Name: La Ex vivo Préparation isolé microvaisseaux squelettique pour les enquêtes de la réactivité vasculaire (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Apprenez l'isolation chirurgicale et la double canulation d'artérioles de résistance ex vivo pour étudier la réactivité vasculaire. Cette méthode permet d'évaluer les réponses aux stimuli pharmacologiques et les propriétés structurelles des vaisseaux.

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<ol><li>Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Chronic+Anticholesterol+Therapy+on+Development+of+Microvascular+Rarefaction+in+the+Metabolic+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome.</a> Microcirculation. , 1-18 (2009).</li>
<li>Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+vascular+thromboxane+generation+impairs+dilation+of+skeletal+muscle+arterioles+of+obese+Zucker+rats+with+reduced+oxygen+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth-dependent+changes+in+endothelial+factors+regulating+arteriolar+tone%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Growth-dependent changes in endothelial factors regulating arteriolar tone.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, H207-H214 (2007).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+peroxide+emerges+as+a+regulator+of+tone+in+skeletal+muscle+arterioles+during+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth.</a> Microcirculation. 15, 151-161 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+myogenic+responsiveness+of+skeletal+muscle+arterioles+with+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).</li>
<li>Dacey, R. G., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+study+of+rat+intracerebral+arterioles%3A+methods%2C+morphology%2C+and+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).</li>
<li>Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+of+extraparenchymal+resistance+arteries+of+rat+skeletal+muscle+to+reduce+PO2%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2.</a> Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).</li>
<li>Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin-%281-7%29+and+low-dose+angiotensin+II+infusion+reverse+salt-induced+endothelial+dysfunction+via+different+mechanisms+in+rat+middle+cerebral+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).</li>
<li>LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+inhalation+impairs+endothelium-dependent+vasodilation+in+subepicardial+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Toxicol.+Environ.+Health+A%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles.</a> J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).</li>
<li>Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+salt+enhances+benzamil-sensitive+component+of+myogenic+constriction+in+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).</li>
<li>Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+mechanisms+of+endothelium-dependent+dilation+in+skeletal+muscle+arterioles+with+genetic+hypercholesterolemia%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).</li>
<li>Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+arachidonic+acid-induced+thromboxane+generation+impairs+skeletal+muscle+arteriolar+dilation+with+genetic+dyslipidemia%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia.</a> Microcirculation. 15, 621-631 (2008).</li>
<li>Baumbach, G. L., Hadju, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+and+composition+of+cerebral+arterioles+in+renal+and+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension. 21, 816-826 (1993).</li>
<li>Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+studying+isolated+resistance+vessel+from+rabbit+mesentery+and+brain+and+their+responses+to+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs.</a> Circ. Res. 4, 525-536 (1967).</li>
<li>Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. solated Chapter 23. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDavis%2C+MJ+%22Isolated%2C+perfused+microvessels.+In%3A+Clinically+Applied+Microcirculation+Research%22">Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research</a>. Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. 32, CRC Press, Inc. 435-456 (1995).</li>
<li>Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+and+mechanical+responses+of+rat+middle+cerebral+arterieal+to+reduced+PO2+and+prostacyclin%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin.</a> Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).</li>
</ol>

Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

Le protocole présenté décrit la canulation isolement, le retrait et double d&#39;un microvaisseaux du muscle squelettique, bien que cette technique générale peut être facilement appliquée à la plupart des tissus. Pour le manuscrit en cours, le terme «artériole&quot; a été utilisé par les auteurs pour décrire un navire de résistance comprise entre 70-120 m de diamètre sous tonalité actif de repos, ce qui est également un contributeur majeur à la régulation de la résistance de perfusion à un organe ou tissus. <p class...

