Name: Détermination de lactivité cytotoxique CD8 spécifiques optimale des cellules T humaines Her2neu en comparant les Cr51 Essai de libération dans le système de xCELLigence (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-08T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 31 s
Description: Découvrez une méthode d'impédance en temps réel pour évaluer l'activité cytotoxique des cellules T CD8 spécifiques d'antigènes, en la comparant à l'essai de libération au chrome.

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Ce travail a été soutenu par des subventions à Keith L. Knutson de la Susan G. Komen pour la Fondation Cure et les NIH / NCI 9R01 CA152045 et CA116201-P50.

<ol><li>Zhang, N., Bevan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD8%28%2B%29+T+cells%3A+foot+soldiers+of+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">CD8(+) T cells: foot soldiers of the immune system.</a> Immunity. 35, 161-168 (2011).</li>
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</ol>

Production et le libre accès de cette vidéo-article est sponsorisé par Roche Diagnostics.

Lymphocytes T CD8 sont importants pour la réponse immunitaire adaptative, être capable de tuer directement les cellules infectées ou malignes 4. Bien qu&#39;il existe plusieurs façons de mesurer le nombre de cellules T CD8 spécifiques de l&#39;antigène (par exemple ELIspot, tétramère, cytométrie en flux), il est souvent utile de savoir si ces cellules sont fonctionnellement cytotoxique 3. Le test le plus reconnaissable pour évaluer la fonction cytotoxique est l&#39;ARC, qui est considéré comme le 4 test étalon-or. Principales limites de l&#39;ARC sont (1) l&#39;exigence de la radioactivité, (2) le manque de sensibilité, (3) le manque d&#39;information sur le mécanisme, (4) l&#39;obligation pour les grandes quantités de cellules, et (5) ensemble laborieuse. Ainsi, au cours de la dernière décennie, il ya eu intérêt à adopter de nouvelles stratégies pour réduire ces limitations. Les approches plus récentes sont celles qui mesure la caspase version 4, BLT estérase activité5, et l&#39;expression de surface de CD107 6. Le présent manuscrit suggère quele dosage à base d&#39;impédance, effectué sur le système xCELLigence Roche, peut également être utile en tant qu&#39;alternative à l&#39;ARC. La capacité d&#39;adapter l&#39;approche à base d&#39;impédance repose sur l&#39;observation que les cellules T, qui n&#39;adhèrent pas bien aux surfaces, ne semblent pas avoir beaucoup d&#39;impact sur l&#39;impédance diminuant ainsi toute préoccupation d&#39;intervention directe des cellules T avec la mesure. Le travail requis pour l&#39;utilisation du système d&#39;analyse d&#39;impédance devrait être nettement moins principalement due à l&#39;élimination des préoccupations d&#39;ordre réglementaire pour l&#39;utilisation de la radioactivité. Le seul inconvénient notable du système à base d&#39;impédance, c&#39;est une dépense de 50.000 $ à 60.000 $ est exigé pour l&#39;achat de l&#39;unité de xCELLigence. Cependant, l&#39;unité de xCELLigence élimine le besoin d&#39;un compteur de radiation et est beaucoup plus polyvalent, être utile pour évaluer la réponse cellulaire aux médicaments et à la migration, en plus de la cytotoxicité des cellules T 8. Les observations quela diminution de l&#39;impédance de la cellule tumorale est dose-dépendante, comme le montre la figure 2, avec une pente assez raide après une fonction quadratique secondaire simple, suggère que le test pourrait être utilisé dans la limitation des essais de dilution (ADL) pour estimer la fréquence des cellules cytotoxiques 9 . Un avantage de l&#39;approche à base d&#39;impédance est que le nombre de cellules T et les cellules tumorales requise est inférieure à l&#39;ARC, faisant LDA potentiellement plus réalisable. Par exemple, à l&#39;ARC, à un rapport de 1:40 1 x 10 5 cellules tumorales par puits sont plaquées qui nécessite 4 x 10 6 cellules totales T par puits. Toutefois, dans le dosage à base d&#39;impédance, à seulement 1,5 x 10 4 cellules tumorales par puits sont nécessaires, qui ne consomme que 6 x 10 5 cellules T totale par puits. Ainsi, le dosage à base d&#39;impédance utilise des cellules T 85% de moins et les cellules tumorales. Cette diminution suggère que le système à base d&#39;impédance pourrait être adapté à la surveillance immunologique dans les essais cliniques chez l&#39;homme où til volumes de prélèvements sanguins peut être limitée. Par ailleurs, si l&#39;ARC est limitée à un seul moment, le dosage à base d&#39;impédance recueille des données en continu en temps réel, ce qui permet à l&#39;utilisateur de comparer plusieurs points dans le temps de lyse sur la même expérience avec un minimum de travail et les cellules supplémentaires. calculs de fréquence pourraient être combinées avec d&#39;autres stratégies qui ne mesurent pas la fonction telles que les analyses tétramère d&#39;établir le rapport des cellules T cytotoxiques fonctionnels au nombre total de lymphocytes T CD8 spécifiques de l&#39;antigène 10. Une des caractéristiques les plus intéressantes de l&#39;approche à base d&#39;impédance, c&#39;est que, contrairement à la plupart des autres tests, la cytotoxicité peut être suivie en temps réel, rendant potentiellement plus faciles à étudier les interactions cellulaires avec l&#39;utilisation d&#39;inhibiteurs ou d&#39;anticorps. Une autre est que le procédé peut être adapté pour les cellules tumorales qui résistent à l&#39;étiquetage. Enfin, puisque les cellules tumorales non-tués ne sont pas étiquetés et restent stériles, plus la récolte et l&#39;étude des cellules cellules résistantes T est possible. En résumé, alors que les deux systèmes fournissent des données tuant tumorales en réponse à cellules T spécifiques, le dosage à base d&#39;impédance est plus sensible que l&#39;ARC et fournit une plate-forme plus flexible.

