Name: Préparation des tissus et des fibres Immunocoloration souris nerveuses sensitives innervant la peau et les os du membre (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-26T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 25 s
Description: Découvrez l'immunocoloration des fibres nerveuses sensitives périphériques innervant la peau et l'os chez la souris. Cette méthode permet de visualiser l'expression protéique et les patterns d'innervation par microscopie à fluorescence.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Nous remercions le Dr M. Yuriy Usachev pour son aide dans la normalisation initiale de la microscopie confocale / imagerie de la souris immunomarquage plantaires biopsie, et le Dr Donna L. Hammond pour son aide continue et la critique constructive à ce travail. Ce travail a été financé par des subventions du NINDS / NIH (NS069898), et une attribution de subvention Idée de développement du ministère de la Défense de la prostate Cancer Research Programme (DoD-PCRP-101096) pour DPM

<ol><li>Hoffman, E. M., Schechter, R., Miller, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fixative+Composition+Alters+Distributions+of+Immunoreactivity+for+Glutaminase+and+Two+Markers+of+Nociceptive+Neurons%2C+Nav+1.8+and+TRPV1%2C+in+the+Rat+Dorsal+Root+Ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+%26+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Fixative Composition Alters Distributions of Immunoreactivity for Glutaminase and Two Markers of Nociceptive Neurons, Nav 1.8 and TRPV1, in the Rat Dorsal Root Ganglion.</a> Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 58, 329-344 (2010).</li>
<li>Neves, J. D. S., Omar, N. F., Narvaes, E. A. O., Gomes, J. R., Novaes, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+different+decalcifying+agents+on+EGF+and+EGFR+immunostaining%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Histochemica%22%5BJournal%5D)">Influence of different decalcifying agents on EGF and EGFR immunostaining.</a> Acta Histochemica. 113, 484-488 (2011).</li>
<li>Watson, R. E., Wiegand, S. J., Clough, R. W., Hoffman, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+cryoprotectant+to+maintain+long-term+peptide+immunoreactivity+and+tissue+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Use of cryoprotectant to maintain long-term peptide immunoreactivity and tissue morphology.</a> Peptides. 7, 155-159 (1986).</li>
<li>Yen, L. D., Bennett, G. J., Ribeiro-da-Silva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sympathetic+sprouting+and+changes+in+nociceptive+sensory+innervation+in+the+glabrous+skin+of+the+rat+hind+paw+following+partial+peripheral+nerve+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Sympathetic sprouting and changes in nociceptive sensory innervation in the glabrous skin of the rat hind paw following partial peripheral nerve injury.</a> The Journal of Comparative Neurology. 495, 679-690 (2006).</li>
<li>Boyette-Davis, J., Xin, W., Zhang, H., Dougherty, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraepidermal+nerve+fiber+loss+corresponds+to+the+development+of+Taxol-induced+hyperalgesia+and+can+be+prevented+by+treatment+with+minocycline%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Intraepidermal nerve fiber loss corresponds to the development of Taxol-induced hyperalgesia and can be prevented by treatment with minocycline.</a> Pain. 152, 308-313 (2011).</li>
<li>Bloom, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+Cancer-Induced+Bone+Remodeling%2C+Skeletal+Pain%2C+and+Sprouting+of+Sensory+Nerve+Fibers%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pain%22%5BJournal%5D)">Breast Cancer-Induced Bone Remodeling, Skeletal Pain, and Sprouting of Sensory Nerve Fibers.</a> The Journal of Pain. 12, 698-711 (2011).</li>
<li>Constantin, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endogenous+Tumor+Necrosis+Factor+%CE%B1+%28TNF%CE%B1%29+Requires+TNF+Receptor+Type+2+to+Generate+Heat+Hyperalgesia+in+a+Mouse+Cancer+Model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Endogenous Tumor Necrosis Factor α (TNFα) Requires TNF Receptor Type 2 to Generate Heat Hyperalgesia in a Mouse Cancer Model.</a> J. Neurosci. 28, 5072-5081 (2008).</li>
<li>Jankowski, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitization+of+Cutaneous+Nociceptors+after+Nerve+Transection+and+Regeneration%3A+Possible+Role+of+Target-Derived+Neurotrophic+Factor+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Sensitization of Cutaneous Nociceptors after Nerve Transection and Regeneration: Possible Role of Target-Derived Neurotrophic Factor Signaling.</a> The Journal of Neuroscience. 29, 1636-1647 (2009).</li>
<li>Jimenez-Andrade, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathological+Sprouting+of+Adult+Nociceptors+in+Chronic+Prostate+Cancer-Induced+Bone+Pain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Pathological Sprouting of Adult Nociceptors in Chronic Prostate Cancer-Induced Bone Pain.</a> J. Neurosci. 30, 14649-14656 (2010).</li>
<li>Persson, A. -K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sodium-calcium+exchanger+and+multiple+sodium+channel+isoforms+in+intra-epidermal+nerve+terminals%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Pain%22%5BJournal%5D)">Sodium-calcium exchanger and multiple sodium channel isoforms in intra-epidermal nerve terminals.</a> Molecular Pain. 6, 84-84 (2010).</li>
<li>Ohshima, M., Miyake, M., Takeda, M., Kamijima, M., Sakamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staphylococcal+Enterotoxin+B+Causes+Proliferation+of+Sensory+C-Fibers+and+Subsequent+Enhancement+of+Neurogenic+Inflammation+in+Rat+Skin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Staphylococcal Enterotoxin B Causes Proliferation of Sensory C-Fibers and Subsequent Enhancement of Neurogenic Inflammation in Rat Skin.</a> Journal of Infectious Diseases. 203, 862-869 (2011).</li>
<li>Johnson, M. S., Ryals, J. M., Wright, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+loss+of+peptidergic+intraepidermal+nerve+fibers+in+an+STZ-induced+mouse+model+of+insensate+diabetic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Early loss of peptidergic intraepidermal nerve fibers in an STZ-induced mouse model of insensate diabetic neuropathy.</a> Pain. 140, 35-47 (2008).</li>
</ol>