<table border="1"><tbody><tr><td> Réactifs et appareillage </td><td> Entreprise </td><td> Commentaires / Catalogue # </td></tr><tr><td> Chambre des navires </td><td> Coutume </td><td> Dave Eick (MCW) </td></tr><tr><td> Bain d&#39;eau chauffée de circulation </td><td> PolyScience et Haake </td><td> Haake DC 10 </td></tr><tr><td> Pipettes </td><td> Frédéric Haer &amp; Co. </td><td> Capillaire Tube 2,0 mm x 1,0 mm OD ID (27-33-1) </td></tr><tr><td> Le moniteur de pression </td><td> Instruments de précision du monde </td><td></td></tr><tr><td> Réservoir d&#39;eau chemisé </td><td> Coutume </td><td></td></tr><tr><td> Source de lumière externe </td><td> Instruments de précision du monde </td><td> Novaflex </td></tr><tr><td> Extracteur Pipet </td><td> Microdonnées à grande diffusion Instruments </td><td> PMP102 micropipette Puller </td></tr><tr><td> Achèvement completment d&#39;outils chirurgicaux </td><td> Outils belle science </td><td> Dumont </td></tr><tr><td> Ultra fines pinces </td><td> Outils belle science </td><td> Inox n ° 5 </td></tr><tr><td> Fil de suture en soie </td><td> Ethilon </td><td> # 10-0 ou 9-0 </td></tr><tr><td> Microscope stéréo </td><td> Olympe </td><td> Olympus SZ-11 </td></tr><tr><td> Étriers vidéo analogiques </td><td> Boeckeler </td><td> Via contrôleur (Via-100) </td></tr><tr><td> Caméra haute résolution analogique </td><td> Panasonic </td><td> GP-602 MF </td></tr><tr><td> Ballon d&#39;oxygène </td><td> Régional </td><td> Bilan de l&#39;azote de 21% et 5% de CO 2 d&#39;azote équilibre </td></tr><tr><td> Tubes </td><td> Tygon </td><td></td></tr><tr><td> Vider la pompe </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td></td></tr><tr><td> PSS Rat modifiés </td><td> Voir la recette ci-dessous </td><td></td&gt; </tr><tr><td> PSS relaxants van Breemen de </td><td> Voir la recette ci-dessous </td><td></td></tr></tbody></table> Tableau 1. Une liste des principaux composants de l&#39;installation des microvaisseaux station isolée présentés dans les figures. <table border="1"><tbody><tr><td> Mise à jour PSS Recette Rat </td><td> Pour faire deux litres de PSS </td><td> 20X Stock Sel (2L) </td><td> 20X stock régulateur (2L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 278,0 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 14,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4 .7 H 2 O- </td><td></td><td> 11,5 g </td><td></td></tr><tr><td> CaCl 2-H 2 O </td><td></td><td> 9,4 g </td><td></td></tr><tr> &lt;td&gt; NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 80,8 g </td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0,4 g </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glucose </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x stock de sel </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x stock régulateur </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Eau distillée </td><td> 1800 ml </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tableau 2. Recette pour une solution de sel physiologique norme (PSS) utilisé dans les protocoles de microvaisseaux isolés. Commentaires sur la recette: Faire 2 l de bouillon, sel et 2 litres de stock régulateur. Ces cêtre réfrigéré une lorsqu&#39;il n&#39;est pas utilisé, mais les secouer bien et souvent avant de préparer PSS. Les ingrédients supplémentaires sont ajoutés au moment de la préparation de PSS finales. <table border="1"><tbody><tr><td> PSS relaxants van Breemen de </td><td> Pour faire 2 litres de PSS </td><td> 20X Stock sel (1L) </td><td> 20X stock régulateur (1L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 107,4 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 7,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4 .7 H 2 O- </td><td></td><td> 5,76 g </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2-6H 2 O </td><td></td><td> 81,32 g </td><td></td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 40,4 g </td></tr><tr><td> HAEUne </td><td></td><td></td><td> 0,2 g </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 15,22 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glucose </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x stock de sel </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x stock régulateur </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Eau distillée </td><td> 1800 ml </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tableau 3. Recette pour Van Breemen de solution de sel relaxant physiologique (PSS) utilisé dans les protocoles de microvaisseaux isolés dans des conditions de tonalité actif à zéro. Commentaires sur la recette: Faire 1 L de stock de sel unee 1 L de stock régulateur. Ceux-ci peuvent être réfrigérés lorsqu&#39;il n&#39;est pas utilisé, mais les secouer bien et souvent avant de préparer PSS. Les ingrédients supplémentaires sont ajoutés au moment de la préparation des versions finales PSS relaxants.

la ex vivo préparation isolé microvaisseaux squelettique pour les enquêtes de la réactivité vasculaire