<table><tbody><tr><td>Ficoll-Paque Plus </td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-03</td><td>Utilisé pour isoler les PBMC à partir du sang </td></tr><tr><td>RPMI 1640 </td><td>Cellgro</td><td>10-040-CV</td><td>Milieu de culture cellulaire </td></tr><tr><td>SFM </td><td>Denville Scientific</td><td>FB5001-H</td><td>Milieu de culture cellulaire </td></tr><tr><td>IL-2 humain </td><td>eBioscience</td><td>14-8029-81</td><td>Pour stimuler la croissance des cellules T </td></tr><tr><td>Interféron gamma humain </td><td>Sciences cellulaires</td><td>CR2026</td><td>Pour stimuler l'expression du CMH dans les cellules tumorales </td></tr><tr><td>Peptide HER-2/neu p369-377 </td><td>Centre de synthèse de peptides de la Mayo Clinic</td><td>séquence d'acides aminés KIFGSLAFL</td><td>Se lie à l'HLA-A2 </td></tr><tr><td>Peptide influenza p58-66 </td><td>Centre de synthèse de peptides de la Mayo Clinic</td><td>séquence d'acides aminés GILGFVFTL</td><td>Se lie à l'HLA-A2 </td></tr><tr><td>Human CD3/CD28 Dynabeads </td><td>Invitrogen</td><td>111-61D</td><td>Pour l'activation et l'expansion non spécifiques des lymphocytes T </td></tr><tr><td>Chrome-51 </td><td>MP Biomedicals</td><td>62015</td><td>Réactif de marquage CRA </td></tr><tr><td>Plaque E </td><td><a href="http://www.aceabio.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Roche Group</a></td><td>05469830001</td><td>Pour l'unité d'impédance xCelligence </td></tr><tr><td>Plaque Luma 96 </td><td>PerkinElmer, Inc.</td><td>6005630</td><td>Pour la mesure de la radioactivité dans le Top Count NXT. </td></tr><tr><td>Station xCelligence RTCA DP </td><td><a href="http://www.aceabio.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Roche Applied Science</a></td><td>RTCA DP</td><td>Unité d'impédance </td></tr><tr><td>Nombre supérieur Compter NXT </td><td>PerkinElmer, Inc.</td><td>C990601</td><td>Scintillation &amp;amp; Compteur de luminiscence </td></tr><tr><td>Ligand Fas, anticorps</td><td>BD Biosciences</td><td>556372</td><td>Pour bloquer les interactions Fas-Fas ligand</td></tr><tr><td>anticorps HLA-A2 BB7.2</td><td>BD Biosciences</td><td>551230</td><td>Pour la blocage des molécules HLA de classe I</td></tr><tr><td>IgG2b de souris, &amp;#954;</td><td>BD Biosciences</td><td>555740</td><td>Contrôle d'isotype pour le CMH de classe I</td></tr><tr><td>Ligne cellulaire tumorale SKBR3</td><td>ATCC</td><td>HTB-30</td><td>Adénocarcinome</td></tr><tr><td>ligne tumorale MCF7</td><td>ATCC</td><td>HTB-22</td><td>Adénocarcinome</td></tr><tr><td>ligne tumorale HCC1419</td><td>ATCC</td><td>CRL-2326</td><td>Carcinome canalaire primitif</td></tr><tr><td>ligne tumorale BT20</td><td>ATCC</td><td>HTB-19</td><td>Carcinome</td></tr></tbody></table>

