Détection de l'aspergillose pulmonaire invasive chez les patients hémopathie maligne en utilisant la technologie de flux latéral-

L’objectif global de cette procédure est de démontrer l’utilisation d’un dispositif à flux latéral pour la détection rapide de l’antigène diagnostique de l’aspergillus dans le sérum humain et les fluides BAL. Pour ce faire, il suffit d’appliquer d’abord l’échantillon de sérum ou de BAL sur l’orifice de libération du dispositif à flux latéral. La deuxième étape consiste à laisser la solution migrer le long de la membrane.

L’étape suivante consiste à déterminer si le test est valide en examinant la ligne de contrôle interne. La dernière étape consiste à interpréter le résultat du test en examinant la ligne de test. En fin de compte, le dispositif à flux latéral est utilisé pour détecter la présence de l’antigène diagnostique aspergillus dans les fluides sériques ou BAL.

L’aspergillus LFD peut être utilisé comme test d’appoint pour le diagnostic de l’aspergillose pulmonaire invasive. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes telles que l’aspergillus, le galacto, l’immunodosage enzymatique Manan, le panf, le fundal, le test bêta-glucane et le test PCR aspergillus, est qu’il s’agit d’un test de diagnostic rapide au point de service nécessitant un minimum d’installations de laboratoire et de formation. Bien que le LFD ait été mis au point pour la détection des espèces d’aspergillus, la technologie du flux latéral peut également être appliquée à la détection d’autres agents pathogènes infectieux tels que le cetosporium, le fusarium et les espèces riser.

En incorporant des anticorps monoclonaux spécifiques à ces organismes, la démonstration visuelle de cette méthode est essentielle. Étant donné que l’interprétation des résultats de la DFL nécessite une familiarisation avec le format du test Pour prélever du sérum à partir d’échantillons de sang non traités, permettre au sang de coaguler à quatre degrés Celsius, le sérum et le lavage broncho-alvéolaire, ou les fluides BAL doivent être stockés sous forme d’aliquotes à moins 20 degrés Celsius avant d’être utilisés, le stockage en tant qu’aliquotes limite le potentiel de dégradation de l’antigène cible par le stockage libre répété des échantillons pendant les tests répétés afin de préparer les échantillons de sérum et de BAL pour les tests, Décongeler les échantillons à température ambiante, puis les conserver sur de la glace, mélanger soigneusement par vortex, puis centrifuger pendant une minute à 14 000 tr/min. Pour les tests de routine d’échantillons humains, diluer le sérum un à un avec un milieu de culture tissulaire alternativement, et dissocier l’antigène cible des complexes immuns sériques. Diluez le sérum un à deux avec du PBS contenant 4 % d’EDTA, chauffez pendant trois minutes dans un bain d’eau bouillante et centrifugez pendant cinq minutes à 14 000 tr/min.

Les fluides BAL humains ne nécessitent pas de prétraitements. Un échantillon BAL a été décongelé par vortex et la centrifugeuse est un échantillon soigné qui peut être appliqué directement sur le dispositif à flux latéral. Pour les tests, les dispositifs à flux latéral ou LFD sont stockés à température ambiante ou à 23 degrés Celsius, où ils sont stables pendant 12 mois.

Pour commencer le test, retirez les dispositifs de leurs poches et placez-les sur une surface plane. À l’aide d’une pointe de pipette stérile, appliquez 100 microlitres de sérum prétraité sur l’orifice de libération du dispositif en quelques secondes. Le fluide doit migrer par capillarité le long de la membrane de cellulose nitreuse dans la fenêtre d’observation.

De la même manière, appliquez 100 microlitres d’un échantillon BAL pur sur l’orifice de libération de l’appareil. Laissez le test fonctionner pendant 15 minutes à température ambiante, après quoi les résultats du test doivent être enregistrés. Le test ne doit pas être laissé plus de 15 minutes avant d’enregistrer les résultats.

Comme cela peut biaiser l’interprétation des résultats, la réaction d’une semaine ne sera pas améliorée par l’allongement de la période d’incubation. Le LFD se compose d’une ligne de contrôle interne indiquée par la lettre C sur le boîtier en plastique et d’une ligne de test indiquée par la lettre T.La ligne de contrôle doit toujours apparaître indépendamment de l’antigène aspergillus dans l’échantillon de sérum ou de BAL. Cela montre que le test a fonctionné correctement si l’antigène aspergillus est présent dans le sérum ou l’échantillon BAL.

La ligne de test apparaîtra également dans les 15 minutes suivant l’application de l’échantillon. Les intensités du test, les réactions de Lyme sont proportionnelles aux concentrations de l’antigène cible dans les échantillons de sérum et de VAL. L’aspect le plus difficile de cette procédure est l’interprétation des résultats des tests.

Les résultats LFD doivent être lus à 15 minutes et le résultat du test comparé à l’exemple représentatif montré ici, Cette figure présente des exemples représentatifs de résultats LFD faibles, positifs, modérément positifs et fortement positifs avec des échantillons BAL et sérum. Toute ligne de test positive dans l’échantillon de sérum, quelle que soit son intensité, indiquerait une aspergillose invasive ou une maladie IPA due à la présence d’un antigène aspergillus circulant dans la circulation sanguine. Des réactions positives au BAL, quelle que soit leur intensité, indiqueraient la germination des spores et le développement d’une hyphyse potentiellement pathogène dans les poumons.

En l’absence d’antigène d’aspergillus, aucune ligne de test n’apparaîtra et le résultat est enregistré comme négatif. Ce tableau montre les résultats des tests LFD utilisant des fluides BAL de patients atteints de leucémie myéloïde aiguë ou d’une ML diagnostiquée selon les critères de diagnostic de l’Organisation européenne pour la recherche et le traitement du cancer et du groupe d’étude de l’Institut national des allergies et des maladies infectieuses. Ce tableau comprend les données cliniques et psychologiques correspondantes, ainsi que les résultats d’un test PCR spécifique à ASPERIA pour chaque patient.

Selon les lignes directrices de 2002 E-O-R-T-C-M-S-G, les patients 12, 13 et 16 ont été diagnostiqués avec une IPA possible sur la base de facteurs de l’hôte et de critères cliniques ou de la positivité de la GM. Selon les lignes directrices révisées de 2008 E-O-R-T-C-M-S-G, les facteurs de l’hôte et la positivité des GM seuls ou les facteurs de l’hôte et les critères cliniques seuls n’indiqueraient pas une éventuelle infection fongique invasive à moins d’être accompagnés de preuves à l’appui provenant de données cliniques et de mycologie respectivement. Le patient six a été diagnostiqué avec une IPA probable selon les directives de 2002 et 2008 en raison de facteurs de l’hôte, de caractéristiques cliniques majeures et mineures et de la positivité de la GM.

Enfin, notez que bien que ni le test LFD ni le test PCR ne soient actuellement inclus dans les directives E-O-R-T-C-M-S-G dans les échantillons BAL des patients six et 12, il existe une forte concordance entre les deux tests et le test commercial gala manin indiquant la présence de l’antigène d’aspergillus et de l’acide nucléique après cette procédure. D’autres méthodes telles que le dosage amino-enzymatique Pella Glactomannan, le panf, le test fongique bêta-glucane ou les tests PCR aspergillus peuvent être effectuées en parallèle pour confirmer la maladie fongique invasive. N’oubliez pas que travailler avec du sang humain, du sérum et des fluides BAL peut être extrêmement dangereux et que les opérateurs de l’appareil doivent toujours être vaccinés contre des maladies telles que l’hépatite B et la tuberculose.