Name: Une technique simplifiée pour produire un modèle de plaie ischémique (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-02T12:00:00.000+00:00
Duration: 12 min
Description: Apprenez une technique chirurgicale minimalement invasive pour créer des plaies ischémiques chez les lapins diabétiques. Cette méthode par dissection des faisceaux vasculaires permet d'étudier la cicatrisation des plaies avec peu de perturbation cutanée.

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Cette étude a été financée en partie par des subventions du NIH et 1RO1DK74566 1RO1AM52984. Les auteurs tiennent à remercier Mme Jacqueline McCarty dans CRR pour son aide lors de la chirurgie, les Drs. Jianpu Wang et Harshini Sarojini pour leur aide dans les soins de chirurgie et post-opératoire de certains lapins, le Dr Rong Wan pour son travail histologie, et Mme Ming Li pour ses mesures de HPLC de phosphates à haute énergie.

1. Base anatomique L'oreille de lapin a été un matériau privilégié pour l'étude le soin des plaies depuis le début du 20 ème siècle. L'oreille est fournie par trois faisceaux vasculaires (central, crânienne, et caudale); le faisceau central est le plus grand, tandis que les navires dans les faisceaux crânienne et caudale sont de taille variable. Parfois, l'artère caudale peut être absent. 1 Tous ces navires sont facilement identifiables sur la face dorsale après l'oreille est rasée (Fig. 1). Sur la face ventrale, la peau distale ne reçoit pas l'approvisionnement en sang des vaisseaux proximaux. Les trois faisceaux des navires sur l'oreille dorsale ont de nombreuses branches qui pénètrent à travers le cartilage de fournir l'approvisionnement en sang à la peau ventrale distale (Fig. 2). Chez des lapins, un récipient très petite sous-cutanée se produit également sur le côté ventral, qui fournit le sang à pas plus de 1/3 de la peau ventrale. Dans une incision cutanée périphérique ouvert, il est essentiellement pas de saignement à partir d'une incision ventrale. 2. Procédure chirurgicale <ol><li> Le lapin est pesé et les oreilles sont rasés, avec l'arrière du cou. </li><li> Une prémédication de la buprénorphine (0,01 mg / kg) est administrée IM une heure avant la chirurgie. </li><li> L'anesthésie est induite par un mélange de kétamine (50 mg / kg) et de xylazine (5 mg / kg) IM. </li><li> Le lapin est protégé par un coussin chauffant pendant la chirurgie, les yeux sont protégés avec un onguent, et ses signes vitaux sont surveillés pendant la chirurgie. </li><li> Le champ opératoire est préparé de manière aseptique à un gommage chirurgicale et drapé de telle sorte que les deux oreilles sont exposés. </li><li> Une oreille est rendue ischémique, tandis que l'autre oreille sert de paires non-ischémique de contrôle. </li><li> Les trois pédicules vasculaires sont identifiés par les artères et les veines. </li><li> En utilisant une lame n ° 15, trois petites incisions verticales (1-1,5 cm) sont réalisés sur des pédicules vasculaires, environ 1-2 cm de la base de l'oreille. </li><li> La veine centrale estisolés à partir des tissus environnants et un fil de suture est utilisé pour l'encercler pour le retrait. L'artère centrale est ligaturé avec des sutures 4-0 et divisé. </li><li> Le nerf central d'accompagnement est également coupé. </li><li> Le pédicule toute crânienne est ligaturée et sectionnée. </li><li> Le pédicule caudal est préservée. </li><li> Un tunnel sous-cutané est effectuée par les incisions 3. Ceci est accompli par dissection avec une pince et les dissections pointues avec un couteau et des ciseaux. Tous les tissus sous-cutanés, les muscles, les nerfs, et les petites branches vasculaires sont interrompues. Les vascularisations petites dessous du derme sont totalement divisée. Tous les tissus sous-cutanés sont coupés au niveau du cartilage avec la lame. </li><li> Dissections plus nettes et franches sont utilisés pour nettoyer la base, laissant un cartilage nue environ 5-10 mm de large. </li><li> Cette procédure interrompt toutes les branches vasculaires sous-cutanés pour les empêcher de collatéraux établir rapidement. </li><li> Le saignement estminimale. Si il n'y a aucune, il est facilement contrôlée par compression de gaze, sans la nécessité d'électrocoagulation. </li><li> La peau à l'intérieur de l'oreille ne porte pas l'offre beaucoup de sang et n'est donc pas incisé. </li><li> Les 3 incisions cutanées sont fermées par des sutures 4-0 ou 5-0, et recouverte d'une gaze stérile. </li><li> Les résultats de la procédure en 3 petites incisions cutanées et subit des dommages beaucoup de peau à moins d'une chirurgie ouverte. </li><li> Quatre circulaires plaies cutanées de pleine épaisseur sont créés sur la face ventrale de chaque oreille avec un poinçon de 6 mm en acier inoxydable. La distance entre les blessures est d'au moins 20-30 mm. La peau à l'intérieur du poinçon plaie est retiré du cartilage. Le