Name: La Ex vivo Préparation isolé microvaisseaux squelettique pour les enquêtes de la réactivité vasculaire (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Apprenez l'isolation chirurgicale et la double canulation d'artérioles de résistance ex vivo pour étudier la réactivité vasculaire. Cette méthode permet d'évaluer les réponses aux stimuli pharmacologiques et les propriétés structurelles des vaisseaux.

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Ce travail a été soutenu par l&#39;American Heart Association (EIA 0740129N) et NIH T32 HL90610.

<ol><li>Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Chronic+Anticholesterol+Therapy+on+Development+of+Microvascular+Rarefaction+in+the+Metabolic+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome.</a> Microcirculation. , 1-18 (2009).</li>
<li>Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+vascular+thromboxane+generation+impairs+dilation+of+skeletal+muscle+arterioles+of+obese+Zucker+rats+with+reduced+oxygen+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).</li>
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<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+peroxide+emerges+as+a+regulator+of+tone+in+skeletal+muscle+arterioles+during+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth.</a> Microcirculation. 15, 151-161 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+myogenic+responsiveness+of+skeletal+muscle+arterioles+with+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).</li>
<li>Dacey, R. G., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+study+of+rat+intracerebral+arterioles%3A+methods%2C+morphology%2C+and+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).</li>
<li>Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+of+extraparenchymal+resistance+arteries+of+rat+skeletal+muscle+to+reduce+PO2%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2.</a> Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).</li>
<li>Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin-%281-7%29+and+low-dose+angiotensin+II+infusion+reverse+salt-induced+endothelial+dysfunction+via+different+mechanisms+in+rat+middle+cerebral+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).</li>
<li>LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+inhalation+impairs+endothelium-dependent+vasodilation+in+subepicardial+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Toxicol.+Environ.+Health+A%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles.</a> J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).</li>
<li>Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+salt+enhances+benzamil-sensitive+component+of+myogenic+constriction+in+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).</li>
<li>Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+mechanisms+of+endothelium-dependent+dilation+in+skeletal+muscle+arterioles+with+genetic+hypercholesterolemia%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).</li>
<li>Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+arachidonic+acid-induced+thromboxane+generation+impairs+skeletal+muscle+arteriolar+dilation+with+genetic+dyslipidemia%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia.</a> Microcirculation. 15, 621-631 (2008).</li>
<li>Baumbach, G. L., Hadju, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+and+composition+of+cerebral+arterioles+in+renal+and+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension. 21, 816-826 (1993).</li>
<li>Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+studying+isolated+resistance+vessel+from+rabbit+mesentery+and+brain+and+their+responses+to+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs.</a> Circ. Res. 4, 525-536 (1967).</li>
<li>Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. solated Chapter 23. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDavis%2C+MJ+%22Isolated%2C+perfused+microvessels.+In%3A+Clinically+Applied+Microcirculation+Research%22">Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research</a>. Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. 32, CRC Press, Inc. 435-456 (1995).</li>
<li>Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+and+mechanical+responses+of+rat+middle+cerebral+arterieal+to+reduced+PO2+and+prostacyclin%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin.</a> Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).</li>
</ol>

Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

Le protocole présenté décrit la canulation isolement, le retrait et double d&#39;un microvaisseaux du muscle squelettique, bien que cette technique générale peut être facilement appliquée à la plupart des tissus. Pour le manuscrit en cours, le terme «artériole&quot; a été utilisé par les auteurs pour décrire un navire de résistance comprise entre 70-120 m de diamètre sous tonalité actif de repos, ce qui est également un contributeur majeur à la régulation de la résistance de perfusion à un organe ou tissus. <p class...