Pas de conflits d&#39;intérêts déclarés.

Ici, nous avons détaillé les méthodes de préparation de la peau des souris et des coupes de tissus osseux pour immunomarquage et la détection des périphériques fibres nerveuses sensitives. Les sections produite à partir de biopsies plantaires contiennent à la fois la peau glabre et poilue, ce qui signifie que le protocole peut être utilisé sur tout type de peau. Ces techniques peuvent également être employées pour colorer les autres types de cellules dans ces tissus (leucocytes, vasculaire endothélium, muscle lisse, ent...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du produit </td><td> Tapez </td><td> Société </td><td> No de catalogue </td><td> Commentaire </td></tr><tr><td> 3mm Harris Micro-Punch </td><td> Matériel </td><td> Ted Pella </td><td> 15094 </td><td></td></tr><tr><td> Pompe à perfusion </td><td> Matériel </td><td> VWR International </td><td> 23609-170 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldéhyde </td><td> Réactif </td><td> Fisher Scientific </td><td> T353 </td><td></td></tr><tr><td> L&#39;acide picrique </td><td> Réactif </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 239801 </td><td></td></tr><tr><td> Composé Embedding octobre </td><td> Réactif </td><td> Tissue-Tek </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> Cyto-Freeze aérosol cryogénique </td><td>Matériel </td><td> Société de contrôle </td><td> 3118 </td><td></td></tr><tr><td> Sérum de chèvre </td><td> Réactif </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G9023 </td><td></td></tr><tr><td> Bac Incubation et couvercle pour Immunocoloration (Large) </td><td> Matériel </td><td> RPI Corp </td><td> 248270 (bac) 248 270-A (couvercle) </td><td></td></tr><tr><td> Stylo ImmEdge barrière hydrophobe </td><td> Matériel </td><td> Vector Laboratories </td><td> H-4000 </td><td></td></tr><tr><td> Brosses à cheveux de Camel (# 1 épaisseur) </td><td> Matériel </td><td> Ted Pella </td><td> 11859 </td><td></td></tr><tr><td> Pro-Long Or Milieu de montage </td><td> Réactif </td><td> Invitrogen </td><td> P36930 </td><td></td></tr></tbody></table>

préparation des tissus et des fibres immunocoloration souris nerveuses sensitives innervant la peau et les os du membre

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Sensory Nerve Fibers Innervating Skin and Limb Bones

