Murine chirurgie superficielle des ganglions lymphatiques

L’objectif global de cette procédure est d’enlever chirurgicalement les ganglions lymphatiques d’une souris anesthésiée. Ceci est accompli en localisant d’abord les ganglions lymphatiques. Les ganglions lymphatiques sont prélevés, puis l’incision est fermée.

Enfin, une suspension unicellulaire peut être obtenue pour une analyse expérimentale. En fin de compte, les populations de lymphocytes viables peuvent être évaluées par cytométrie en flux. La démonstration visuelle de cette technique est essentielle car la localisation et l’ablation des ganglions lymphatiques doivent être observées afin d’être maîtrisées.

Après avoir anesthésié la souris, appliquez une pommade pour les yeux, injectez de la buprénorphine et confirmez la sédation par pincement des orteils, puis retournez la souris sur le côté. Tout d’abord, localisez le ganglion lymphatique brachial, puis rasez la région à disséquer. Après avoir brossé les poils lâches, appliquez un désinfectant sur la région, puis faites une petite incision d’environ cinq millimètres à l’arrière des quatre pattes.

Utilisez deux paires de pinces pour étirer l’incision jusqu’à ce que le ganglion lymphatique brachial, qui peut apparaître grisâtre ou plus foncé que la graisse environnante, soit visible. Pincez ensuite le fascia recouvrant le ganglion lymphatique avec une paire de pinces. Placez la deuxième paire de pinces aussi loin que possible sous le ganglion lymphatique et tirez légèrement sur la membrane sans briser les tissus environnants.

Ensuite, utilisez la première paire de pinces pour briser le fascia et retirer le ganglion lymphatique. Si le ganglion lymphatique a été prélevé avec succès, une tache de sang apparaîtra à l’endroit où le ganglion lymphatique se trouvait auparavant. Placez le ganglion lymphatique excisé dans une solution isotonique s’il coule, cela confirmera que le tissu récolté est un ganglion lymphatique et non de la graisse.

Ensuite, vérifiez qu’il n’y a pas de poils dans la plaie et fermez l’incision en collant les deux intérieurs de la peau ensemble et en les agrafant avec une à deux pinces, selon la taille de l’incision. Maintenant, localisez un ganglion lymphatique inguinal et rasez la région à disséquer. Après avoir brossé les poils lâches, appliquez un désinfectant sur la région, puis faites une petite incision d’environ cinq millimètres au-dessus de la patte arrière près de l’abdomen.

Après avoir ouvert l’incision avec deux paires de pinces comme nous venons de le montrer pour le ganglion lymphatique brachial, identifiez le ganglion lymphatique inguinal niché dans le tissu adipeux environnant. Ensuite, retirez le ganglion lymphatique avec les deux paires de pinces comme nous venons de le démontrer. Encore une fois, confirmez le prélèvement réussi du ganglion lymphatique en notant la tache de sang qui apparaît à l’endroit où le ganglion lymphatique se trouvait auparavant, puis déposez le ganglion lymphatique inguinal dans un récipient séparé de solution isotonique.

Une fois que tous les ganglions lymphatiques ont été récoltés, placez la souris dans une cage et ajoutez de la nourriture humide pour qu’elle puisse se nourrir facilement. Après l’intervention chirurgicale environ six à huit heures plus tard, vérifiez que la souris ne ressent pas de douleur. Observez attentivement que la posture, la démarche, l’interaction avec le congen et l’apparence de la fourrure sont similaires à celles d’une souris normale et en bonne santé.

Enfin, dissociez le ganglion lymphatique en le pressant contre des lames givrées dans une boîte de Pétri puis transférez-le dans un tube pour obtenir une suspension unicellulaire. Après avoir coloré les cellules pour les antigènes de surface cellulaire d’intérêt, analysez les cellules par cytométrie en flux. Ici, des diagrammes de dispersion sont présentés pour les ganglions lymphatiques prélevés sur des animaux anesthésiés ou sacrifiés.

Les profils et les pourcentages de cellules dans les portes des lymphocytes vivants des deux nuages de points sont les mêmes. Démontrer que la chirurgie des ganglions lymphatiques est une technique appropriée pour prélever des cellules Une fois maîtrisée, la chirurgie des ganglions lymphatiques peut être effectuée en cinq à 10 minutes par souris si elle est effectuée correctement.