<table border="1"><tbody><tr><td> Réactifs et appareillage </td><td> Entreprise </td><td> Commentaires / Catalogue # </td></tr><tr><td> Chambre des navires </td><td> Coutume </td><td> Dave Eick (MCW) </td></tr><tr><td> Bain d&#39;eau chauffée de circulation </td><td> PolyScience et Haake </td><td> Haake DC 10 </td></tr><tr><td> Pipettes </td><td> Frédéric Haer &amp; Co. </td><td> Capillaire Tube 2,0 mm x 1,0 mm OD ID (27-33-1) </td></tr><tr><td> Le moniteur de pression </td><td> Instruments de précision du monde </td><td></td></tr><tr><td> Réservoir d&#39;eau chemisé </td><td> Coutume </td><td></td></tr><tr><td> Source de lumière externe </td><td> Instruments de précision du monde </td><td> Novaflex </td></tr><tr><td> Extracteur Pipet </td><td> Microdonnées à grande diffusion Instruments </td><td> PMP102 micropipette Puller </td></tr><tr><td> Achèvement completment d&#39;outils chirurgicaux </td><td> Outils belle science </td><td> Dumont </td></tr><tr><td> Ultra fines pinces </td><td> Outils belle science </td><td> Inox n ° 5 </td></tr><tr><td> Fil de suture en soie </td><td> Ethilon </td><td> # 10-0 ou 9-0 </td></tr><tr><td> Microscope stéréo </td><td> Olympe </td><td> Olympus SZ-11 </td></tr><tr><td> Étriers vidéo analogiques </td><td> Boeckeler </td><td> Via contrôleur (Via-100) </td></tr><tr><td> Caméra haute résolution analogique </td><td> Panasonic </td><td> GP-602 MF </td></tr><tr><td> Ballon d&#39;oxygène </td><td> Régional </td><td> Bilan de l&#39;azote de 21% et 5% de CO 2 d&#39;azote équilibre </td></tr><tr><td> Tubes </td><td> Tygon </td><td></td></tr><tr><td> Vider la pompe </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td></td></tr><tr><td> PSS Rat modifiés </td><td> Voir la recette ci-dessous </td><td></td&gt; </tr><tr><td> PSS relaxants van Breemen de </td><td> Voir la recette ci-dessous </td><td></td></tr></tbody></table> Tableau 1. Une liste des principaux composants de l&#39;installation des microvaisseaux station isolée présentés dans les figures. <table border="1"><tbody><tr><td> Mise à jour PSS Recette Rat </td><td> Pour faire deux litres de PSS </td><td> 20X Stock Sel (2L) </td><td> 20X stock régulateur (2L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 278,0 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 14,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4 .7 H 2 O- </td><td></td><td> 11,5 g </td><td></td></tr><tr><td> CaCl 2-H 2 O </td><td></td><td> 9,4 g </td><td></td></tr><tr> &lt;td&gt; NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 80,8 g </td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0,4 g </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glucose </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x stock de sel </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x stock régulateur </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Eau distillée </td><td> 1800 ml </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tableau 2. Recette pour une solution de sel physiologique norme (PSS) utilisé dans les protocoles de microvaisseaux isolés. Commentaires sur la recette: Faire 2 l de bouillon, sel et 2 litres de stock régulateur. Ces cêtre réfrigéré une lorsqu&#39;il n&#39;est pas utilisé, mais les secouer bien et souvent avant de préparer PSS. Les ingrédients supplémentaires sont ajoutés au moment de la préparation de PSS finales. <table border="1"><tbody><tr><td> PSS relaxants van Breemen de </td><td> Pour faire 2 litres de PSS </td><td> 20X Stock sel (1L) </td><td> 20X stock régulateur (1L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 107,4 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 7,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4 .7 H 2 O- </td><td></td><td> 5,76 g </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2-6H 2 O </td><td></td><td> 81,32 g </td><td></td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 40,4 g </td></tr><tr><td> HAEUne </td><td></td><td></td><td> 0,2 g </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 15,22 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glucose </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x stock de sel </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x stock régulateur </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Eau distillée </td><td> 1800 ml </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tableau 3. Recette pour Van Breemen de solution de sel relaxant physiologique (PSS) utilisé dans les protocoles de microvaisseaux isolés dans des conditions de tonalité actif à zéro. Commentaires sur la recette: Faire 1 L de stock de sel unee 1 L de stock régulateur. Ceux-ci peuvent être réfrigérés lorsqu&#39;il n&#39;est pas utilisé, mais les secouer bien et souvent avant de préparer PSS. Les ingrédients supplémentaires sont ajoutés au moment de la préparation des versions finales PSS relaxants.