Détection et traitement primaire des propriétés physiques, chimiques et thermiques par des stimuli sensoriels périphériques fibres nerveuses sensorielles est la clé de la perception sensorielle chez les animaux et les humains. Ces fibres nerveuses sensitives périphériques expriment une multitude de récepteurs et de protéines des canaux ioniques qui détectent et initier des stimuli sensoriels spécifiques. Les méthodes sont disponibles pour caractériser les propriétés électriques des fibres nerveuses sensorielles périphériques innervant la peau, qui peut également être utilisé pour identifier l&#39;expression fonctionnelle des protéines des canaux ioniques spécifiques dans ces fibres. Toutefois, les méthodes électrophysiologiques similaires ne sont pas disponibles (et sont également difficiles à développer) pour la détection de l&#39;expression fonctionnelle des récepteurs et des protéines des canaux ioniques dans les fibres nerveuses sensorielles périphériques innervant les autres viscères, y compris les tissus les plus difficiles tels que les os. Par ailleurs, ces méthodes électrophysiologiques ne peut pas être utilisé pour déterminer l&#39;expression de la protéine non excitabless dans les zones périphériques des fibres nerveuses sensitives. Par conséquent, immunomarquage d&#39;échantillons de tissus périphériques / viscérale pour fivers nerveuses sensorielles fournit la meilleure façon possible afin de déterminer l&#39;expression de protéines spécifiques de l&#39;intérêt pour ces fibres nerveuses. Jusqu&#39;ici, la plupart des études d&#39;expression de protéines dans les neurones sensoriels ont utilisé immunomarquage procédures dans les ganglions sensitifs, où l&#39;information est limitée à l&#39;expression de protéines spécifiques dans le corps cellulaire de certains types ou sous-ensembles de neurones sensoriels. Nous rapportons ici les méthodes détaillées / protocoles pour la préparation d&#39;échantillons de tissus périphériques / viscérale pour l&#39;immunocoloration des périphériques fibres nerveuses sensitives. Nous détail les méthodes spécifiquement pour la préparation de la peau ou plantaire biopsie et d&#39;os (fémur) les articles de la souris pour l&#39;immunocoloration des périphériques fibres nerveuses sensitives. Ces méthodes ne sont pas seulement essentiels pour la détermination qualitative de l&#39;expression des protéines dans les neurones sensoriels périphériques, mais aussi fournir une méthode de dosage quantitatif pourdéterminer les changements dans les niveaux d&#39;expression de protéines dans des types spécifiques ou des sous-ensembles de fibres sensorielles, ainsi que pour déterminer les modifications morphologiques et / ou anatomiques dans le nombre et la densité des fibres sensorielles au cours de divers états pathologiques. De plus, ces méthodes ne sont pas confinés à la coloration des fibres nerveuses sensorielles que, mais peut aussi être utilisé pour la coloration des types de fibres nerveuses dans la peau, les os et autres tissus viscéraux.

L&#39;identification immunocytochimique de sensitive périphérique sous-types de fibres nerveuses (et de détection de l&#39;expression des protéines qui y sont) sont essentiels à la compréhension des mécanismes moléculaires sous-jacents sensations périphériques. Nous décrivons ici les méthodes de préparation d&#39;échantillons de tissus périphériques / viscérale, tels que les os de la peau et des membres, par immunomarquage spécifique des fibres nerveuses périphériques sensorielles.

Préparation des tissus et des fibres Immunocoloration souris nerveuses sensitives innervant la peau et les os du membre

La détection et le traitement primaire des stimuli sensoriels physiques, chimiques et thermiques par les fibres nerveuses sensorielles périphériques sont essentiels à la perception sensorielle dans ...

L'objectif général de cette procédure est d'obtenir des informations sur l'organisation anatomique ainsi que sur les profils d'expression et de localisation de protéines spécifiques dans les fibres nerveuses périphériques qui innervent des tissus tels que la peau et l'os. Cela est réalisé en effectuant d'abord une perfusion complète de l'animal avec un fixateur, suivie de la dissection ou de l'ablation du tissu d'intérêt. Ensuite, les tissus isolés sont post-fixés et les os sont décalcifiés ; à l'aide d'un cryostat, des coupes fines de tissus cutanés et osseux sont réalisées et montées sur des lames.La dernière étape de la procédure consiste à réaliser une immunomarquage simple ou multiple de ces coupes tissulaires à l'aide d'anticorps dirigés contre des protéines spécifiquement exprimées et localisées sur les fibres nerveuses périphériques. En fin de compte, on peut obtenir des résultats montrant le profil de distribution de types spécifiques de fibres nerveuses périphériques, ainsi que le profil d'expression et/ou de localisation de protéines spécifiques dans les fibres nerveuses périphériques, grâce à la microscopie en immunofluorescence, en utilisant un microscope à fluorescenc

tissue-preparation-immunostaining-mouse-sensory-nerve-fibers

Research

Recherche

JoVE Journal

Neuroscience

Neurosciences

Cette vidéo démontre la coloration immunohistochimique des fibres cholinergiques dans le noyau basal de la région de Meynert de coupes de cerveau de souris. Les sections sont bloquées et traitées avec de l’acétyltransférase primaire contre la choline, suivie d’anticorps secondaires biotinylés. Des complexes avidine-biotine-peroxydase sont ajoutés, qui se lient aux anticorps secondaires, puis au substrat chromogène. Les coupes sont ensuite déshydratées et montées avant d’être visualisées au...