détermination de l&#39;activité cytotoxique cd8 spécifiques optimale des cellules t humaines her2neu en comparant les cr51 essai de libération dans le système de xcelligence

Determining Optimal Cytotoxic Activity of Human Her2neu Specific CD8 T cells by Comparing the Cr51 Release Assay to the xCELLigence System

Lymphocytes T CD8 cytotoxiques constituent un sous-groupe de cellules T qui sont capables d&#39;induire la mort des cellules hôtes infectées ou malignes 1. Ces cellules expriment un récepteur spécialisé, appelé le récepteur des cellules T (TCR), qui peut reconnaître un peptide antigénique spécifique lié à HLA de classe I molécules de 2. Engagement des cellules infectées ou des cellules tumorales par leur classe I résultats de molécules HLA dans la production de molécules lytiques comme granzymes et perforine entraînant la mort de la cellule cible. Bien qu&#39;il soit utile pour déterminer les fréquences de cellules spécifiques de l&#39;antigène T CD8 en utilisant des analyses telles que la ELIspot ou la cytométrie de flux, il est également utile pour évaluer la solidité de réponses CD8 des lymphocytes T à l&#39;aide de tests de cytotoxicité 3. Le test le plus reconnaissable pour évaluer la fonction cytotoxique est le test de libération du chrome (ARC), qui est considéré comme un 4 de dosage standard. L&#39;ARC présente plusieurs limites, notamment l&#39;exposition des cellules aux radiations gamma, lack de reproductibilité et une exigence pour un grand nombre de cellules. Au cours de la dernière décennie, il ya eu intérêt à adopter de nouvelles stratégies pour surmonter ces limitations. Les approches plus récentes sont celles qui mesure la caspase version 4, l&#39;activité estérase BLT 5 et l&#39;expression de surface de CD107 6. Le dosage à base d&#39;impédance, en utilisant le système de xCELLigence Roche, a été examiné dans le présent document pour son potentiel en tant qu&#39;alternative à l&#39;ARC. Impédance ou en opposition à un courant électrique se produit lorsque les cellules tumorales adhérentes se lient aux plaques d&#39;électrodes. Les cellules tumorales se détachent après meurtre et l&#39;impédance électrique est réduite, ce qui peut être mesuré par le système de xCELLigence. La capacité d&#39;adapter l&#39;approche à base d&#39;impédance pour évaluer mort à médiation cellulaire repose sur l&#39;observation que les cellules T n&#39;adhèrent pas bien à la plupart des surfaces et ne semblent pas avoir beaucoup d&#39;impact sur l&#39;impédance diminuant ainsi toute préoccupation d&#39;ingérence directe des cellules T avecla mesure. Les résultats montrent que le test à base d&#39;impédance peut détecter des changements dans les niveaux de lymphocytes T CD8 cytotoxiques spécifiques de l&#39;antigène avec une sensibilité accrue par rapport à la norme ARC. Sur la base de ces résultats, les approches à base d&#39;impédance peuvent être de bonnes alternatives aux agences de notation ou d&#39;autres approches qui visent à mesurer la fonctionnalité des cellules cytotoxiques CD8 T.