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

La préparation des microvaisseaux isolé est une préparation ex vivo qui permet à l&#39;examen des différentes contributions de facteurs qui diamètre du vaisseau de contrôle, et donc, 1-5 résistance perfusion. Il s&#39;agit d&#39;une préparation classique expérimental qui a été, dans une large mesure, initialement décrit par Uchida et al. De 15 il ya plusieurs décennies. Cette description initiale a fourni la base pour les techniques qui a été largement modifié et amélioré, principalement dans le laboratoire du Dr Brian Duling à l&#39;Université de Virginie 6-8, et nous présentons une approche actuelle dans les pages suivantes. Cette préparation sera spécifiquement référence à l&#39;artériole gracilis dans un rat comme des microvaisseaux de choix, mais la préparation de base peut être facilement appliqué aux navires isolés à partir de presque n&#39;importe quel autre tissu ou organe à travers les espèces 9-13. Mécaniques (c.-à-dimensionnelle) des changements dans l&#39;isolé microvaisseaux peuvent facilement être évaluéen réponse à un large éventail de paramètres physiologiques (par exemple, l&#39;hypoxie, la pression intravasculaire, ou de cisaillement) ou défis pharmacologiques, et peut donner un aperçu des éléments mécaniques comprenant des réponses intégrées dans une intacte, bien que ex vivo, des tissus. L&#39;importance de cette méthode est qu&#39;elle permet la manipulation facile des influences sur la régulation intégrée de diamètre des microvaisseaux, tout en permettant aussi le contrôle de la plupart des contributions provenant d&#39;autres sources, y compris la pression intravasculaire (myogène), l&#39;innervation autonome, hémodynamique ( par exemple, la contrainte de cisaillement), les stimuli endothéliales dépendante ou indépendante, hormonaux, et les influences du parenchyme, afin de fournir une liste partielle. Sous des conditions appropriées expérimentales et avec des objectifs appropriés, ce qui peut servir comme un avantage par rapport in vivo ou in situ des tissus / organes des préparations, qui ne permettent pas facilement pour le contrôle facile de variables systémiques plus larges. La malimitation jor de cette préparation est essentiellement la conséquence de ses points forts. Par définition, le comportement de ces navires est à l&#39;étude dans des conditions où la plupart des plus importants contributeurs à la régulation de la résistance vasculaire ont été supprimés, y compris de neurones, humorale, métabolique, etc En tant que tel, l&#39;enquêteur est mis en garde pour éviter de trop- l&#39;interprétation et l&#39;extrapolation des données qui sont recueillies en utilisant cette préparation. L&#39;autre domaine de préoccupation significatif à l&#39;égard de cette préparation est qu&#39;il peut être très facile d&#39;endommager les composants cellulaires tels que la paroi endothéliale ou le muscle lisse vasculaire, de telle sorte que des variables source d&#39;erreur peut être introduit. Il est fortement recommandé que l&#39;investigateur individuel d&#39;utiliser des mesures appropriées pour assurer la qualité de la préparation, à la fois au début de l&#39;expérience et périodiquement tout au long d&#39;un protocole.

Un<em&gt; Ex vivo</em&gt; Préparation est décrite pour l&#39;isolement des artérioles plus gracilis résistance musculaire pour interrogatoire des deux réponses à des stimuli vasoactifs vasculaires et l&#39;évaluation des propriétés structurales par le biais de base mécanique murales passives.

La Ex vivo Préparation isolé microvaisseaux squelettique pour les enquêtes de la réactivité vasculaire

La préparation de microvaisseaux isolés est une préparation ex vivo qui permet d'examiner les différentes contributions des facteurs contrôlant le vaisseau...

L'objectif général de cette procédure est d'isoler chirurgicalement, de retirer et de canuler doublement des artérioles de résistance individuelles. Pour une étude en conditions ex vivo, cela est réalisé en identifiant d'abord un vaisseau microscopique et en l'isolant chirurgicalement chez un animal anesthésié. Après transfert du vaisseau microscopique dans une chambre à vaisseau, les extrémités proximale et distale du vaisseau microscopique sont toutes deux canulées.Enfin, les microvaisseaux sont exposés à des défis pharmacologiques ou physiologiques ainsi qu'à des interventions expérimentales afin d'évaluer les mécanismes sous-jacents au fonctionnement ou au dysfonctionnement propres au vaisseau lui-même. En définitive, les résultats montrent les profils et les mécanismes contributifs sous-jacents à la réactivité vasculaire dans un environnement isolé, grâce à des stimuli et des interventions convenablement ciblés. Généralement, les personnes novices dans cette méthode éprouvent des difficultés, car cette préparation exige non seulement le développement de compétences chirurgicales excellentes à réaliser sous microscope, mais aussi de la patience et un contrôle moteur fin nécessa

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Ce protocole présente la mise en place et le fonctionnement d’un bioréacteur nouvellement développé, imprimé en 3D, pour la culture ex vivo de vaisseaux sanguins en perfusion. Le système est conçu pour être facilement adopté par d’autres utilisateurs, pratique, abordable et adaptable à différentes applications expérimentales, telles que la biologie fondamentale et les études pharmacologiques.

Ex Vivo Culture de perfusion de gros vaisseaux sanguins dans un bioréacteur imprimé en 3D

Apprenez l'isolation chirurgicale et la double canulation d'artérioles de résistance ex vivo pour étudier la réactivité vasculaire. Cette méthode permet d'évaluer les réponses aux stimuli pharmacologiques et les propriétés structurelles des vaisseaux.

La Ex vivo Préparation isolé microvaisseaux squelettique pour les enquêtes de la réactivité vasculaire

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