Coloration immunohistochimique des fibres nerveuses dans le noyau basal de Meyner du cerveau de souris

Source : Boyer, N. P. et al., imagerie et analyse du transport des neurofilaments dans le nerf tibial de souris excisé. J. Vis. Exp. (2020) &lt;p style='line-height :1.380000000000001 ;margin-bottom :0pt ;margin-top :0pt ;text-align :justify ;' dir='ltr'&gt;Cette vidéo démontre la méthode de photoactivation par fluorescence pour analyser le transport des neurofilaments dans les axones myélinisés des nerfs périphériques. En suivant les neurofilaments verts photoactivés marqués au fluorophore, la...

Imagerie par photoactivation par fluorescence du transport des neurofilaments dans les axones de souris myélinisés 

Le protocole pour l'imagerie dynamique longitudinale et lésion laser sélectif de terminaisons nerveuses chez des souris transgéniques reporter est présente.

In Vivo microscopie à deux photons de terminaisons nerveuses dans la peau simples

Muscle neurones sensoriels sont impliqués dans la signalisation propriocepteur et signalent également sur les événements métaboliques de l'Etat et des blessures liées. Nous décrivons une souris adulte in vitro préparation musculaire du nerf pour les études sur les afférences musculaires extensibles activé.

Un In Vitro Adult Souris Préparation pour étudier les propriétés de cuisson des afférences musculaires

Nous décrivons ici une nouvelle préparation pour l’imagerie des terminaisons sensorielles lancéolées en direct des terminaisons palissadiques qui innervent les follicules pileux de la peau de l’oreille de souris pendant la coloration et la décoloration avec des colorants de styrylpyridinium.

Surveillance optique de Living Nerve Terminal Marquer follicule pileux lancéolées Endings du<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Souris oreille peau

Cet article comprend des protocoles détaillés pour le marquage génétique de la peau de souris, la dénervation chirurgicale, la biopsie cutanée et la visualisation des épithéliums marqués par coloration à la β-galactosidase entière. Ces méthodes peuvent être utilisées pour tester la nécessité de nerfs dans des modèles murins de peau normale et pathologique.

Cutaneous dénervation chirurgicale: une méthode pour tester l&#39;exigence de nerfs dans les modèles murins de la maladie de la peau

Cette étude établit un modèle expérimental de neuropathie pure petites fibres avec résinifératoxine (RTX). Une dose unique de RTX (50 µg/kg) est optimal pour l’élaboration d’un modèle de neuropathie des petites fibres qui imite les caractéristiques des patients et pourrait aider à enquêter sur la signification moléculaire nociceptif qui sous-tendent la douleur neuropathique.

Établir un modèle de souris d’une neuropathie Pure petites fibres avec l’agoniste Ultrapotent de Transient Receptor potentiels Vanilloid Type 1

Nous présentons ici un protocole afin de visualiser les structures fines des nerfs périphériques en obtenant et en coloration de 1 à 2 µm sections avec toluidine...

Toluidine bleu coloration des Sections enrobées dans la résine pour l’évaluation de la morphologie des nerfs périphériques

Nous décrivons des méthodes de photoactivation de fluorescence pour analyser le transport axonal des neurofilaments dans les axones myélinis simples des nerfs périphériques des souris transgéniques qui expriment une protéine de neurofilament photoactivatable.

Imagerie et analyse du transport neurofilament dans le nerf tibial de souris excisée

L’épaisseur des coupes tissulaires limitait l’étude morphologique de l’innervation de la peau. Le présent protocole décrit une technique unique de nettoyage des tissus pour visualiser les fibres nerveuses cutanées dans des coupes de tissus épaisses de 300 μm sous microscopie confocale.

Démonstration de l’innervation de la peau poilue et glabre dans un motif 3D à l’aide de multiples approches de coloration fluorescente et de nettoyage des tissus

Ce manuscrit présente un protocole pour l’ablation chirurgicale des neurones sympathiques lombaires postganglionnaires d’une souris. Cette procédure facilitera une multitude d’études visant à étudier le rôle de l’innervation sympathique dans les cibles du tissu distal.

Sympathectomie lombaire chirurgicale chez la souris

Découvrez l'immunocoloration des fibres nerveuses sensitives périphériques innervant la peau et l'os chez la souris. Cette méthode permet de visualiser l'expression protéique et les patterns d'innervation par microscopie à fluorescence.

Préparation des tissus et des fibres Immunocoloration souris nerveuses sensitives innervant la peau et les os du membre

Explorer plus de vidéos