Diagnostic de la tuberculose pulmonaire avec le Xpert MTB / RIF test

L'objectif général de cette procédure est de détecter simultanément en deux heures le mycobactérium, la tuberculose et la résistance à la rifampicine dans un crachat expectoré ou dans des sédiments de crachat concentrés. Commencez par un protocole simple et très efficace de décontamination de l'échantillon. Ensuite, transférez chaque échantillon traité dans une cartouche jetable à usage unique, Expert M-T-B-R-I-F, qui contient les réactifs de PCR et dans laquelle se déroule le processus de PCR.

Chargez les cartouches sur un système Gene Expert DX et démarrez la PCR imbriquée ultra-sensible HEMI pour la détection simultanée de *Mycobacterium tuberculosis* et de la résistance à la rifampicine. Enfin, lisez les résultats du test et les transmettez au médecin. Le test Expert MTPR est destiné à être utilisé avec des échantillons provenant de patients chez lesquels une tuberculose pulmonaire est suspectée sur le plan clinique et qui répondent aux critères décrits dans le texte de la société.

Remarquez qu'il ne doit pas être utilisé pour surveiller les effets d'un traitement médicamenteux. Crystal. Un technicien de mon laboratoire va maintenant démontrer le protocole conformément à la norme internationale deux des normes internationales pour la prise en charge de la tuberculose. Prélevez deux échantillons pour examen bactériologique chez chaque patient soupçonné d'avoir une tuberculose pulmonaire.

Attribuez un module du système Gene Expert DX à chaque échantillon de test, en étiquetant chaque cartouche par l'identifiant de l'échantillon. Ensuite, pour chaque test d'échantillon, transférez un millilitre de crachats dans un tube conique de 15 millilitres à bouchon vissable à l’aide d’une autre pipette de transfert stérile. Ajoutez deux millilitres du réactif d’échantillon M-T-B-R-I-F.

Remplacez le couvercle vigoureusement. Secouez le tube de 10 à 20 fois. Ensuite, placez le tube debout pendant cinq minutes à température ambiante après l'avoir secoué vigoureusement.

Encore une fois, équilibrer à température ambiante pendant 10 minutes. Vérifier que tous les échantillons sont ED sans agrégats visibles de crachats. Étiqueter d'abord les cartouches avec l'identifiant de prélèvement de chaque échantillon de sédiment de crachats ; pour chaque échantillon de sédiment, ajouter 1,5 millilitre de réactif échantillon M-T-B-R-I-F, puis transférer 0,5 millilitre dans un tube conique de 15 millilitres à bouchon vissable. Remettre le couvercle, faire tourbillonner pendant 30 secondes, puis placer le tube en position verticale pendant cinq minutes après une seconde.

Mélanger par vortex, laisser le tube en position verticale pendant 10 minutes. Examiner les échantillons liquéfiés pour s'assurer de l'absence de grumeaux de crachats. Apparier l'étiquette sur les tubes avec les cartouches correspondantes.

Ne pas ouvrir la cartouche avant d'être prêt à effectuer le test et utiliser la cartouche dans les 30 minutes suivant l'ouverture du couvercle. À l’aide de la pipette de transfert stérile, aspirer l’échantillon liquéfié jusqu’à ce que le ménisque soit au-dessus du repère minimum. Charger lentement l’échantillon dans la cartouche.

Fermer le couvercle de la cartouche. Commencer le test dans les 30 minutes suivant l'ajout de l'échantillon à la cartouche. Allumez d'abord l'ordinateur, puis l'appareil sur le bureau.

Double-cliquez sur l'icône Gene Expert DX. Connectez-vous au logiciel du système. Sélectionnez « Créer un test » pour ouvrir la boîte de dialogue de numérisation du code-barres de la cartouche.

Ensuite, saisissez l'identifiant de l'échantillon et numérisez le code-barres sur la cartouche. Lorsque la fenêtre de création du test apparaît, cliquez sur Démarrer le test et saisissez le mot de passe dans la boîte de dialogue. Ouvrez maintenant la porte du module de l'instrument et insérez la cartouche.

Fermez la porte pour démarrer le test. Lorsque le voyant vert s’éteint, le test est terminé. Une fois que le système a relâché le verrou de la porte, ouvrez la porte du module et retirez la cartouche.

Enfin, éliminer les cartouches utilisées dans les conteneurs de déchets appropriés. Chaque cartouche de test contient des réactifs pour la PCR quantitative du complexe Mycobacterium tuberculosis et de la résistance à la rifampicine, ainsi que les contrôles expérimentaux appropriés. Le contrôle de la sonde vérifie la réhydratation des réactifs, le remplissage du tube PCR, l'intégrité de la sonde dans la cartouche et la stabilité du colorant.

La courbe de traitement de l'échantillon sert de contrôle positif pour un traitement adéquat des bactéries cibles et indique également la présence d'inhibiteurs de la PCR. Les amorces sont conçues pour différencier la séquence sauvage conservée des mutations dans la région centrale du gène RPOB associées à la résistance au RIF. Les valeurs de CT sont inversement proportionnelles à la concentration du modèle d'ADN de M-T-B dans l'échantillon testé.

La boîte de dialogue des résultats du test conclut que l'ADN cible de MTB est détecté et que la résistance à la rifampicine n'est pas détectée dans cet échantillon de patient. L'ADN cible de MTB est détecté à des niveaux faibles avec une indication de résistance à la rifampicine. Les deux contrôles, SPC et PCC, satisfont aux critères d'acceptation assignés.

Le résultat de ce test est considéré comme invalide car le témoin de prélèvement et de conservation (SPC) est négatif et qu'aucun produit de PCR n'est détecté. Soit l'échantillon n'a pas été correctement traité, soit la PCR a été inhibée. Répétez le test.

Comme vous l'avez vu dans la vidéo de test, cette méthode est standardisée et ne nécessite qu'une infrastructure de laboratoire modeste ainsi qu'une formation modérée. Par conséquent, je pense que le test expert M-T-B-R-F a le potentiel d'offrir un accès universel à des tests diagnostiques standardisés, sensibles et très spécifiques, tant pour la tuberculose que pour la résistance à la rifampicine, dans tous les lieux de prise en charge.