périchondre est également supprimé, avec la peau ou séparément. La base sur laquelle la granulation et l'épithélialisation lieu est le cartilage, le cartilage, mais n'est pas perforée (fig. 3). </li><li> Lorsque les plaies sur les deux oreilles sont terminées, des médicaments test est appliqué sur un côté de deux plaies tandis que le médicament est de commande applIED aux blessures de l'autre côté. Un pansement occlusif (Tegaderm, 3M) est utilisé pour couvrir le site de la plaie. Cela empêche les blessures de devenir déshydratée. </li><li> Les plaies à la partie inférieure de l'oreille normalement accélérer la cicatrisation de la blessure au haut de l'oreille. Pour une étude de comparaison de cicatrisation des plaies, il est recommandé de comparer les deux blessures sur un côté avec les deux plaies de l'autre côté, ou de comparer le haut et le bas séparément blessures. </li></ol> 3. Soins post-opératoires <ol><li> Un patch Duragesic est attachée à la peau du dos pour libérer fentanyl (25 pg / heure) pendant 2-3 jours pour réduire la douleur possible. </li><li> Les lapins ont libre accès à la nourriture et la boisson. </li><li> Les changements de pansement sont effectuées quotidiennement. Les pansements anciens sont supprimés et les plaies sont nettoyées avec des cotons-tiges stériles. Les photos numériques sont prises aux fins de comparaison. Nouveaux pansements sont appliqués, et les blessures sont couverts de nouveau par Tegaderm. Aucune anesthésie n'est nécessaire pendant l'habillage changes. </li><li> Température de la peau est mesurée quotidiennement sur chaque oreille pour la comparaison. </li><li> Complémentaires de circulation sanguin de l'oreille peut être mesurée avec un tensiomètre transcutanée en oxygène ou un débitmètre laser Doppler. </li><li> Les sutures peuvent être retirés au bout d'une semaine. </li><li> Pour les non-diabétiques animaux, la plupart des blessures se cicatrisent généralement d'oreille dans les 2-3 semaines. </li></ol> 4. Les complications possibles et comment les éviter Cette chirurgie mini-invasive est sûr et les complications sont rares. Sauf pour une période de transition post-opératoire oedème de l'oreille doux, aucun de nos lapins a eu des complications graves chirurgicales. Néanmoins, il existe plusieurs complications potentielles de cette procédure: <ol><li> Saignement. Le saignement peut se produire dans les incisions si l'hémostase est incomplète ou si un navire plus grand sang (tels que l'un des principaux vaisseaux pédiculaires) est endommagé. Ceci est facilement évitée par une dissection minutieuse. En plus des trois principaux faisceaux vasculaires, là unre de nombreux mineurs branches sous-cutanées vasculaires. Lorsque le tunnel sous-cutané est faite, ces navires sont réduits, mais pas de vente liée est nécessaire. L'hémostase peut être obtenue simplement en appuyant sur la gaze. Ceci se fait facilement en insérant un coin de la gaze dans le tunnel pendant quelques minutes. Avant de fermer l'incision, assurez-vous que pas de saignement actif est présent. </li><li> L'infection et la déhiscence Incision: Ces complications peuvent se produire si les incisions sont contaminés. Ceci peut être évité par l'utilisation d'une technique aseptique stricte et aucun antibiotique est nécessaire. Toutefois, si l'infection ne se produit, système de drainage approprié et les changements de pansement sont nécessaires. </li><li> Oedème de l'oreille: En raison de ligatures vasculaires et des perturbations de la circulation de la lymphe, oedème de l'oreille moyenne peut présenter pour quelques jours. Cependant, il disparaît par lui-même et aucun traitement n'est nécessaire. </li></ol> 5. Les résultats représentatifs Depuis 2007, nous avons utilisé cette procédure dans plus de 70 lapins, dont 23 diabétiques uneimals. Dans le groupe des diabétiques, la chirurgie a été effectuée à des moments différents diabétiques: sept lapins ont eu deux semaines de temps diabétique, quatre d'entre eux disposaient de deux mois, dix avaient 12 mois, et 2 ont eu 24 mois de temps diabétique. Immédiatement après la chirurgie, l'oreille ischémique est apparu frais et cyanosé, avec un léger œdème. L'oreille la plus importante artère de la centrale-artère a une forte impulsion à l'oreille normale, mais cette impulsion n'était pas présent dans l'oreille ischémique. Mouvement d'oreille a été réduit, mais n'a pas totalement disparu. La peau a montré dépressions claires sur le tunnel, mais pas d'ischémie ou de nécrose a été trouvé dans n'importe quel animal (Fig. 4). Les températures de la peau des oreilles normales et ischémique ont été mesurées avec un thermomètre numérique (Omron par Omron Healthcare, Bannockburn, IL, ou un type K Thermomètre infrarouge place par Fisher Scientific, Pittsburgh, PA). Les différences de température entre l'oreille non-ischémiques et ischémique variait de 1 à 10 ° C, wvec la plupart des lapins tombant dans l'intervalle de 2-6 ° C. Fig. La figure 5 montre les différences de température moyenne de 30 lapins. La différence de température était plus élevée dans les premiers jours après la chirurgie, a diminué progressivement après 15 jours, mais il a été toujours maintenue à la fin d'un mois. Le contenu de tissus phosphate à haute énergie ont été mesurées chez certains animaux après qu'ils ont été sacrifiés. Six échantillons de tissus ont été prélevés dans chaque oreille et le contenu de phosphate à haute énergie ont été mesurées par HPLC. Les deux ATP et les concentrations totales d'énergie ont été plus élevés dans les oreilles normales que dans les oreilles ischémiques. Fig. La figure 6 montre un exemple d'un lapin sacrifié 23 jours après la chirurgie. Les moyennes des tissus le contenu en ATP étaient 0,349 ± 0,047 mmol / g (moyenne ± écart type) dans l'oreille normale vs 0,237 ± 0,059 mmol / g dans l'oreille ischémique (p &lt;0,005). Moyenne totale d'énergie (ATP + ADP + AMP) était 0,882 ± 0,137 mmol / g dans l'oreille normale vs 0,556 ± 0,115 mmol / g dans le ische micro oreille (p &lt;0,001). Fois la cicatrisation des plaies étaient toujours plus pour l'oreille ischémique que pour l'oreille non-ischémique dans tous les groupes (non-diabétique ou diabétique). Fig. 7 montre une comparaison de la guérison entre les 26 paires de blessures sur les oreilles ischémiques et non ischémiques. Temps de guérison varie de 13 à 18 jours (moyenne de 14,9 ± 1,6 jours) sur les oreilles normales vs 17 à 27 jours (moyenne 20,5 ± 3,4 jours) sur les oreilles ischémiques (p = 0,001). Fois la cicatrisation des plaies chez les lapins âgés et diabétiques étaient beaucoup plus, surtout quand le temps était diabétique de plus de 12 mois. Dans ces lapins, tous les incisions guéries normalement sans aucune complication, y compris les lapins avec 24 mois de temps diabétiques. Figure 8 est un échantillon histologique montrant le tunnel sous-cutanée guérie dans laquelle le muscle est absent et est remplacé par des tissus fibreux. Toutefois, la peau est intacte. / 3341fig1.jpg "/&gt; Figure 1. L'oreille de lapin est alimenté par trois faisceaux vasculaires. La centrale est le plus grand, le crâne est plus petit, et le faisceau caudale est le plus petit. Ces navires sont facilement visibles sur la surface après l'oreille est rasée. <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/3341/3341fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 2"> Figure 2. Les trois faisceaux de navires sur le sang d'approvisionnement oreille dorsale non seulement à la peau du dos, mais aussi à la peau ventrale à travers les vaisseaux pénétrants. La flèche montre les vaisseaux pénétrants à travers le cartilage. L'encart montre traverser la section de ces navires. <img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/3341/3341fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 3"> Figure 3. Quatre de 6 mm blessures sont créées sur la face ventrale de l'oreille, et le périchondre est également supprimé. La base sur laquelle la granulation et l'épithélialisation lieu est le cartilage, le cartilage, mais n'est pas perforée. Le smal 3 incisions cutanées l sont fermées par des perturbations très peu de la peau. <img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/3341/3341fig4.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 4"> Figure 4. Fois les entailles de peau sont fermés, l'indentation sur le tunnel sous-cutané est clairement visible. <img alt="Figure 5" src="/files/ftp_upload/3341/3341fig5.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 5"> Figure 5. La différence moyenne de la peau de température entre l'oreille normale et ischémique chez 30 lapins. Les différentes plages de début de 7 ° C à 10 ° C après la chirurgie. La différence diminue progressivement mais toujours maintenue à l'extrémité d'un mois. <img alt="Figure 6" src="/files/ftp_upload/3341/3341fig6.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 6"> Figure 6. Oreille contenu tissus phosphate à haute énergie sont réduits dans l'oreille ischémique par rapport aux non-ischémique oreille à 23 jours après la chirurgie (p &lt;0,001). 41/3341fig7.jpg "/&gt; Temps la figure 7. La cicatrisation des plaies est plus longue dans les oreilles ischémiques que les oreilles non-ischémiques (26 plaies chacun). La guérison est définie comme la restauration de l'intégrité des tissus blessés, à savoir la réépithélialisation complète des sites de la plaie. <img alt="Figure 8" src="/files/ftp_upload/3341/3341fig8.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 8"> Figure 8. Échantillon histologie montrant la partie oreille contenant tunnel sous-cutané. Le tissu cicatrisé est plus mince que l'oreille normale, le muscle squelettique d'origine est absent et est remplacé par les tissus fibreux. Toutefois, la peau est intacte.