la ex vivo préparation isolé microvaisseaux squelettique pour les enquêtes de la réactivité vasculaire

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

La préparation des microvaisseaux isolé est une préparation ex vivo qui permet à l&#39;examen des différentes contributions de facteurs qui diamètre du vaisseau de contrôle, et donc, 1-5 résistance perfusion. Il s&#39;agit d&#39;une préparation classique expérimental qui a été, dans une large mesure, initialement décrit par Uchida et al. De 15 il ya plusieurs décennies. Cette description initiale a fourni la base pour les techniques qui a été largement modifié et amélioré, principalement dans le laboratoire du Dr Brian Duling à l&#39;Université de Virginie 6-8, et nous présentons une approche actuelle dans les pages suivantes. Cette préparation sera spécifiquement référence à l&#39;artériole gracilis dans un rat comme des microvaisseaux de choix, mais la préparation de base peut être facilement appliqué aux navires isolés à partir de presque n&#39;importe quel autre tissu ou organe à travers les espèces 9-13. Mécaniques (c.-à-dimensionnelle) des changements dans l&#39;isolé microvaisseaux peuvent facilement être évaluéen réponse à un large éventail de paramètres physiologiques (par exemple, l&#39;hypoxie, la pression intravasculaire, ou de cisaillement) ou défis pharmacologiques, et peut donner un aperçu des éléments mécaniques comprenant des réponses intégrées dans une intacte, bien que ex vivo, des tissus. L&#39;importance de cette méthode est qu&#39;elle permet la manipulation facile des influences sur la régulation intégrée de diamètre des microvaisseaux, tout en permettant aussi le contrôle de la plupart des contributions provenant d&#39;autres sources, y compris la pression intravasculaire (myogène), l&#39;innervation autonome, hémodynamique ( par exemple, la contrainte de cisaillement), les stimuli endothéliales dépendante ou indépendante, hormonaux, et les influences du parenchyme, afin de fournir une liste partielle. Sous des conditions appropriées expérimentales et avec des objectifs appropriés, ce qui peut servir comme un avantage par rapport in vivo ou in situ des tissus / organes des préparations, qui ne permettent pas facilement pour le contrôle facile de variables systémiques plus larges. La malimitation jor de cette préparation est essentiellement la conséquence de ses points forts. Par définition, le comportement de ces navires est à l&#39;étude dans des conditions où la plupart des plus importants contributeurs à la régulation de la résistance vasculaire ont été supprimés, y compris de neurones, humorale, métabolique, etc En tant que tel, l&#39;enquêteur est mis en garde pour éviter de trop- l&#39;interprétation et l&#39;extrapolation des données qui sont recueillies en utilisant cette préparation. L&#39;autre domaine de préoccupation significatif à l&#39;égard de cette préparation est qu&#39;il peut être très facile d&#39;endommager les composants cellulaires tels que la paroi endothéliale ou le muscle lisse vasculaire, de telle sorte que des variables source d&#39;erreur peut être introduit. Il est fortement recommandé que l&#39;investigateur individuel d&#39;utiliser des mesures appropriées pour assurer la qualité de la préparation, à la fois au début de l&#39;expérience et périodiquement tout au long d&#39;un protocole.

Un<em&gt; Ex vivo</em&gt; Préparation est décrite pour l&#39;isolement des artérioles plus gracilis résistance musculaire pour interrogatoire des deux réponses à des stimuli vasoactifs vasculaires et l&#39;évaluation des propriétés structurales par le biais de base mécanique murales passives.

