Name: Génération dalginate de microsphères pour des applications biomédicales (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 33 s
Description: Découvrez la fabrication de microsphères d'alginate multicouches pour l'encapsulation cellulaire et protéique. Cette méthode innovante améliore les systèmes de libération de médicaments pour le traitement du diabète de type 1.

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Cette étude a été financée par le département américain des Anciens Combattants (Washington DC), les subventions, les 0852048 0731201, 0854430 et de la National Science Foundation (Arlington, VA), et la subvention RO1 DK080897 de la National Institutes of Health (Bethesda, MD) . M. Khanna a reçu le soutien d&#39;un généreux don de M. Edward Ross et le Dr Monica Moya de la Fondation Bill &amp; Melinda Gates Foundation (Seattle, WA).

Le protocole décrit ici une procédure en trois étapes pour générer des microbilles d'alginate multicouches (Figure 1). Première, microbilles d'alginate sont formé (figure 2A). Cette procédure est décrite dans la section 1 ci-dessous. Cellules ou des protéines peuvent être ajoutés à des microbilles de cette étape pour agir en tant que système de délivrance. L'étape suivante consiste à la formation d'une couche permsélective sur les microbilles et est décrite dans l'article 2. La dernière étape consiste à la formation d'une couche d'alginate supplémentaire et est décrite dans l'article 3. Cette couche se forme à l'extérieur de la surface des billes (figure 2B) peut être utilisé pour encapsuler et délivrer des molécules thérapeutiques (figure 2C) pour diriger la réponse cellulaire à la transplantation système suivant. 1. Préparation à micro-alginate <ol><li> Préparer une solution à 1,5% (p / v) alginate LVM en dissolvant 15 g de l'alginate de LVM dans 1 ml deinterne solution d'alginate couche (25 mM de tampon HEPES, 118 mM de NaCl, 5,6 mM de KCl, et 2,5 mM de MgCl 2 dans de l'eau DI, ajusté à pH 7,4). Mélanger sur un Vortexer jusqu'à ce que le pouvoir d'alginate a complètement dissous pour former une solution claire, visqueuse. Note: Ce protocole décrit les conditions optimales pour l'encapsulation des îlots au sein de microcapsules d'alginate 1 La concentration et la composition des microsphères d'alginate peut être modifiée pour accorder des propriétés pour d'autres applications (par exemple l'administration de médicaments, l'ingénierie tissulaire, etc) Remarque: Pour l'encapsulation des îlots les îlots peut être ajouté à la solution d'alginate à cette étape avant le chargement dans le microencapsulator. </li><li> Préparer la solution de réticulation (22 mM de CaCl 2 dans l'eau DI) en dissolvant 100 mM de CaCl 2 et 10 mM de tampon HEPES dans l'eau DI et ajuster le pH à 7,4. Note: d'autres cations divalents tels que Br 2 +, Sr 2 +, etc peut être utilisé à la place de Ca 2 +, en fonction de la nature de gélification d'alginate desired. </li><li> Mettre en place la microencapsulator deux canaux d'air alginate veste en ajoutant une aiguille de calibre 25 à une seringue, et d'ajuster les soupapes de chaque côté pour s'assurer que l'aiguille est dans le centre de la veste de l'air. Des aiguilles de calibre différents peuvent être utilisés pour cette étape, en fonction de la taille de microbilles d'alginate ciblées. Cette étape peut également être effectuée avec une seringue, si un microencapsulator ne pas être disponibles. Ajouter la solution d'alginate de la seringue, et sélectionner une aiguille de calibre sur la base de la taille des microbilles souhaités. </li><li> Placez un ballon contenant 10 ml de solution de réticulation directement sous l'aiguille. Placez une barre d'agitation dans la solution. </li><li> Injecter des gouttelettes directement dans le solution de CaCl 2 de manière à réticuler l'alginate pour former des microbilles. Incuber les perles dans la solution de réticulation pour durcir pendant au moins quinze minutes, en remuant constamment. </li><li> Transfert des billes dans un tube à centrifuger de 15 ml. Retirer la solution résiduelle,et d'effectuer trois lavages avec un 2 0,2% CaCl dans une solution saline normale pendant deux minutes chacun. </li></ol> 2. Revêtement des microbilles avec Poly-L-ornithine <ol><li> Préparer 3 ml d'une solution à 0,1% (p / v) de la poly-L-ornithine (PLO) dans une solution saline normale. Placer la solution sur un vortex jusqu'à ce qu'il soit complètement dissous, formant une solution claire. Poly-L-lysine (PLL) peut être utilisé à la place de l'OLP pour cette étape, qui se traduit