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Il n&#39;ya pas de conflit d&#39;intérêts financiers impliqués dans cette étude.

Le diabète affecte 23,6 millions de personnes aux États-Unis, 2,3 et 15-20% de ces patients développent des ulcères du pied dans leur vie, 4,5 pour un coût de traitement annuel de plus de 25 milliards de dollars. 3,6 Cependant, même le meilleur disponible traitements atteindre seulement un taux de guérison de 50%, ce qui est souvent temporaire, 7 avec des taux de récidive aussi élevés que 66% chez les diabétiques. 3,6 Lorsque les ulcères chez les patients diabétique...

Pour la surveillance pendant la chirurgie <ol><li> Un coussin chauffant pour maintenir la température normale. </li><li> Un moniteur d&#39;oxygène transcutanée. </li><li> Un contrôleur de température. </li></ol> Pour la chirurgie <ol><li> Un couteau N ° 3 avec N ° 15 lame. </li><li> Deux paires de pinces (un pour la peau et un autre pour les autres tissus mous). </li><li> 2-3 paires de petites pinces. </li><li> Une ou deux paires de ciseaux (micro pour la coupe de tissus). </li><li> Une paire de petits ciseaux (pour couper les sutures). </li><li> Porte-aiguille. </li><li> Quelques coups de poing en acier inoxydable (pour la fabrication de blessures). </li></ol>

