Modèle murin d'endométriose chirurgicalement induite par Auto-transplantation de tissu utérin

L'objectif général de cette procédure est d'induire chirurgicalement l'endométriose chez la souris par transfert autologue de tissu utérin vers la cascade artérielle du mésentère intestinal. Cela est réalisé en ligaturant, retirant et exposant d'abord l'endomètre de l'utérus. La deuxième étape de la procédure consiste à créer trois implants endométrioides à partir de l'endomètre exposé à l'aide d'un punch biopsique de deux millimètres.

La troisième étape de la procédure consiste à suturer les trois implants endométrioïdes aux artères de la cascade artérielle du mésentère intestinal. La dernière étape de la procédure consiste à fermer la paroi abdominale et la peau, puis à permettre à l'animal de récupérer les lésions endométrioïdes. Excisés chez la souris, ils ressemblent à ceux des femmes atteintes d'endométriose, comme le montre l'analyse histologique ainsi que les profils d'expression génique et protéique.

En général, les personnes novices dans cette méthode éprouveront des difficultés pour trois raisons principales. Premièrement, les tissus murins sont tout simplement très petits. Deuxièmement, le mésentère intestinal est facilement endommagé, et troisièmement, les points de suture, s'ils sont trop serrés, entraîneront une nécrose intestinale.

Commencez par rassembler tout l'équipement chirurgical nécessaire pour une chirurgie aseptique réussie, y compris les solutions destinées à l'analgésie et à l'anesthésie. Après avoir anesthésié l'animal à l'aide d'isoflurane inhalé, confirmez l'anesthésie complète par l'absence de réponse à une stimulation par pincement de l'orteil ; pour prévenir la sécheresse oculaire pendant l'intervention, appliquez un onguent ophtalmique sur les yeux, puis rasez la zone chirurgicale à l’aide d’un petit rasoir. Désinfectez le site chirurgical à l’aide de trois passages alternés de solution de chlorhexidine et d’éthanol à 70 %, puis recouvrez l’animal d’un champ stérile.

Réalisez une petite incision médiane à l’aide de petites ciseaux ou d’un scalpel, en terminant à 0,5 à 1,0 centimètre en avant de l’orifice vaginal. Détachez délicatement par dissection émoussée la paroi corporelle de la paroi abdominale afin de faciliter la fermeture du site chirurgical. Après la dissection émoussée, pratiquez une petite incision médiane dans la paroi abdominale.

Ensuite, à l’aide de petites pinces, localisez délicatement le cornet utérin gauche. L’utérus est situé en position dorsale par rapport à l’intestin, qui est généralement visible dès l’ouverture du site d’incision. Tirez doucement vers le haut sur le cornet utérin et glissez une pince ouverte sous celui-ci afin de l’utiliser comme rétracteur. Il est également utile d’observer à ce moment l’apparence des ovaires et de l’utérus.

Pour faciliter le repérage du cycle œstral. Faire glisser deux morceaux de suture en soie noire tressée de calibre 5, mesurant six à huit centimètres, sous la corne utérine étirée. Liger fermement la corne au niveau de la jonction utéro-tubaire.

Placez simplement un point de suture au niveau de la trompe de Fallope et à la jonction utéro-cervicale. À chaque emplacement, utilisez un nœud carré et laissez les extrémités du fil non coupées. Retirez la section du cornet utérin située entre les deux ligatures, puis placez le tissu dans une boîte de Pétri en verre contenant environ 100 microlitres de PBS additionné de pénicilline et de streptomycine.

Coupez les extrémités du fil de soie en dernier. Si le fil se desserre ou s’il y a un saignement, localisez le moignon et faites un autre nœud ou non à l’aide de petites ciseaux. Retirez la graisse de la corne utérine.