par des niveaux similaires de permsélectivité. </li><li> Transfert des microbilles d'alginate dans la solution OLP. Placer sur un Vortex pendant 30 minutes pour permettre à l'OLP suffisamment de temps pour interagir avec l'alginate, formant un complexe polycation-polyanion. Au bout de 30 minutes, il devrait y avoir un revêtement blanc nettement visible autour des microbilles d'alginate. </li><li> Retirer la solution OLP, et d'effectuer trois lavages avec CaCl 2 0,2% dans une solution saline normale pendant deux minutes chacun. </li></ol> 3. Création de l'alginate extérieur Layer <ol><li> Préparer une solution d'alginate de concentration voulue qui doit être utilisé pour créer la couche extérieure. La solution est préparée comme décrit dans (1,1) ci-dessus. La taille de la couche extérieure est influencée par la composition et la concentration d'alginate utilisé (figure 3). </li><li> Transfert des microbilles d'alginate à une cellule-passoire. Utilisez un Kimwipe pour absorber l'excès de solution afin de sécher les microbilles autant que possible. </li><li> Transfert des microbilles sur une surface Parafilm. Autres surfaces lisses comme le verre ou même un plat de Petri en plastique peut être substitué pour Parafilm, si désiré. </li><li> Transférer la solution d'alginate préparée en (3.1) sur les microbilles d'alginate. Le volume de solution d'alginate être doit couvrir complètement les microbilles d'alginate. Laissez-les microbilles restent dans la solution d'alginate pendant 45 minutes. </li><li> Utiliser une pipette pour enlever la solution d'alginate en excès non lié à des microbilles. </li><li> Transfert des microbilles dansà une solution de CaCl 2 22mm. Ce réticule la solution d'alginate autour des microbilles, conduisant à la formation de la couche d'alginate extérieure distincte. </li><li> Effectuer trois lavages avec 22 mM de CaCl 2 dans une solution saline normale pendant deux minutes chacun. Affichage des microbilles au microscope devraient permettre une couche d'alginate extérieure distincte à voir formé autour de la microbille de base. </li></ol> 4. Les résultats représentatifs <img src="/files/ftp_upload/3388/3388fig1.jpg" alt="Figure 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figure 1"> Figure 1. Un schéma de la procédure de création des microbilles d'alginate multicouches. Reproduit avec la permission de Khanna et al. J Biomed Mater Res A. Nov; 95 (2), 632-40 (2010). <img src="/files/ftp_upload/3388/3388fig2.jpg" alt="Figure 2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figure 2"> Figure 2. (A) et (B) sont des images à contraste de phase de microbilles d'alginate. (A) montre une microbilleaprès l'étape de synthèse (1,7), tandis (B) affiche une couche d'alginate distincte extérieure présente après l'achèvement de l'étape (3.7). (C) est une image FITC de la protéine à marquage fluorescent BSA encapsulé dans la couche externe. Reproduit avec la permission de Khanna et al. J Biomed Mater Res A. Nov; 95 (2), 632-40 (2010). <img src="/files/ftp_upload/3388/3388fig3.jpg" alt="Figure 3" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figure 3"> Figure 3. La taille de la couche extérieure d'alginate peut être modifiée sur la base de la composition et la concentration d'alginate utilisé. Nos résultats montrent que, à la fois pour LVM et l'alginate de LVG, les augmentations de la taille des calques avec extérieurs concentration d'alginate croissante, et que l'alginate de LVG donne plus épaisses couches externes de l'alginate de LVM à des concentrations égales. Reproduit avec la permission de Khanna et al. J Biomed Mater Res A. Nov; 95 (2), 632-40 (2010). <img src="/files/ftp_upload/3388/3388fig4.jpg" alt="Figure 4" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figure 4"> Figure 4. Sortie du FGF-1, une protéine facteur de croissance angiogénique, de la couche extérieure d'alginate varier sur la base de la concentration de l'alginate de LVM et LVG utilisé. (A) et (B) la libération pour cent émission, et (C) et (D) représentent la libération de masse correspondante du FGF-1 en fonction du temps pour différentes formulations de couche extérieure. Il s'agit d'une version d'éclatement exposé à toutes les conditions au sein de l'initiale de 5 h (A et C), et à faible dose à libération continue pour un maximum de 30 jours (B et D). Reproduit avec la permission de Khanna et al. J Biomed Mater Res A. Nov;. 95 (2), 632-40 (2010) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3388/3388fig4large.jpg" target="_blank">Cliquez ici pour agrandir la figure</a> .