une technique simplifiée pour produire un modèle de plaie ischémique

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

Un obstacle majeur dans la recherche actuelle plaie diabétique est l&#39;absence d&#39;un modèle de plaie ischémique qui peut être utilisé sans danger chez les animaux diabétiques. Les médicaments qui fonctionnent bien dans les plaies ischémiques non-peuvent ne pas fonctionner dans les plaies diabétiques de l&#39;homme parce vasculopathie est un facteur majeur qui entrave la guérison de ces blessures. Nous avons publié un article en 2007 décrivant une oreille de lapin plaie ischémique modèle créé par une technique chirurgicale minimalement invasive. Depuis lors, nous avons encore simplifié la procédure pour faciliter l&#39;opération. Sur une oreille, trois petites incisions cutanées ont été faites sur les pédicules vasculaires, de 1-2 cm de la base de l&#39;oreille. L&#39;artère centrale a été ligaturé et couper le long du nerf. Le faisceau a été coupé toute crânienne et ligaturé, ne laissant que la branche caudale intacte. Un tunnel sous-cutanée périphérique a été faite par les incisions, pour couper les tissus sous-cutanés, les muscles, les nerfs et les vaisseaux de petite taille. L&#39;autre oreille a été utilisé comme un contrôle non-ischémique. Quatre blessures ont été faites sur la face ventrale of chaque oreille. Cette technique produit 4 plaies ischémiques et non ischémiques 4 blessures à un animal pour des comparaisons par paires. Après la chirurgie, l&#39;oreille ischémique était fraîche et cyanosé, et a montré le mouvement réduit et un manque d&#39;impulsion dans l&#39;artère oreille. Température de la peau de l&#39;oreille ischémique était 1-10 ° C inférieure à celle sur l&#39;oreille normale et cette différence a été maintenue pendant plus d&#39;un mois. Ear contenu tissus phosphate à haute énergie ont été plus faibles dans l&#39;oreille ischémique que l&#39;oreille de contrôle. Fois la cicatrisation des plaies était plus longue dans l&#39;oreille ischémique que dans l&#39;oreille non-ischémique quand le même traitement a été utilisé. La technique a été utilisée sur plus de 80 lapins dans lequel 23 étaient diabétiques (le diabète de temps allant de 2 semaines à 2 ans). Pas de lapin seul a développé des complications chirurgicales comme des saignements, une infection ou une rupture dans les incisions cutanées. Le modèle présente de nombreux avantages, comme la perturbation peu de peau, le temps plus ischémique, et le taux de réussite plus élevé, par rapport à beaucoup d&#39;autres modèles. Il can être utilisé sans danger chez les animaux présentant une résistance réduite, et peut également être modifié pour répondre aux exigences d&#39;essai différentes.

Nous avons développé une technique mini-invasive pour créer un lapin modèle ischémique plaie oreille en divisant l&#39;artère centrale et le nerf et le paquet vasculo-nerveux crânienne. Un tunnel sous-cutané coupe alors tous les tissus sous-cutanés. Cette procédure entraîne des perturbations minimes et la peau peut être utilisé sans danger chez les animaux diabétiques.

Une technique simplifiée pour produire un modèle de plaie ischémique

L'un des obstacles majeurs dans la recherche actuelle sur les plaies diabétiques est l'absence d'un modèle de plaie ischémique pouvant être utilisé en toute sécurité chez des animaux diabétiques. Les médicaments qui fonctionnent...