Le test de libération du chrome, un dosage commun pour détecter l&#39;activité des cellules T cytotoxiques, présente plusieurs limitations. En utilisant des cellules T CD8 spécifiques de l&#39;antigène et la ligne de tumeur du cancer du sein humain, SKBR3, dans le présent article, une approche à base d&#39;impédance a été examiné pour la capacité de détecter la destruction des cellules.

Détermination de l&#39;activité cytotoxique CD8 spécifiques optimale des cellules T humaines Her2neu en comparant les Cr51 Essai de libération dans le système de xCELLigence

Les lymphocytes T CD8 cytotoxiques constituent un sous-groupe de lymphocytes T capables d'induire la mort de cellules hôtes infectées ou malignes1. Ces cellules expriment...

L'objectif général de l'expérience suivante est de déterminer l'activité des lymphocytes T cytotoxiques en comparant une approche basée sur l'impédance utilisant le système EXOGEN avec le test de libération de chrome. La première étape consiste à isoler les cellules mononucléées du sang périphérique à partir de sang total à l'aide de fial. Ensuite, les PBMC sont ajoutés dans des puits contenant un antigène peptidique, de l'IL deux recombinante humaine et des PBMC irradiés afin de générer des lymphocytes T CD huit spécifiques de l'antigène.Les lymphocytes T CD8 spécifiques de l'antigène sont ensuite cultivés en co-culture avec des cellules tumorales dans les deux tests afin d'induire la mort des cellules tumorales. Les résultats obtenus montrent le pourcentage de lyse des cellules tumorales, mesuré à la fois par la méthode d'impédance et par le test de libération de chrome. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, comme le test de libération de chrome, est que le système basé sur l'impédance permet de recueillir des données en temps réel et nécessite moins de cellules, qui ne doivent pas être marquées. Pour ce protocole, le sang provenant de donneurs sains, positifs pour l'HLA-A2, fournit une source de PBMC (cellules mononucléées du sang périphérique) conformément au protocole du fabricant.Utilisez F call PA plus pour séparer les P BMCs du sang. Ensuite, chargez environ 4 millions de P BMCs dans deux millilitres de milieu par puits dans des plaques à six puits. Ajoutez à chaque puits le peptide se liant à HLAA deux à une concentration finale de 10 microgrammes par millilitre de culture.Les cellules tous les deux jours afin de stimuler et d'élargir les lymphocytes T. Ajouter du milieu frais supplémenté avec de l'IL-2 humaine recombinante à une concentration finale de 50 unités par millilitre. Après une semaine, préparer une culture de PBMC autologues, irradier les cellules et les exposer pendant deux heures à la même HLA.Un peptide à deux sites de liaison à 10 microgrammes par millilitre permet de restimuler la culture en ajoutant un millilitre des PBMC autologues irradiés à chacun. Continuer à ajouter du milieu frais supplémenté avec l'IL-2 tous les deux jours ; après une autre semaine, restimuler les cultures de la même manière une deuxième fois. Après six jours supplémentaires en culture, les cellules seront prêtes à être utilisées.Préparez la station de mesure d'impédance intelligente en l'équilibrant à 37 degrés Celsius sous 5 % de dioxyde de carbone pendant au moins une heure. Récoltez les cellules tumorales humaines à 75 % de confluence en utilisant de la trypsine 0,25 % et une centrifugation. Comptez les cellules tumorales à l'aide d'un hémocytomètre et reconstituez-les dans du RPMI.Milieu tumoral à une concentration de 7 500 cellules par microlitre. Ensuite, le logiciel agent Excel configure la page de disposition avec la disposition des puits. Configurez la page de planification pour effectuer des mesures d'impédance toutes les cinq minutes pendant une période de 40 heures ; durant les 18 premières heures, le système Xceligent ne prendra des mesures d'impédance que des cellules tumorales.Ensuite, ajouter 100 microlitres de milieu tumoral RPMI par puits. Effectuer une mesure de fond sur les EPL en mesurant l'impédance en l'absence de cellules. Après l'ajout des cellules tumorales, charger les plaques dans la station EPL et commencer les mesures.Les cellules tumorales commenceront immédiatement à adhérer aux EPL. Après environ 18 heures d'incubation, les cellules tumorales seront attachées aux EPL et auront doublé pour atteindre 15 000 cellules tumorales par puits. À ce moment, récoltez les lymphocytes T préparés par écaillage doux et centrifugation avec agitation.Les lymphocytes T, les reconstituer dans un milieu RPMI contenant 10 % de SBF et les compter à l'aide d'un hémocytomètre. Une fois la densité cellulaire connue, préparer une série de dilutions au demi de lymphocytes T de sorte que, lorsqu'on ajoute 200 microlitres de lymphocytes T aux cellules tumorales, la concentration la plus élevée soit de 40 lymphocytes T par cellule tumorale. La dernière dilution de la série doit fournir 1,25 lymphocyte T par cellule tumorale.Mettez en pause la station EXOGEN et retirez le EPL à l’aide d’une pipette. Éliminez le milieu des puits, puis ajoutez 200 microlitres de lymphocytes T en utilisant toutes les concentrations de