<ol><li>Darrabie, M. D., Kendall, W. F., Opara, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+Poly-L-+Ornithine-coated+alginate+microcapsules%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Characteristics of Poly-L- Ornithine-coated alginate microcapsules.</a> Biomaterials. 26, 6846-6852 (2005).</li>
<li>Yamagiwa, K., Kozawa, T., Ohkawa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+alginate+composition+and+gelling+conditions+on+diffusional+and+mechanical+properties+of+calcium-alginate+gel+beads%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Eng.+Jpn%22%5BJournal%5D)">Effects of alginate composition and gelling conditions on diffusional and mechanical properties of calcium-alginate gel beads.</a> J. Chem. Eng. Jpn. 28, 462-467 (1995).</li>
<li>Amsden, B., Turner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusion+characteristics+of+calcium+alginate+gels%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Diffusion characteristics of calcium alginate gels.</a> Biotechnol. Bioeng. 65, 605-610 (1999).</li>
<li>Uriel, S., Brey, E. M., Greisler, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+low+levels+of+fibroblast+growth+factor-1+promote+persistent+microvascular+network+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Surg%22%5BJournal%5D)">Sustained low levels of fibroblast growth factor-1 promote persistent microvascular network formation.</a> Am. J. Surg. 192, 604-609 (2006).</li>
<li>Moya, M. L., Lucas, S., Francis-Sedlak, M., Liu, X., Garfinkel, M. R., Huang, J. J., Cheng, M. H., Opara, E. C., Brey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+delivery+of+FGF-1+increases+vascular+density+in+comparison+to+bolus+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Sustained delivery of FGF-1 increases vascular density in comparison to bolus administration.</a> Microvasc. Res. 78, 142-147 (2009).</li>
<li>Moya, M. L., Cheng, M. H., Huang, J. J., Francis-Sedlak, M. E., Kao, S. W., Opara, E. C., Brey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+FGF-1+loaded+alginate+microbeads+on+neovascularization+and+adipogenesis+in+a+vascular+pedicle+model+of+adipose+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The effect of FGF-1 loaded alginate microbeads on neovascularization and adipogenesis in a vascular pedicle model of adipose tissue engineering.</a> Biomaterials. 31, 2816-2826 (2010).</li>
<li>Khanna, O., Moya, M. L., Greisler, H. P., Opara, E. C., Brey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multilayered+Microcapsules+for+the+Sustained-Release+of+Angiogenic+Proteins+From+Encapsulated+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Surg%22%5BJournal%5D)">Multilayered Microcapsules for the Sustained-Release of Angiogenic Proteins From Encapsulated Cells.</a> Am. J. Surg. 200, 655-658 (2010).</li>
<li>Khanna, O., Moya, M. L., Opara, E. C., Brey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+multilayered+alginate+microcapsules+for+the+sustained-release+of+fibroblast+growth+factor-1%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Mater.+Res.+A%22%5BJournal%5D)">Synthesis of multilayered alginate microcapsules for the sustained-release of fibroblast growth factor-1.</a> J. Biomed. Mater. Res. A. 95, 632-640 (2010).</li>
</ol>

Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

Alginate est un produit naturel, un polysaccharide acide extraite d&#39;algues et est composé d&#39;unités de 1,4 &#39;-β-D-mannuronique acide (M) et α-L-guluronique (G) 2,3. Gélification simple se produit lorsque des cations divalents, tels que Ca 2 +, Sr 2 +, Ba 2 + ou d&#39;interagir avec du G-monomères formant des ponts entre les chaînes d&#39;alginate ioniques adjacents. Microbilles de l&#39;alginate ont été utilisés pour fournir une variété de protéines, y compris facteu...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires (optionnel) </td></tr><tr><td> Pronova ultrapure LVG alginate </td><td> Nouvelle-Matrix </td><td> 4200006 </td><td> Une variété de formulations d&#39;alginate sont disponibles. Le choix de l&#39;alginate de influe sur les propriétés finales des microbilles, y compris la taille, les propriétés mécaniques et de transport. La composition utilisée doit être optimisée pour une application donnée. </td></tr><tr><td> Pronova ultrapure LVM alginate </td><td> Nouvelle-Matrix </td><td> 4200206 </td><td> Une variété de formulations d&#39;alginate sont disponibles. Le choix de l&#39;alginate de influe sur les propriétés finales des microbilles, y compris la taille, les propriétés mécaniques et de transport. La composition utilisée doit être optimisée pour une application donnée. </td></tr><tr><td> Poly-L-ornithine chlorhydrate </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P2533 </td><td></td></tr></tbody></table>

génération d&#39;alginate de microsphères pour des applications biomédicales

Generation of Alginate Microspheres for Biomedical Applications

À base d&#39;alginate matériaux ont reçu une attention considérable pour des applications biomédicales en raison de leur caractère hydrophile, biocompatibilité, et de l&#39;architecture physique. Les applications comprennent l&#39;encapsulation de cellules, l&#39;administration de médicaments, de la culture de cellules souches, et les échafaudages en ingénierie tissulaire. En fait, les essais cliniques sont actuellement en cours d&#39;exécution dans laquelle les îlots sont encapsulés dans des microbilles d&#39;alginate recouvertes OLP en tant que traitement de diabète de type I. Cependant, un grand nombre d&#39;îlots sont nécessaires pour l&#39;efficacité en raison de la transplantation de survie suivant les pauvres. La capacité de stimuler la formation de réseau local microvasculaire autour des cellules encapsulées peut accroître leur viabilité grâce à l&#39;amélioration des transports de l&#39;oxygène, de glucose et d&#39;autres nutriments essentiels. Facteur de croissance des fibroblastes-1 (FGF-1) est un facteur de croissance naturelle qui est capable de stimuler la formation de vaisseaux sanguins et d&#39;améliorer les niveaux d&#39;oxygène dans les tissus ischémiques. L&#39;efficacité du FGF-1 est augmentée quand il est livré dans un sustla mode ained plutôt qu&#39;un seul grand-administration en bolus. Le local à long terme la libération de facteurs de croissance à partir de systèmes d&#39;encapsulation des îlots de Langerhans pourrait stimuler la croissance des vaisseaux sanguins directement vers les cellules transplantées, potentiellement améliorer les résultats fonctionnels greffés. Dans cet article, nous décrivons les procédures pour la préparation d&#39;alginate de microsphères pour une utilisation dans des applications biomédicales. En outre, nous décrivons une méthode que nous avons développé pour générer des microbilles d&#39;alginate multicouches. Les cellules peuvent être encapsulés dans le noyau alginate intérieure, et des protéines angiogéniques dans la couche d&#39;alginate extérieure. La libération de protéines à partir de cette couche externe stimuler la formation de réseaux locaux de microvasculaires directement vers les îlots transplantés.

Dans les sections suivantes, nous décrivons les procédures pour la préparation d&#39;alginate de microsphères pour une utilisation dans des applications biomédicales. Nous spécifiquement illustrent une technique pour créer alginate multicouche microsphères dans le double but de la cellule et l&#39;encapsulation de protéines en tant que traitement potentiel pour les diabétiques de type 1.

