Name: Le test neuroblaste: Un test pour la génération et lenrichissement des cellules souches neuronales à partir de différenciation des cellules souches neurales Progeny Par cytométrie en flux (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 40 s
Description: Découvrez la génération et le tri de progéniteurs neuronaux à partir de cellules souches neurales par cytométrie en flux. Cette méthode permet d'isoler des populations cellulaires immatures pour la recherche en neurosciences.

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<ol><li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393(2010).</li>
<li>Azari, H., Sharififar, S., Rahman, M., Ansari, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+Embryonic+Mouse+Neural+Stem+Cell+Culture+Using+the+Neurosphere+Assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (47), e2457(2011).</li>
<li>Siebzehnrubl, F. A., Vedam-Mai, V., Azari, H., Reynolds, B. A., Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Characterization+of+Adult+Neural+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and Characterization of Adult Neural Stem Cells.</a> Methods. Mol. Biol. 750, 61-77 (2011).</li>
<li>Scheffler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+and+functional+characterization+of+adult+brain+neuropoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Phenotypic and functional characterization of adult brain neuropoiesis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 9353-9358 (2005).</li>
<li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+immature+neuronal+cells+from+neural+stem+cell+progeny%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Purification of immature neuronal cells from neural stem cell progeny.</a> PLoS One. 6, e20941-e20941 (2011).</li>
<li>Amariglio, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donor-Derived+Brain+Tumor+Following+Neural+Stem+Cell+Transplantation+in+an+Ataxia+Telangiectasia+Patient%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+Medicine%22%5BJournal%5D)">Donor-Derived Brain Tumor Following Neural Stem Cell Transplantation in an Ataxia Telangiectasia Patient.</a> Plos Medicine. 6, 221-231 (2009).</li>
</ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à révéler.

La capacité d&#39;isoler des populations définies de cellules neurales (neurones à savoir, astrocytes et oligodendrocytes) pourrait résoudre certains des obstacles associés à l&#39;application clinique des cellules souches neurales (CSN). Tout d&#39;abord, il nous permet de caractériser complètement la population de départ de cellules du donneur. Deuxièmement, il nous permet d&#39;utiliser un type cellulaire particulier ou une combinaison de différents types de cellules avec un rapport spécifique, en fonction de la natu...

<table border="1"><tr><td> Nom du réactif </td><td> Type </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> NeuroCult NSC moyen basal </td><td> Moyen </td><td> Technologies des cellules souches </td><td> 05700 </td><td></td></tr><tr><td> NeuroCult NSC suppléments prolifération </td><td> Supplément moyen </td><td> Technologies des cellules souches </td><td> 05701 </td><td></td></tr><tr><td> 0,05% de trypsine-EDTA </td><td> Réactif </td><td> Gibco </td><td> 25300-062 </td><td></td></tr><tr><td> Inhibiteur de trypsine de soja </td><td> Réactif </td><td> Sigma </td><td> T6522 </td><td></td></tr><tr><td> Pen / Strep </td><td> Réactif </td><td> Gibco </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> * MEM </td><td> Réactif </td><td> Gibco </td><td> 41500-018 </td><td> Composante HEM </td></tr><tr><td> * Les HEPES </td><td> Réactif </td><td> Sigma </td><td> H4034 </td><td> Composante HEM </td></tr><tr><td> * L&#39;eau distillée </td><td> Réactif </td><td> Gibco </td><td> 15230-147 </td><td></td></tr><tr><td> Tamis cellulaire </td><td> Tamis </td><td> BD Falcon </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> T25 flacon </td><td> Culture de la céramique </td><td> Nalge Nunc internationale </td><td> 136196 </td><td></td></tr><tr><td> T80 flacon </td><td> Culture de la céramique </td><td> Nalge Nunc internationale </td><td> 178905 </td><td></td></tr><tr><td> Tubes de 15 ml </td><td> Culture de la céramique </td><td> BD Falcon </td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> Tubes de 50 ml </td><td> Culture de la céramique </td><td> BD Falcon </td><td> 352070 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> EGF </td><td> Facteur de croissance </td><td> R &amp; D </td><td> 2028-EG </td><td></td></tr><tr><td> b-FGF </td><td> Facteur de croissance </td><td> R &amp; D </td><td> 3139-FB </td><td></td></tr><tr><td> Héparine </td><td> Facteur de croissance </td><td> Sigma </td><td> H4784 </td><td> Reconstitué dans du PBS </td></tr><tr><td> Anti-PSA-NCAM-PE </td><td> Anticorps </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-093-274 </td><td></td></tr><tr><td> IgG1 souris PE-conjugué </td><td> Anticorps de contrôle isotypique </td><td> BD Pharminogen </td><td> 556029 </td><td></td></tr><tr><td> Héparine </td><td> Facteur de croissance </td><td> Sigma </td><td> H4784 </td><td> Reconstitué dans du PBS </td></tr><tr><td> PMOrh-4 </td><td> Facteur de croissance </td><td> R &amp; D </td><td> 314-BP-010 </td><td></td></tr><tr><td> Poly-L-Ornithine </td><td> Réactif </td><td> Sigma </td><td> P4957 </td><td></td></tr><tr><td> Sérum de veau foetal </td><td> Supplément moyenne </td><td> Gibco </td><td> 10099-141 </td><td></td></tr><tr><td> GFAP </td><td> Anticorps </td><td> DAKO </td><td> Z0334 </td><td></td></tr><tr><td> B-III tubuline </td><td> Anticorps </td><td> Promega </td><td> G7121 </td><td></td></tr></table> * Pour faire HEM, mélange 1 sachet x L 10 du MEM et 160 ml de HEPES 1M et porter le volume à 8,75 L avec de l&#39;eau distillée. Réglez le pH final à 7,4 et le conserver à 4 ° C.