L'objectif général de l'expérience suivante est de permettre la création de plaies ischémiques, non seulement chez les lapins normaux, mais également chez les lapins présentant une résistance réduite, comme les animaux âgés ou diabétiques. Toutes les techniques actuellement utilisées pour la création de plaies ischémiques sont hautement invasives, et jusqu'à présent, aucune de ces techniques ne peut être utilisée chez des animaux diabétiques. Cette procédure utilise une chirurgie peu invasive qui commence par la réalisation de trois petites incisions cutanées au-dessus des trois faisceaux vasculaires.L'étape suivante consiste à isoler et protéger la veine centrale et le cordon vascularisé afin de réduire la circulation sanguine vers l'oreille sans toutefois l'éliminer complètement. Enfin, les vaisseaux restants, les nerfs et les tissus sous-cutanés sont tous sectionnés ou ligaturés par les incisions cutanées. L'ischémie de l'oreille est confirmée par l'absence de pouls artériel, l'aspect de l'oreille, la différence de température et la saturation en oxygène du tissu sous-cutané.Cette chirurgie peu invasive peut sembler difficile à réaliser, mais elle est en réalité très facile. Le principal avantage de cette technique est qu'elle provoque très peu de perturbation cutanée. Depuis que nous avons publié cette technique pour la première fois en 2007, nous avons reçu de nombreuses questions.Nous avons depuis encore simplifié cette procédure. Pour la rendre encore plus facile à réaliser sans utiliser de microscope, commencez par peser le lapin sélectionné, anesthésiez le lapin à l’aide d’un mélange de kétamine et de xylazine. Surveillez les signes vitaux du lapin ; trois faisceaux vasculaires qui vascularisent l’oreille peuvent être identifiés sur la face dorsale.Ces éléments sont le faisceau central, qui est le plus volumineux et possède des collatéraux reliant d'autres vaisseaux, le faisceau coddle dans lequel l'artère est généralement très petite ou absente, et le faisceau crânien. Du côté ventral, la peau distale ne reçoit pas d'apport sanguin en provenance des vaisseaux proximaux.En revanche, les faisceaux vasculaires situés au niveau de l'oreille dorsale possèdent de nombreuses branches pénétrantes traversant le cartilage afin d'assurer l'irrigation sanguine de la peau ventrale distale. Chez certains lapins, un très petit vaisseau sous-cutané est également présent sur la face ventrale, qui vascularise tout au plus un tiers de la peau ventrale. Lors d'une incision cutanée circulaire ouverte, il n'y a pratiquement aucun saignement provenant d'une incision ventrale.Avant de poursuivre, vérifiez que le lapin ne réagit pas aux stimuli douloureux en pinçant un orteil et en testant le réflexe oculaire ; protégez les yeux de l'animal en appliquant une pommade lubrifiante pour les yeux. Maintenez le lapin au chaud pendant la chirurgie à l’aide d’un tapis chauffant. Ensuite, désinfectez les deux oreilles et les zones cutanées environnantes avec une solution de Bétadine et d’alcool, puis placez un champ opératoire de manière à ce que seules les deux oreilles soient exposées.Une oreille sera rendue ischémique tandis que l'autre servira de témoin. Les instruments utilisés pour la chirurgie sont un bistouri avec une lame n°15, deux paires de pinces, une pour la peau et une autre pour les autres tissus mous. Trois pinces de type moustique, une ou deux paires de ciseaux microchirurgicaux courbes, une paire de petits ciseaux pour couper les sutures et les tissus résistants, une pince porte-aiguille et quelques poinçons en acier inoxydable.Commencez la chirurgie en identifiant les trois pédicules vasculaires selon les artères et les veines. À l’aide d’un bistouri n°15, effectuez soigneusement une incision cutanée verticale sur le pédicule vasculaire central.Isolez la veine centrale des tissus environnants et protégez-la. Cette étape encercle la veine centrale en vue de sa rétraction.Disséquez le nerf central en le libérant. Il se situe normalement du côté coddle de la veine. On coupe le nerf avec des ciseaux.Dissez l'artère centrale en la libérant. Elle se situe normalement du côté crânien et est plus profonde que la veine ; ligaturez l'artère et sectionnez-la. Nettoyez les tissus entourant la veine centrale au-dessus du cartilage de l'oreille.Une seconde incision cutanée est pratiquée au-dessus du pédicule coddle. Pour préserver le faisceau, les vaisseaux sont disséqués et isolés pour protection.Cela est particulièrement utile lorsque la veine est de grande taille, comme chez ce lapin. Créez un tunnel entre cette incision et la première. Incisez les tissus sous-cutanés situés au-dessus du cartilage.Une troisième incision cutanée est pratiquée au-dessus du faisceau crânien. Ce faisceau entier est ligaturé et séparé. La peau recouvrant le troisième faisceau est ouverte par une incision.Cette veine est très proche de la peau, donc ne coupez pas trop profondément. L'ensemble du cordon vasculaire est ensuite disséqué, ligaturé et séparé. À l'aide d'un couteau et de ciseaux, créez un tunnel sous-cutané.Les trois incisions sectionnent tous les tissus sous-cutanés, muscles, nerfs et petites branches vasculaires. Utilisez des dissections supplémentaires, tant