Génération d&#39;alginate de microsphères pour des applications biomédicales

Les matériaux à base d'alginate ont suscité une attention considérable pour des applications biomédicales en raison de leur nature hydrophile, de leur biocompatibilité et de...

Je m'appelle Goldie Ana, et je suis étudiante en licence travaillant dans le laboratoire du Dr. Eric Bras à l'Institut de technologie de l'Illinois. Dans cette présentation vidéo, je décrirai des techniques relatives à l'utilisation de microbilles d'alginate en ingénierie biomédicale, plus précisément dans le domaine de l'ingénierie cellulaire et tissulaire. Tous les travaux décrits ici ont été réalisés en collaboration avec le laboratoire du Dr. Emmanuel OPA à l'Institut de médecine régénérative de Wake Forest.Je présenterai des techniques de fabrication de microbilles de gélatine destinées à la fois à la délivrance de médicaments et à l'encapsulation cellulaire. Enfin, je vais démontrer une nouvelle procédure que nous avons mise au point dans notre laboratoire pour générer des microcapsules multicouches d'alginate pouvant être utilisées à double fonction : encapsulation cellulaire et protéique. L'alginate est composé de résidus d'acide bêta-D-mannuronique et d'acide alpha-L-guluronique en séquences variables.La solution d'alginate réticule pour former un gel en présence d'un cation multivalent, tel que le calcium deux plus, qui est le plus couramment utilisé. Les chercheurs ont étudié l'utilisation de microbilles d'alginate pour l'encapsulation de cellules et de protéines. Les propriétés des hydrogels d'alginate peuvent être modulées selon les conditions de synthèse, qui confèrent des caractéristiques intrinsèquement différentes et permettent, par exemple, d'ajuster la cinétique de libération.Les microbilles d'alginate ont été utilisées pour de nombreuses applications variées, notamment l'encapsulation de protéines, la délivrance de médicaments, l'encapsulation cellulaire, ainsi que comme ingrédient en science alimentaire, par exemple en gastronomie moléculaire. Nous commençons par préparer une solution d'alginate en couche interne. Ajoutez 25 millimolaire de hepes, 118 millimolaire de chlorure de sodium, 5,6 millimolaire de chlorure de potassium et 2,5 millimolaire de chlorure de magnésium à de l'eau déionisée, puis agitez soigneusement pour vous assurer que tous les réactifs sont bien dissous.Régler le pH à 7,4, ce qui correspond à des conditions physiologiques. Peser toute la poudre nécessaire pour obtenir la concentration souhaitée et la transférer dans la solution interallergène préparée. Placer la solution sur un vortexeur jusqu'à dissolution complète de la poudre, ce qui donne une solution visqueuse limpide.Préparez la solution de réticulation en ajoutant 10 millimolaire de tampon heis et 100 millimolaire de chlorure de calcium dans de l'eau déionisée. Agitez soigneusement la solution et ajustez son pH à 7,4. Ajoutez 10 millilitres de solution de réticulation dans un bécher.Transférez l'alginate dans une seringue équipée d'une aiguille de calibre souhaité. Placez l'aiguille perpendiculairement à la solution de réticulation et éjectez lentement des gouttelettes dans la solution de réticulation, ce qui permet la formation de billes sphériques afin de fabriquer un grand volume de microbilles de taille homogène. Une microencapsulation à deux canaux avec erreur peut être utilisée.Chargez la solution d'alginate dans la seringue, puis ouvrez la vanne de la gaine d'air, suivie de la vanne de la gaine d'alginate, afin de permettre l'éjection de gouttelettes dans un flacon contenant la solution de réticulation. Laissez les billes incuber dans la solution pendant 15 minutes. Les microbilles doivent être lavées trois fois avec une solution de 22 millimolaire.Le chlorure de calcium et les microcapsules d'alginate en solution saline normale ont été largement étudiés pour l'encapsulation de cellules. Par exemple, l'une des méthodes proposées pour traiter le diabète de type 1 consiste à transplanter des îlots pancréatiques de donneurs chez un patient afin d'éviter le rejet des cellules autologues. Toutefois, les patients doivent prendre des médicaments immunosuppresseurs qui affaiblissent leur système immunitaire.Encapsuler des îlots dans un contenant. Un matériau tel que l'acide alginique pourrait éliminer la nécessité d'utiliser des médicaments immunosuppresseurs. Un revêtement de polyol ornithine ou PLO est ajouté autour de l'îlot micro-encapsulé et agirait comme une membrane semi-perméable.Une fine monocouche d'alginate est ajoutée autour du revêtement de PLO, ce qui contribue à limiter la réponse inflammatoire. Le PLOI, de charge positive, interagit de manière paradoxale avec l'alginate, ce qui entraîne la formation d'un revêtement autour de la microbille servant de membrane perm-sélective. Une monocouche d'alginate est ensuite créée autour du revêtement de PLO afin de masquer sa charge positive et de limiter la réponse inflammatoire.Après la transplantation, préparez une solution