le test neuroblaste: un test pour la génération et l&#39;enrichissement des cellules souches neuronales à partir de différenciation des cellules souches neurales progeny par cytométrie en flux

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Les cellules souches neurales (CSN) peuvent être isolés et élargi à grande échelle, en utilisant le test neurosphères et différenciés dans les trois principaux types de cellules du système nerveux central (SNC); à savoir, les astrocytes, oligodendrocytes et des neurones. Ces caractéristiques font de souches neurales et les cellules progénitrices une source inestimable renouvelable de cellules pour des études in vitro, tels que le dépistage des drogues, neurotoxicologie et l&#39;électrophysiologie et aussi pour la thérapie de remplacement cellulaire dans de nombreuses maladies neurologiques. En pratique, cependant, l&#39;hétérogénéité de la descendance NSC, la faible production de neurones et des oligodendrocytes, les astrocytes et la prédominance de la suite de différenciation limiter leurs applications cliniques. Ici, nous décrivons une nouvelle méthodologie pour la purification de production et subséquente des neurones immatures de NSC descendance murin utilisant la fluorescence tri cellulaire (FACS) de la technologie. En utilisant cette méthodologie, une population hautement enrichi de cellules souches neuronales peuvent être atteints d&#39;espritHout toute astrocytes notable et de bonne foi la contamination NSC. La procédure comprend la différenciation des produits de filiation du NSC isolé et agrandi à partir de E14 éminences ganglionnaires de souris en utilisant le test neurosphères, suivie par l&#39;isolement et l&#39;enrichissement de cellules immatures neuronaux en fonction de leurs propriétés physiques (taille et la complexité interne) et fluorescente utilisant la technologie de cytométrie en flux. Dans l&#39;ensemble, cela prend 5-7 jours pour générer neurosphères et 6-8 jours pour différencier descendance NSC et d&#39;isoler hautement purifié des cellules neuronales immatures.

Ce protocole vidéo démontre une nouvelle méthode pour la génération et la purification ultérieure des cellules progénitrices neuronales à partir d&#39;une source renouvelable de cellules souches neurales (CSN) en fonction de leur physique (taille et granularité interne) et les propriétés fluorescentes en utilisant la technologie de cytométrie en flux.

Le test neuroblaste: Un test pour la génération et l&#39;enrichissement des cellules souches neuronales à partir de différenciation des cellules souches neurales Progeny Par cytométrie en flux

Les cellules souches neurales (CSN) peuvent être isolées et expansées à grande échelle à l'aide du test des neurosphères, puis différenciées en trois principaux types cellulaires de...

L'objectif de ce protocole vidéo est de démontrer la génération et l'enrichissement de cellules progénitrices neuronales à partir de descendants de cellules souches neurales en différenciation, en utilisant la cytométrie en flux. Cela est réalisé en isolant et en amplifiant d'abord les cellules souches neurales à l'aide du test de formation de neurosphères. Les cellules obtenues sont ensuite différenciées selon une méthode en deux étapes appelée le test de neuroblaste.Enfin, à l’aide de la cytométrie en flux, des populations cellulaires distinctes peuvent être identifiées et triées en fonction de leurs propriétés physiques et fluorescentes. Dans ce protocole, nous présenterons de nouvelles méthodes tant pour la différenciation des cellules souches neuronales, appelée test du neuroblaste, que pour la purification des progéniteurs neuronaux immatures obtenus par cytométrie en flux. Le test du neuroblaste comporte une phase de prolifération, qui dure environ trois à quatre jours, et une phase de différenciation d’environ quatre à cinq jours.Pendant la phase de différenciation, une monocouche de cellules se forme, composée d'astrocytes situés en dessous et de groupes de neurones immatu

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JoVE Journal

Neuroscience

Neurosciences

Ce protocole vidéo montre comment faire de la discrimination et d'énumérer bona fide des cellules souches neurales dans une population mixte de cellules précurseurs neurales utilisant le test sur des cellules neurales formant colonie.

Neural-Formant Colonie dosage cellulaire: Un test pour distinguer Bona Fide Cellules souches neuronales à partir de cellules progénitrices neurales

Cette vidéo présente le test de migration de la neurosphère des cellules précurseurs neurales, un test in vitro permettant d’étudier la réponse migratoire des cellules précurseurs neurales de la neurosphère, via une analyse microscopique.