Ouvrir la corne utérine en insérant une lame d'une petite paire de ciseaux dans la lumière. Faire glisser doucement les ciseaux le long de la corne utérine tout en maintenant celle-ci avec une pince. Dans la boîte de Pétri en verre, utiliser un punch à biopsie de deux millimètres pour découper trois implants de taille égale, en veillant à ce qu'ils ne s'assèchent pas.

Placer un pansement stérile immédiatement au-dessus du site d'incision et l'imbiber complètement de PBS stérile contenant de la pénicilline et de la streptomycine. Il est important de maintenir l'hydratation tout au long des étapes suivantes à l’aide de petites pinces lisses. Localiser doucement le caecum et déplacer délicatement le long de l'intestin grêle.

Extraire une petite section de quatre à cinq centimètres d'intestin et l'arranger en forme d'éventail sur un tampon imbibé afin que la cascade artérielle du mésentère intestinal soit clairement visible. Veiller à maintenir l'intestin humide en tout temps avec du sérum physiologique stérile. Placer un implant sur une aiguille, puis utiliser une suture noire aut six alon pour fixer délicatement l'implant à une artère située à environ 0,5 centimètre de l'intestin.

Utilisez-en seulement un. Jetez-le par-dessus la pince et ne serrez pas trop fort le point de suture. En effet, cela pourrait entraîner une perte du flux sanguin et une nécrose ultérieure de l’intestin.

Effectuez deux nœuds avec un seul, jetez chacun et taillez le fil de suture à deux millimètres de l’implant, puis hydratez l’intestin. Ensuite, en vous déplaçant dans le sens rostral. Extrayez les trois à quatre centimètres suivants de l’intestin et remplacez délicatement la section qui contient déjà un implant.

Passer une ou deux artères à partir du site d'implantation précédent et suturer l'implant suivant ; répéter l'opération pour le troisième implant. Enfin, suturer la paroi abdominale et fermer la peau à l'aide de clips chirurgicaux. Après la fermeture du site opératoire et l'administration d'analgésiques, placer l'animal en position ventrale dans la cage, partiellement posé sur un tapis chauffant à eau recirculante, jusqu'à ce que l'animal soit complètement récupéré.

Pour récupérer les lésions endométrioïdes, repérez les fils noirs dans le mésentère intestinal. Mesurez la longueur et la largeur de chaque lésion endométrioïde à l’aide d’un pied à coulisse. Disséquez les lésions endométrioïdes en prenant soin de ne pas les percer.

Retirer tout tissu non endométriote de la lésion. Agiter doucement les trois lésions endométriotes remplies de liquide avant de retirer le point de suture. Retirer délicatement le point de suture et inciser deux des lésions endométriotes.

Les peser à nouveau avant de passer au traitement des tissus. Ensuite, exciser et peser la corne utérine restante. L'analyse histologique de l'endométriose chez les femmes ainsi que dans le modèle murin présenté ici indique que la lésion endométrioïde contient des glandes et un stroma endométrial. Les lésions endométriosiques chez la souris contiennent également des macrophages chargés d'hémosidérine, qui constituent un signe courant de l'endométriose chez la femme. Les lésions endométrioïdes prélevées chez les souris trois jours après l'induction apparaissent inflammatoires et hémorragiques, comme montré à gauche, après deux à quatre semaines de croissance.

Les lésions endométriosiques chez la souris sont de type kystique, remplies de liquide et entourées d'adhérences péritonéales, comparées au poids des lésions au moment de l'induction. Les lésions remplies de liquide étaient respectivement 306 % et 862 % plus grandes, et les lésions kystiques étaient respectivement 51 % et 172 % plus grandes à un et deux mois après l'induction. Lésion endométrioïde kystique et remplie de liquide.

Les poids restent constants un mois après l'induction, sur cinq expériences différentes suivant cette procédure. Ce modèle peut être utilisé pour répondre à des questions concernant la physiopathologie de l'endométriose et pour explorer de nouveaux traitements thérapeutiques destinés à soulager la douleur et l'infertilité associées à cette maladie.