à 0,1 % de poly-L-ornithine en dissolvant le PLO dans du sérum physiologique. Ajoutez la solution de PLO aux microbilles d'alginate et placez-les sur un vortex pendant 30 minutes afin de permettre aux microbilles d'alginate de bien interagir avec la solution de PLO. Retirez le liquide environnant et effectuez trois lavages de deux minutes chacun avec une solution de chlorure de calcium à 22 millimolaire dans du sérum physiologique.Ajouter une solution d'alginate aux microbilles revêtues de PLO et placer à la vortex pendant cinq minutes. Effectuer trois lavages de deux minutes chacun, en utilisant une solution saline normale à 0,9 % pour éliminer tout l'acide alginique non lié. Après avoir terminé les lavages, on peut conserver les billes en les plaçant dans une solution de chlorure de calcium.Une des limites des cellules est que de nombreuses cellules meurent en raison de l'absence d'un apport sanguin patent qui délivre de l'oxygène, du glucose et d'autres nutriments essentiels aux cellules après la transplantation. L'angiogenèse, la formation de vaisseaux sanguins à partir de vaisseaux préexistants, peut être stimulée par l'administration de protéines angiogéniques thérapeutiques telles que le facteur de croissance des fibroblastes un ou FGF un, ou le facteur de croissance endothélial vasculaire ou VEGF. Notre laboratoire a précédemment montré qu'une libération constante et faible de FGF un favorise une vascularisation stable par rapport à une dose élevée en bolus. Nous avons mis au point une procédure innovante permettant de créer des microbilles multicouches d'alginate, avec une couche externe d'alginate de taille importante au lieu d'une simple monocouche fine traditionnellement utilisée.Notre système de délivrance de médicaments remplit une double fonction : l'encapsulation de cellules et de protéines, où, par exemple, des cellules peuvent être encapsulées dans le noyau interne et des protéines angiogéniques telles que le FGF1 dans la région externe d'acide alginique. La libération de protéines thérapeutiques entraînerait la formation de nouveaux vaisseaux sanguins en direction des sites de greffe, augmentant ainsi la viabilité des cellules des îlots. Les microbilles multicouches servent à la fois à l'encapsulation de cellules et de protéines.Une vaste région externe d'allergènes, au lieu d'une monocouche classiquement utilisée, est formée autour du revêtement de PLO et peut servir de zone pour l'encapsulation de protéines. La libération de protéines thérapeutiques à partir de la région alginique externe aurait pour fonction de provoquer la formation de vaisseaux sanguins en direction du site de greffe. Cela permettrait, en théorie, un apport sanguin patent distribuant des nutriments essentiels aux cellules encapsulées, augmentant ainsi la viabilité cellulaire.La procédure de fabrication de microbilles multicrostales d'alginate est similaire à celle décrite précédemment. Des microbilles d'alginate contenant des cellules sont synthétisées, puis un revêtement de PLO est construit. Toutefois, lors de l'étape finale, la couche externe est formée par la réticulation de l'alginate dans une solution de chlorure de calcium, au lieu de solution saline.Pour créer des microbilles multilatérales en ginnet, commencez par transférer les microbilles revêtues de PLO contenues en solution vers un tamis cellulaire afin d'éliminer l'excès de liquide, puis transférez les billes sur une surface plane telle qu'un perfil ou une boîte de Pétri. Appliquez ensuite la solution d'allergène externe sur les microbilles et laissez incuber pendant 45 minutes. Retirez alors l'excès de solution d'allergène externe à l'aide d'une pipette, transférez les microbilles dans une solution de chlorure de calcium, ce qui permet de réticuler l'alginate et de former la couche externe. Effectuez trois lavages de deux minutes chacun.À l'aide d'un panneau de solution saline contenant deux millimolaires de chlorure de calcium. A montre la surface d'une microbille ginnet, en contraste avec le panneau B, où l'on peut observer une couche externe d'allergène importante. Le panneau C montre une image d'une microbille multilayered d'algenate avec une protéine marquée au fluorochrome encapsulée dans la couche externe.La taille de la couche externe d'alginate peut être modulée en fonction de la composition et de la concentration d'alginate utilisée, ce qui influence le profil de libération du FGF-1 à partir des microbilles multicouches. La taille des microbilles peut être ajustée selon les conditions utilisées pour synthétiser la couche externe. Toutes les conditions entraînent une libération initiale importante dans les quatre premières heures, suivie d'une libération prolongée du FGF-1 jusqu'à 30 jours.La libération à long terme du FGF un exhibé possède un potentiel pour stimuler une vascularisation persistante qui servirait à augmenter la viabilité des cellules encapsulées. Cela nous amène à la fin de notre présentation. Nous espérons que vous l'avez trouvée informative.

