Mesure de la pression ventriculaire gauche à la fin de souris embryonnaires et néonatale

L'objectif général de cette procédure est de mesurer la pression ventriculaire gauche ou LV chez des souriceaux âgés de la fin de la période embryonnaire et de la période néonatale. Tout d'abord, on prépare l'équipement. Une aiguille reliée à un transducteur de pression doit être alignée avec une sonde d'échographie.

Ensuite, une souris est préparée et son VD est imagé par échographie. Puis, l'aiguille est avancée dans la lumière du VD et des mesures de pression pulsatile sont enregistrées. Enfin, les résultats montrent les pressions systoliques chez les souris embryonnaires tardives et néonatales précoces à l'aide de cette cathétérisation échoguidée avec un cathéter rempli de liquide.

L'avantage principal de cette technique par rapport aux méthodes existantes telles que le servo, les mesures sans pression ou les cathéters à l'état solide est que la pression peut être mesurée chez les souriceaux embryonnaires tardifs et néonatals de manière robuste et reproductible. En général, les personnes novices dans cette technique éprouveront des difficultés car il est difficile de maintenir l'orientation de l'embryon dans la cavité embryonnaire, l'embryon ayant tendance à tourner. Après application de la sonde à ultrasons, sélectionnez une sonde et remplissez-la d'eau distillée selon le stade de développement de la souris à étudier.

Placer la sonde dans le support réglable du système d'échographie. Ajuster le support afin d'obtenir une vue longitudinale du ventricule gauche (VG) d'une souris fixée sur la plateforme, l'apex du VG étant orienté vers le bras d'injection. Le système de pression est composé d'un système d'acquisition de données avec amplificateur de pont pour transducteur de pression rempli de liquide et d'un logiciel d'enregistrement en laboratoire.

Un logiciel, une seringue de 20 millilitres remplie de solution saline héparinée à 10 % est utilisée pour rincer le tube. Veillez à ce que des bulles ne restent pas piégées dans le tube ou au-dessus du transducteur. Le tube menant au transducteur est relié par des robinets en té, des raccords filetés et des embouts coniques.

Étalonner le système de transducteur de pression à l'aide d'un manomètre en montant le tube d'aiguille et le boîtier sur le bras d'injection. Remplacer le manomètre par un boîtier permettant de fixer le tube au bras d'injection. Ce boîtier est simplement un corps de seringue modifié de trois millilitres.

Fixez le transducteur de pression dans une bague. Placez-le à une hauteur approximative de la plateforme d'imagerie afin d'éviter les obstructions. Fixez l'aiguille de la taille la plus grande possible au tube de l'aiguille et injectez davantage de solution saline héparinée jusqu'à l'obtention de quelques gouttes.

Sortez à nouveau l'aiguille. Assurez-vous qu'aucune bulle n'est piégée dans le tube ou au-dessus du transducteur. Placez maintenant un tas de gel à ultrasons sur la plateforme d'imagerie.

Faites pivoter l'aiguille du corps de la seringue de trois millilitres de sorte que le bord biseauté de l'aiguille soit orienté vers le haut. Ensuite, à l'aide du support réglable, alignez soigneusement la sonde afin que l'aiguille puisse être avancée directement dans le gel. Sous le centre de la sonde d'imagerie, l'aiguille doit être suffisamment éloignée vers le bas pour ne pas percer la protection de la sonde, tout en étant assez proche pour se trouver dans la profondeur de focalisation de la sonde.

Si nécessaire, l'aiguille peut être courbée manuellement afin qu'elle reste dans le bon plan tout au long de son déplacement. En maintenant l'alignement, rétractez l'aiguille et soulevez la sonde d'imagerie pour placer une souris sur la plateforme d'imagerie. Remplacez l'aiguille avant de continuer avec l'anesthésie de la souris.

Une mère gestante ou une souris néonatale peut être exposée à une inhalation continue de 1,5 % d'isoflurane par un tube inséré dans un embout nasal standard adapté à la petite taille de la tête d'une souris néonatale précoce. Pour les souris néonatales, fixez l'animal sur la plateforme d'imagerie du système d'échographie en position décubitus dorsale, l'apex du VG orienté vers le bras d'injection. Pour les souris néonatales, maintenez la température corporelle à l'aide d'une lampe chauffante externe.