aiguës que contondantes, pour nettoyer la base, en laissant apparaître le cartilage nu sur une largeur d'environ cinq à dix millimètres. Les saignements peuvent être contrôlés par une pression avec un pansement.La cautérisation électrique est inutile. La peau à l'intérieur de l'oreille n'est pas incisée car elle ne contient que peu de vaisseaux sanguins. L'aspect important de cette procédure consiste à assurer une dissection adéquate du tunnel sous-cutané tout en protégeant les vaisseaux.Cette procédure ne devrait pas être si difficile. Après l’hémostase, les trois incisions cutanées sont fermées à l’aide de fils 4-0 ou 5-0 et vérifiées à nouveau pour s’assurer que les incisions sont correctement refermées et qu’aucun saignement n’est visible. Pour les tests de médicament sur les plaies, quatre plaies cutanées circulaires de pleine épaisseur peuvent être réalisées sur la face ventrale de chaque oreille à l’aide d’un poinçon en acier inoxydable de six millimètres.La distance entre les plaies est d'au moins 20 à 30 millimètres. La peau et le périchondre à l'intérieur du punch sont retirés, mais le cartilage n'est pas endommagé. Une fois les plaies créées sur les deux oreilles, recouvrez-les temporairement avec un pansement et transférez le lapin dans une salle de procédure pour l'application du médicament.Une fois les plaies débarrassées de tous caillots sanguins, appliquez les médicaments en cours d'évaluation et les médicaments de contrôle. Les plaies sont recouvertes d'un pansement occlusif afin d'éviter la dessiccation. Lors de la comparaison de deux médicaments, appliquez chaque médicament sur une plaie proximale et une plaie distale.Ceci permet de contrôler les différences de taux de cicatrisation entre les régions distale et proximale de l'oreille après l'opération. L'oreille ischémique devient généralement froide et cyanosée, avec une sensibilité réduite en regard de la zone distale à l'incision. Un œdème léger peut apparaître pendant quelques jours, mais il disparaît spontanément et aucun traitement n'est nécessaire.Le pouls de l'artère centrale est absent. Le mouvement de l'oreille est réduit, mais pas totalement éliminé car certains muscles sont encore attachés à la base de l'oreille. Si le tunnel est réalisé correctement, une indentation nette peut être observée entre les incisions.Un patch de fentanyl est fixé sur la peau du dos pour soulager d'éventuelles douleurs postopératoires. La température cutanée est mesurée quotidiennement sur chaque oreille à l'aide d'un thermomètre. La circulation sanguine est évaluée dans l'oreille à l'aide d'un tensiomètre transcutané d'oxygène ou d'un débitmètre laser Doppler.Une semaine après l'intervention, les points de suture des incisions cutanées peuvent être retirés depuis 2007. La procédure a été utilisée chez plus de 70 lapins, dont 23 lapins diabétiques et quatre lapins âgés.Les différences de température entre l’oreille non ischémique et l’oreille ischémique variaient d’un à dix degrés Celsius, la plupart des lapins se situant dans la fourchette de deux à six degrés Celsius. La différence de température était plus élevée dans les premiers jours suivant la chirurgie, puis diminuait progressivement après le jour 15, tout en restant perceptible à la fin du mois. Six échantillons de tissu ont été prélevés sur chaque oreille, et les teneurs en phosphates à haute énergie ont été mesurées par HPLC, tant pour l’ATP que pour l’énergie totale.Les concentrations étaient plus élevées dans les oreilles normales que dans les oreilles ischémiques. Les temps de cicatrisation étaient toujours plus longs pour l'oreille ischémique que pour l'oreille non ischémique chez les animaux non diabétiques et diabétiques, sur 15 lapins non diabétiques. Le temps moyen de cicatrisation était de 17,8 jours sur l'oreille non ischémique contre 21,8 jours sur l'oreille ischémique.Chez les animaux diabétiques âgés de 10 à 12 mois, le temps de cicatrisation moyen était de 18,3 jours sur l'oreille non ischémique contre 29,1 jours sur l'oreille ischémique. Chez tous les animaux, y compris les lapins diabétiques, les incisions cutanées ont cicatrisé normalement sans aucune complication. Avec une durée de diabète de 24 mois, les plaies ventrales ont une tendance accrue à s'infecter.Cette caractéristique le rapproche des plaies diabétiques humaines. Un échantillon d'histologie montre la cicatrisation du tunnel sous-cutané dans lequel le muscle est absent et remplacé par des tissus fibreux. Toutefois, la peau est intacte.Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de se souvenir de traiter les animaux de manière humane. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en moins d'une heure. Nous avons utilisé cette technique sur plus de 70 lapins, dont 23 lapins diabétiques, sans aucune complication telle qu'un saignement ou une infection.Il s'agit d'une procédure très sûre suivant ce protocole. D'autres méthodes telles qu'une ischémie supplémentaire, des lésions nerveuses et une inoculation bactérienne peuvent être réalisées afin de répondre à des questions supplémentaires, comme celles concernant les ulcères vasculaires, les escarres et la neuropathie diabétique.

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