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Encapsulation de cellules de mammifères dans des perles d&#39;alginate à l&#39;aide d&#39;un récipient agité simple

Ce protocole illustre une méthode d'encapsulation cellulaire par la gélation physique rapide de l'alginate pour immobiliser des cellules. Les microbilles obtenues permettent une sécrétion contrôlée et soutenue de l'amyloïde au fil du temps et peuvent être utilisées pour étudier les effets de l'amyloïde sécrété dans les modèles in vitro et in vivo.

Fabrication de microbilles d'amyloïde-Sécrétion d'alginate pour l'utilisation dans la modélisation de la maladie d'Alzheimer

Présenté ici est une méthode pour la bioimpression 3D de la gélatine methacryloyl.

Protocoles de bioimpression 3D de Gelatin Methacryloyl Hydrogel Bioinks

Présenté ici est une technique d’impression 3D douce entraînée par l’alternance de forces visqueuses-inertielles pour permettre la construction de microporteurs d’hydrogel. Les buses faites maison offrent une flexibilité, permettant un remplacement facile pour différents matériaux et diamètres. Des microtransporteurs de liaison cellulaire d’un diamètre de 50 à 500 μm peuvent être obtenus et collectés pour une culture ultérieure.

Impression 3D de microporteurs d’hydrogel in vitro par jet de force visqueuse-inertielle alternée

Le présent protocole décrit la fabrication de microsphères poreuses hautement ouvertes (HOPM) à base de poly(acide lactique-co-glycolique) au moyen de la technologie microfluidique facile basée sur la formulation à émulsion unique. Ces microsphères ont des applications potentielles dans l’ingénierie tissulaire et le criblage de médicaments.

Fabrication de microsphères poreuses hautement ouvertes (HOPM) via la technologie microfluidique

Le protocole décrit la préparation de microsphères d’alginate de sodium réticulées avec différents ions métalliques à l’aide d’un dispositif microfluidique pour la conception de supports de médicaments. Les propriétés antimicrobiennes et la libération lente de ces microsphères ont également été étudiées.

Préparation de microsphères d’alginate de sodium réticulées avec différents ions métalliques à l’aide de la technologie d’électronébulisation microfluidique

Découvrez la fabrication de microsphères d'alginate multicouches pour l'encapsulation cellulaire et protéique. Cette méthode innovante améliore les systèmes de libération de médicaments pour le traitement du diabète de type 1.

Génération d'alginate de microsphères pour des applications biomédicales

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