la série de dilutions comme témoin négatif. Utilisez du milieu pur, replacez le EPL dans la station, puis poursuivez le programme à la fin du dosage.Normalisez les résultats. Suivez toujours les procédures de sécurité radiologique établies par l'institution lorsque vous manipulez du chrome 51 et des cellules cibles marquées au chrome 51, et utilisez un blindage pour réduire l'exposition aux radiations. Commencez par pulser les cellules tumorales pendant deux heures à raison d'un million de cellules par millilitre avec 10 microlitres par millilitre de chrome 51 frais.Ensuite, lavez les cellules tumorales dans 10 millilitres de milieu RPMI contenant 10 % de FCS, centrifugez les cellules et resuspendez-les dans le même milieu à une concentration d'un million de cellules par millilitre. Puis, dans une plaque de 96 puits à fond rond, ajoutez 100 000 cellules tumorales par puits pour calculer la libération spontanée.Ne rien ajouter à six de ces puits par rapport à six autres puits. Ajouter 100 microlitres de Triton X-100 pour lyser les cellules et ainsi calculer la libération maximale dans tous les puits restants. Ajouter les cellules T à la plaque en utilisant la série de dilutions préparée précédemment.Incubez maintenant les plaques pendant cinq heures et prélèvez des échantillons de 50 microlitres de surnageant à partir de chaque puits. Chargez les échantillons sur une plaque luma après avoir séché les plaques dans la hotte toute la nuit à température ambiante. Mesurez leurs CPM à l’aide d’un compteur gamma T-cell et SKBR trois. Les cellules cancéreuses ont été cultivées sur des plaques X intelligence et l’indice cellulaire a été mesuré, ce qui reflète l’impédance de la plaque, car les cellules T n’ont pas besoin d’adhérence pour proliférer.Leur effet sur l'impédance a été négligeable au cours d'une culture de 40 heures. Les cellules cancéreuses cultivées seules ont montré une mesure d'impédance croissante. Toutefois, l'ajout de cellules T à 18 heures interrompt cette tendance.Cet événement nécessite une normalisation logicielle après l'ajout de cellules T et est davantage étudié dans l'expérience suivante. Lorsque des cellules SK BR 3 ont été mises en co-culture avec des concentrations variables de cellules T, les réductions de l'impédance étaient très clairement dépendantes de la dose de cellules T ; les données ont été recueillies toutes les cinq minutes au cours de trois essais, au point temporel de 10 heures. Les indices cellulaires suivaient un polynôme du second ordre sur la gamme des concentrations de cellules T, indiquant que la station Exogen surveille en temps réel la mort des tumeurs SK B 3 induite par les cellules T CD8+ via une baisse de l'indice cellulaire, afin de déterminer si les réductions de l'impédance des cellules SK BR 3 provoquées par les cellules T étaient spécifiques de l'antigène.Les cellules SK KBR trois ont été cultivées en co-culture avec des cellules T spécifiques de la grippe (FLU) positives pour HLA A deux, qui ne reconnaissent pas HER deux nouveau. Ces cellules présentaient une activité lytique significativement moindre. Afin de déterminer davantage si les cellules T spécifiques d’HER deux nouveau exerçaient une cytotoxicité de manière spécifique à l’antigène, un anticorps dirigé contre le ligand Fas a été ajouté aux co-cultures. L’anticorps n’a pas réduit l’activité lytique des cellules T spécifiques d’HER deux nouveau P 360 9.Cependant, avec des lymphocytes T activés de manière non spécifique à l’aide de billes anti-CD3, CD28, l’anticorps a inhibé la lyse, indiquant que la destruction se produisait de manière dépendante de la classe I du CMH. Un anticorps anti-classe I du CMH ou un anticorps contrôle d’isotype a été ajouté aux co-cultures. Les résultats ont fortement soutenu cette hypothèse.Les cellules T ont ensuite été co-cultivées avec d'autres cellules cancéreuses selon un rapport de un à cinq. La lignée cellulaire tumorale négative pour HLA A deux, BT 20, a été utilisée comme témoin négatif. Les résultats montrent que la méthode est utile pour de multiples cellules tumorales adhérentes cibles.Des cocultures des cellules T spécifiques HER deux nouvelles P 360 9 ont été ajoutées à des cellules cibles marquées au chrome 51, suivies d'une analyse CRA. Le test d'intelligence semble plus sensible pour analyser la cohérence. La variation intra-test a été calculée comme le pourcentage de coefficient de variation à chaque rapport cellulaire entre un à 40 et un à cinq.Cette mesure était inférieure à 15 % aux rapports cellulaires les plus faibles. Toutefois, le pourcentage de CV était élevé ou imprévisible. En outre, la variabilité de la lyse des cellules T SK BR trois par co-culture avec différentes lignées de cellules T spécifiques de P 360 9 a été examinée.Les données ont été générées à 30 jours d'intervalle. Les essais ont été réalisés en triplicata et les résultats étaient très similaires. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment déterminer l'activité des lymphocytes T cytotoxiques à l'aide de lymphocytes T CD8 spécifiques de l'antigène et de cellules tumorales, en utilisant une approche fondée sur l'impédance.