La Ex vivo Préparation isolé microvaisseaux squelettique pour les enquêtes de la réactivité vasculaire

La préparation de microvaisseaux isolés est une préparation ex vivo qui permet d'examiner les différentes contributions des facteurs contrôlant le vaisseau...

L'objectif général de cette procédure est d'isoler chirurgicalement, de retirer et de canuler doublement des artérioles de résistance individuelles. Pour une étude en conditions ex vivo, cela est réalisé en identifiant d'abord un vaisseau microscopique et en l'isolant chirurgicalement chez un animal anesthésié. Après transfert du vaisseau microscopique dans une chambre à vaisseau, les extrémités proximale et distale du vaisseau microscopique sont toutes deux canulées.Enfin, les microvaisseaux sont exposés à des défis pharmacologiques ou physiologiques ainsi qu'à des interventions expérimentales afin d'évaluer les mécanismes sous-jacents au fonctionnement ou au dysfonctionnement propres au vaisseau lui-même. En définitive, les résultats montrent les profils et les mécanismes contributifs sous-jacents à la réactivité vasculaire dans un environnement isolé, grâce à des stimuli et des interventions convenablement ciblés. Généralement, les personnes novices dans cette méthode éprouvent des difficultés, car cette préparation exige non seulement le développement de compétences chirurgicales excellentes à réaliser sous microscope, mais aussi de la patience et un contrôle moteur fin nécessaire pour canuler doublement un microvaisseau isolé dont le diamètre est fréquemment bien inférieur à cent micromètres.Cela doit être effectué avec un traumatisme absolument minimal pour le vaisseau, sinon l'ensemble de la procédure ne donnera qu'un vaisseau inerte, démontrant l'échec de la technique. La procédure sera réalisée par Joshua Butcher, étudiant diplômé de mon laboratoire, avant la préparation de microvaisseaux isolés. Commencez par courber des micropipettes en verre préalablement préparées selon une configuration appropriée en les chauffant au-dessus d'une flamme de butane. Utilisez ensuite des pinces fines pour casser les extrémités afin d'obtenir un diamètre adéquat.Placez deux micropipettes en opposition dans les supports de pipettes destinés à la chambre pour microvaisseaux, en les orientant de manière à ce que leurs extrémités se trouvent dans le même plan vertical et horizontal à l'intérieur de la chambre. Préparez ensuite une solution saline physiologique (PSS) et vérifiez que le pH est ajusté aux niveaux appropriés pour les conditions expérimentales spécifiques. À l’aide d’un hémocytomètre ou d’un micromètre de platine de microscope, étalonnez les pieds à coulisse vidéo numériques qui seront utilisés pour mesurer le diamètre du vaisseau.Utilisez un fil chirurgical ophtalmique de taille huit oh ou plus petit pour préparer des boucles à une extrémité afin d'attacher les microvaisseaux aux pipettes. Conservez les boucles dans une boîte de Pétri sur une petite bande de ruban adhésif enroulée autour d'une lame de microscope le jour de l'expérience. Allumez les gaz d'équilibration dans la chambre à vaisseaux ainsi que dans les réservoirs PERFUSE huit et SUSE huit.Remplissez tous les réservoirs, tubes et chambres avec la solution PSS. Si nécessaire, utilisez une seringue pour pousser doucement la solution PSS jusqu’au bout de la pipette afin de vous assurer qu’elle est débouchée et complètement remplie. Maintenez la pression d’entrée dans des limites raisonnables afin d’éviter d’endommager les capteurs de pression.Après avoir anesthésié l'animal et exposé les microvaisseaux, retirez les microvaisseaux en utilisant une pince fine pour saisir la paroi externe et en sectionnant longitudinalement le vaisseau. Prenez un soin extrême de ne pas tirer ou solliciter le vaisseau. Ensuite, placez le vaisseau dans le bain d'eau rempli et, à l'aide d'une paire de pinces fines et d'un débit de perfusion modéré, maintenez chaque côté de la paroi lumineuse du vaisseau proximal et canulez l'extrémité proximale sur la pipette d'entrée.Ensuite, glisser le vaisseau sur les embouts de la canule et avancer le vaisseau sur l'embout jusqu'au point où les boucles en T peuvent