Essai NPC sur la neurosphère : un essai in vitro pour évaluer la réponse migratoire des cellules précurseurs neurales de la neurosphère

Nous fournissons une description détaillée d’un protocole d’analyse cytométrique en flux d’antigènes de surface et/ou d’antigènes intracellulaires dans les types de cellules neurales. Les aspects critiques de la planification expérimentale, les procédures méthodologiques étape par étape et les principes fondamentaux de la cytométrie en flux sont expliqués afin de permettre aux neurobiologistes d’exploiter cette technologie puissante.

Cytométrie en flux pour les protocoles surface et intracellulaire Antigen analyses des types cellulaires de neurones

Les cellules souches neurales (NNC) se réfèrent à des cellules qui peuvent se renouveler et de se différencier en trois lignées neurales. Ici, nous décrivons un protocole pour déterminer la fréquence NSC dans une population cellulaire donnée en utilisant Neurosphère formation et la différenciation dans des conditions clonales.

Énumération des cellules souches neurales utilisant clonales Assays

Un protocole de dépistage efficace est présenté pour l’identification de petites molécules qui favorisent la différenciation astroglials dans les cellules souches glioblastome (CSS). L’analyse est basée sur un journaliste de différenciation de cellules souches selon laquelle l’expression de la GFP améliorée (eGFP) est entraînée par le promoteur GFAP humain.

Médicament à base de cytométrie en flux système de contrôle pour l’Identification de petites molécules qui favorisent la différenciation cellulaire des cellules souches de glioblastome

Sur le développement neurologique des processus tels que la prolifération, la migration et la croissance des neurites sont souvent perturbées dans les maladies neuropsychiatriques. Ainsi, nous présentons des protocoles afin de rapidement et de façon reproductible évaluer ces processus neurologique dans humain iPSC dérivés PNJ. Ces protocoles permettent également l’évaluation des effets des facteurs de croissance et de la thérapeutique sur le développement de NPC.

Détection rapide des phénotypes de développement neurologique dans des cellules précurseurs neurales humaines (PNJ)

Ici, nous démontrons la performance d’un modèle de blessures médullaires minime dans une souris adulte qui épargne la niche de canal central logement cellules souches neuronales endogènes (CNS). Nous montrons comment le dosage Neurosphère peut être utilisé pour quantifier l’activation et la migration des CNS primitifs et définitifs après une blessure.

Un dosage Neurosphère pour évaluer l’Activation endogène cellules souches neurales dans un modèle murin de minime de la moelle épinière

Nous présentons une méthode de cytométrie de flux pour identifier simultanément différents types de cellules récupérées du cerveau de souris ou de la moelle épinière. Cette méthode pourrait être exploitée pour isoler ou caractériser les populations cellulaires pures dans les maladies neurodégénératives ou pour quantifier l'étendue du ciblage cellulaire sur l'administration in vivo de vecteurs viraux ou de nanoparticules.

Caractérisation cytométrique simultanée des types de cellules multiples récupérées du cerveau de la souris / moelle épinière grâce à différentes méthodes d'homogénéisation

Le protocole présenté décrit une méthode pour un test d’excroissance de neurite et l’évaluation de neurotoxicité des composés de petites molécules.

Un test d’excroissance de neurite et évaluation de neurotoxicité avec des neurones neuronaux progéniteurs humains dérivés des cellules

Nous décrivons la procédure de différenciation in vitro des cellules souches embryonnaires de souris en cellules neuronales en utilisant la méthode de la goutte suspendue. De plus, nous effectuons une analyse phénotypique complète par RT-qPCR, immunofluorescence, séquençage de l’ARN et cytométrie en flux.

Différenciation et caractérisation des progéniteurs neuronaux et des neurones à partir de cellules souches embryonnaires de souris

Cette étude rapporte une nouvelle approche pour mesurer plusieurs paramètres fonctionnels mitochondriaux basés sur la cytométrie en flux et la double coloration avec deux rapporteurs fluorescents ou anticorps pour détecter les changements dans le volume mitochondrial, le potentiel de membrane mitochondriale, le niveau d’espèces réactives de l’oxygène, la composition de la chaîne respiratoire mitochondriale et l’ADN mitochondrial.

Analyse cytométrique en flux de paramètres mitochondriaux multiples dans des cellules souches pluripotentes induites par l’homme et leurs dérivés neuronaux et gliaux

Découvrez la génération et le tri de progéniteurs neuronaux à partir de cellules souches neurales par cytométrie en flux. Cette méthode permet d'isoler des populations cellulaires immatures pour la recherche en neurosciences.

Le test neuroblaste: Un test pour la génération et lenrichissement des cellules souches neuronales à partir de différenciation des cellules souches neurales Progeny Par cytométrie en flux (Vidéo) | JoVE Journal

Le test neuroblaste: Un test pour la génération et l'enrichissement des cellules souches neuronales à partir de différenciation des cellules souches neurales Progeny Par cytométrie en flux

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