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Immunology and Infection

Immunologie et infection

Nous décrivons une cellule unique à haut débit essai pour mesurer la cytotoxicité des lymphocytes T lorsqu'ils sont incubés avec les cellules cibles tumorales. Ce procédé utilise une matrice élastomère dense, de puits sous-nanolitres (~ 100.000 puits / matrice) à l'espace confiner les cellules T et les cellules cibles à des rapports définis et est couplée à la microscopie par fluorescence pour surveiller effecteur-cible conjugaison et l'apoptose subséquente.

Quantitative à haut débit Test de cytotoxicité cellulaire unique pour les cellules T

Ce protocole décrit un test de cytotoxicité sensible basé sur des cellules. En énumérant la diminution de la fréquence des lymphocytes T CD4+ cibles vivantes en présence d’un nombre croissant de lymphocytes T CD8+ effecteurs, ce test permet d’évaluer directement l’activité cytolytique des lymphocytes T CD8+ spécifiques de l’antigène.

Test de cytométrie en flux cellulaire pour mesurer l’activité cytotoxique

Nous décrivons un système d'essai in vitro quantitatif de cytolyse en temps réel pour évaluer la puissance des cellules De T de récepteur d'antigène chimérique ciblant les cellules tumorales liquides et pleines. Ce protocole peut être étendu pour évaluer d'autres cellules effectrices immunitaires, ainsi que des traitements combinés.

Un analyse de puissance en temps réel pour les cellules T de récepteur d'antigène chimérique ciblant les cellules cancéreuses solides et hématologiques

Nous décrivons ici une méthode de culture in vitro de co aux cellules de T de tumeur ciblée de défi de manière récursive, qui permet une analyse phénotypique et fonctionnelle de l’activité antitumorale des lymphocytes T.