fixer le vaisseau. Mettre en place la boucle en T pour l'extrémité distale du vaisseau et le canuler sur la pipette de sortie, en le fixant avec les boucles en T. Ajuster la canule jusqu'à ce qu'il y ait une distorsion minimale du vaisseau et que la longueur du vaisseau s'approche de sa longueur in vivo.Placer une petite pierre à bulles délivrant le mélange gazeux approprié dans le bain et positionner. Recouvrir la chambre d'une pellicule plastique ou d'une coupelle en verre afin d'éviter que la lentille du microscope ne soit éclaboussée. Pincer périodiquement le tube de sortie pour déterminer si le vaisseau développe une coloration rouillée.Vérifiez les vaisseaux pour détecter les fuites en augmentant la pression dans le vaisseau et en pinçant d'abord les tubulures de sortie, puis celles d'entrée. Si la pression intraluminale est stable, il n'y a pas de fuites apparentes. Si le vaisseau possède une petite branche latérale qui fuit, ligaturez-la avec une simple boucle de suture ophtalmique 10 o. Après la canulation des microvaisseaux, l'équilibration et la validation, commencez l'expérience afin de déterminer les réponses initiales de contrôle.Par exemple, pour un stimulus physiologique tel qu'une activation myogène ou une constriction induite par la pression, modifiez aléatoirement la pression intraluminale sur une plage souhaitée et laissez au vaisseau le temps de répondre à une stimulation par la phényléphrine, administrée à des concentrations variables et dans un ordre aléatoire. Après une durée d'intervention appropriée, commencez un second cycle de collecte de données en réalisant des interventions supplémentaires ou en éliminant la solution initiale, ou encore en supprimant le stimulus physiologique et en vérifiant que le vaisseau est revenu à l'équilibre. Une fois que le vaisseau a perdu son tonus actif, mettez fin à l'expérience ou, si souhaité, recueillez des données sur la mécanique de la paroi du vaisseau.Lorsque l'expérience est terminée, rincez toutes les lignes et chambres avec du PSS et de grandes quantités d'eau distillée ou déionisée, puis laissez-les sécher complètement. On voit ici un microvaisseau cannelé équipé de pipettes d'entrée et de sortie, ainsi que des boucles observées à fort grossissement. Le diamètre interne de cent 12 micromètres, déterminé à l'aide d'un pied à coulisse numérique, est visible ici.Un microvaisseau canulé est montré après l'équilibration. Voici le même vaisseau après dilatation en réponse à une stimulation par l'acétylcholine. Enfin, ceci est le vaisseau contracté après stimulation par la phényléphrine.Ces graphiques résument les réponses d'un microvaisseau isolé à des défis tels que l'hypoxie, l'augmentation des concentrations d'acétylcholine ou des variations de la pression intravasculaire dans des conditions de contrôle, puis en présence d'une solution saline PSS sans calcium. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en environ une heure si elle est effectuée correctement, et le vaisseau peut facilement rester viable pendant plusieurs heures dans la chambre, à condition de maintenir une température appropriée ainsi que des conditions de gaz SUSE huit ou de perfusion huit.

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Biologie

Une nouvelle méthode polyvalente pour l'observation de la microcirculation est présenté. Il est considéré comme convenable pour observation à long terme, et pour la combinaison avec pharmacophysiological ou moléculaire interventions biologiques.

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L&#39;isolement et l&#39;aide de sections d&#39;encéphalopathie mésentérique artère et la veine comme les essais biologiques pour tester vasoactivité dans l&#39;intestin grêle

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Ici, nous présentons un protocole pour la coloration d'immunofluorescence pour observer les cellules endothéliales de l'aorte de souris directement. Cette technique est utile lors de l'étude du phénotype cellulaire et moléculaire des cellules endothéliales dans différents schémas de flux et dans le développement de l'athérosclérose.

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