation d’un complexe composé d’une cellule blanche ind

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Nous décrivons ici une méthode pour développer efficacement et de purifier de grands nombres de cellules NK humaines et d'évaluer leur fonction.

Expansion, purification et d&#39;évaluation fonctionnelle des cellules NK humaines périphérique Sang

Cette vidéo montre la méthode d’analyse du métabolisme énergétique dans les cellules NK humaines activées à l’aide d’un analyseur de flux extracellulaire. Différents inhibiteurs des complexes de la chaîne de transport d’électrons ont un impact sur la synthèse de l’ATP, qui est mesurée par le taux de consommation d’oxygène ou OCR, fournissant des informations sur le métabolisme cellulaire et la bioénergétique.

Surveillance en temps réel du métabolisme énergétique dans les cellules NK humaines à l’aide d’un analyseur de flux extracellulaire

Ce protocole décrit le développement, l'expansion et l'imagerie in vivo des cellules NK dérivées de CSEh et iPSCs.

Le développement, l&#39;expansion et<em&gt; In vivo</em&gt; Suivi des cellules NK humaines à partir de cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) et et induit des cellules souches pluripotentes (CISP)

Une méthode simple et fiable est décrit ici pour analyser un ensemble de fonctions des cellules NK telles que la dégranulation, la cytokine et la production de chimiokines dans les différents sous-ensembles de cellules NK.

Cytométrie de flux à base de test pour la surveillance des cellules NK Fonctions

L’objectif de cette étude était de formuler des technologies permettant la transduction réussie de gène dans les cellules primaires de le natural killer (NK). L’induite par le dextran de transduction des gènes de l’homme ou les résultats de cellules NK primaires de souris à une efficacité accrue les expression de gène. Cette méthode de transduction gène améliorera la manipulation génétique de cellules NK.

Dextrane augmente l’efficacité de la Transduction des gènes des cellules NK primaires murines et humaines

Une méthode axée sur la cytométrie de flux pour déterminer quantitativement l’activité cytotoxique des humains les cellules tueuses naturelles est montrée ici.

Un test de cytotoxicité axée sur la cytométrie de flux pour l’évaluation de l’activité des cellules NK humaine

Nous présentons ici un protocole pour produire en série-silençage génique des cellules NK en utilisant un système de différenciation exempte d’engraissement pour étude mécanistique in vitro et in vivo.

Un nouveau système exempt d’alimentation pour la Production de masse des cellules tueuses naturelles murins In Vitro

Un protocole d’étude des événements induits par FcγRIIIa par des anticorps thérapeutiques dans des cellules tueuses naturelles humaines est décrit ici. Cette plate-forme de stimulation artificielle permet d’interroger les fonctions effectrices en aval telles que la dégranulation, la production de chimiokines / cytokines et les voies de signalisation médiées par les parties FcγRIIIa et Fc des anticorps impliqués dans la liaison.

Évaluation des événements des cellules tueuses naturelles humaines provoquées par l’engagement de FcγRIIIa en présence d’anticorps thérapeutiques

Le présent protocole montre comment différencier les cellules CD3−/CD45+CD56+ présentant une cytotoxicité légère des cellules souches à potentiel élargi humain (CSEPH) dans des conditions de culture 3D et 2D. Cela permet une validation phénotypique de routine sans la destruction du microenvironnement complexe.

Production de cellules tueuses naturelles à partir de cellules souches humaines à potentiel élargi

Ici, nous présentons une méthode pour différencier et étendre les cellules tueuses naturelles exprimant le récepteur de l’antigène chimérique (CAR) humain dérivé de l’iPSC avec une meilleure destruction contre diverses tumeurs malignes. Ce protocole démontre la différenciation et l’expansion des cellules CAR-NK dérivées d’iPSC optimisées pour les tueurs naturels (NK) et la mesure de l’activité antitumorale contre diverses lignées cellulaires tumorales.

Progrès dans les cellules tueuses naturelles exprimant le récepteur de l’antigène chimérique dérivé de cellules souches pluripotentes humaines induites

Apprenez à isoler les cellules NK du sang humain par sélection négative avec le kit RosetteSep StemCell Technologies. Cette méthode garantit une haute pureté et viabilité cellulaire pour vos recherches en immunologie.

Enrichissement des cellules NK du sang humain avec le Kit de RosetteSep StemCell Technologies

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