En reprise cellule tumorale in Vitro pour l’évaluation prédictive de l’antigène chimérique fonction antitumorale des récepteurs des lymphocytes T

Nous décrivons ici un essai de tuerie in vivo basé sur la cytométrie en flux qui permet l’examen de l’immunodominance dans les réponses cytotoxiques des lymphocytes T (CTL) à un antigène tumoral modèle. Nous fournissons des exemples de la façon dont ce dosage élégant peut être utilisé pour les études mécanistes et pour les tests d’efficacité des médicaments.

Adaptation des dosages de cytotoxicité in vivo à l’étude de l’immunodominance dans des réponses cellulaires spécifiques à la tumeur et aux lymphocytes T

Un système de dosage in vitro à haut débit très précis a été développé pour évaluer les médicaments anticancéreux utilisant des organoïdes tumoraux dérivés du patient (PDO), similaires aux tissus cancéreux, mais ne conviennent pas aux systèmes de dosage in vitro à haut débit avec des plaques de 96 puits et 384 puits.

Test in vitro à haut débit utilisant des organoïdes tumoraux dérivés du patient

Ce protocole présente une technique automatisée à haut débit basée sur l’image pour identifier les composés modulant la destruction des cellules cancéreuses du sein médiée par les cellules tueuses naturelles en présence d’un anticorps thérapeutique anti-HER-2.

Essai de criblage à haute teneur pour l’identification de composés modificateurs de la cytotoxicité cellulaire dépendants des anticorps

Ici, nous présentons une méthode pour identifier les composés qui modulent le mécanisme ADCC, un mécanisme important de destruction des cellules cancéreuses des anticorps antitumoraux. L’effet cytotoxique des cellules NK est mesuré dans les sphéroïdes des cellules cancéreuses du sein en présence de trastuzumab. L’analyse d’images permet d’identifier les cellules tueuses et cibles vivantes et mortes dans les sphéroïdes.

Quantification de la cytotoxicité cellulaire dépendante des anticorps dans un modèle sphéroïde tumoral : application à la découverte de médicaments

Ici, nous présentons un protocole pour un test de cytotoxicité à médiation cellulaire (ADCC) dépendant des anticorps à l’aide d’un kit de dosage biologique ADCC. Cette méthode offre un outil précieux pour élucider le mécanisme de l’ADCC et évaluer le potentiel thérapeutique des anticorps dans l’immunothérapie du cancer.

Évaluation de la cytotoxicité à médiation cellulaire dépendante des anticorps dans les cellules cancéreuses à l’aide d’un essai biologique de prototoxicité à médiation cellulaire dépendante des anticorps

Le présent protocole décrit un flux de travail expérimental qui permet l’analyse ex vivo de la stimulation des lymphocytes T humains dans un système de co-culture allogénique avec des cellules tumorales prétraitées.

Analyse de l’activité des lymphocytes T humains dans un cadre de co-culture allogénique de cellules tumorales prétraitées

Ce protocole fournit un flux de travail standardisé in vitro. pour une mesure cohérente de la cytotoxicité naturelle, médiée par les récepteurs antigéniques chimériques et dépendante des anticorps des cellules humaines naturelles tueuses grâce à l’imagerie des cellules vivantes et à la cytométrie en flux.

Quantification de la cytotoxicité des cellules NK potentialisée par des récepteurs antigéniques chimériques et des anticorps thérapeutiques à l’aide d’imagerie à cellules vivantes et de cytométrie en flux

Découvrez une méthode d'impédance en temps réel pour évaluer l'activité cytotoxique des cellules T CD8 spécifiques d'antigènes, en la comparant à l'essai de libération au chrome.

Détermination de lactivité cytotoxique CD8 spécifiques optimale des cellules T humaines Her2neu en comparant les Cr51 Essai de libération dans le système de xCELLigence (Vidéo) | JoVE Journal

Détermination de l'activité cytotoxique CD8 spécifiques optimale des cellules T humaines Her2neu en comparant les Cr51 Essai de libération dans le système de xCELLigence

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