Les souris gestantes nécessitent une préparation plus importante. Appliquez du gel échographique sur les extrémités afin d'assurer un couplage avec le détecteur d'ECG fixé et surveillez la fréquence cardiaque. Insérez le thermomètre rectal pour obtenir un retour d'information.

Contrôle de la température corporelle. Retirer les poils de l'abdomen à l'aide d'une crème dépilatoire et rincer à l'eau. Ouvrir l'abdomen à l'aide de ciseaux de dissection et d'une pince courbe.

Externez un cornet utérin et placez-le sur un tampon de gaze humidifié avec du sérum physiologique tiède. Pendant toute la durée de cette procédure, maintenez humides les embryons ainsi que l'abdomen de leur mère. En ajoutant périodiquement du sérum physiologique tiède, manipulez soigneusement un embryon afin de l'orienter correctement pour obtenir une vue parasternale long-axe du VG. À l'aide de la sonde échographique, une compresse roulée peut être utilisée pour aider à maintenir l'orientation de l'embryon.

Procédez au mesurage de la pression dans tous les embryons d'une corne utérine avant de répéter le processus avec l'autre corne utérine. Commencez par appliquer un gel à échographie Degas préalablement réchauffé sur un embryon ou un souriceau néonatal. Abaissez la sonde d'imagerie et ajustez l'angle de la plateforme d'imagerie afin d'obtenir une vue optimale selon l'axe long du ventricule gauche en position parasternale.

Ne pas régler l'angle de la sonde, car l'alignement de l'aiguille sera perdu. En surveillant l'image du VG sur l'écran de l'échographe, avancer lentement l'aiguille jusqu'à ce qu'elle soit proche du bas de la sonde. Ajuster la position de l'aiguille et de la sonde si nécessaire pour corriger les décalages d'alignement.

L'image provenant de la souris néonatale montre une orientation idéale pour le VD, difficile à obtenir avec un embryon. Commencez à enregistrer les données de pression. Rincez doucement l'aiguille avec du sérum physiologique et fermez le robinet trois voies vers la seringue de 20 millilitres et vers l'atmosphère.

Observez la pression. Augmentez le programme pour vous assurer qu'une pression minimale est appliquée à l'aiguille. Avancez lentement l'aiguille jusqu'à ce qu'elle soit visible au bord de l'image échographique, mais pas encore dans le VG.

S'il est nécessaire, ajustez la position de l'aiguille pour pénétrer dans le VG au niveau de l'apex. Ajustez la position de la sonde si nécessaire afin de maintenir une image claire de l'aiguille. Avancez l'aiguille dans la lumière du VG tout en enregistrant les données de pression et en surveillant la position de l'aiguille sur l'image échographique.

Le début des enregistrements pulsés provenant du transducteur de pression confirme la position à l'intérieur de la lumière du VG. Si l'aiguille semble se trouver dans la lumière du VG, mais que les enregistrements de pression ne sont pas pulsés, rincez l'aiguille en appuyant légèrement sur le piston de la seringue jusqu'à ce qu'une augmentation de pression soit détectée. Le rinçage avec le liquide doit être minimal afin d'éviter de modifier le comportement du cœur pendant les mesures de pression.

Si les mesures de pression ne présentent toujours pas de pulsations, l'aiguille peut se trouver au-dessus ou au-dessous du plan correct et ne pas être insérée dans la lumière du VG. Retirez l'aiguille, rincez-la avec du sérum physiologique et réinsérez-la. Une fois encore.

Si des lectures pulsées ne sont toujours pas obtenues, passez à la souris suivante et utilisez toujours une aiguille neuve pour chaque nouvelle souris. L'ensemble de la procédure doit être effectué aussi rapidement que possible afin de minimiser la détresse des embryons et des nouveau-nés pendant la durée de l'expérience. La pression ventriculaire de souris C 57 Black six J a été mesurée chez une souris E 18.

Comme prévu, la pression était proche de zéro lorsque l'aiguille se trouvait à l'extérieur du VG et présentait une lecture pulsatile lorsqu'elle était à l'intérieur du VG pour une souris âgée de P 14 jours. La lecture de pression était amortie car l'amplitude de la pression était plus élevée et la fréquence cardiaque plus rapide. Les fréquences cardiaques ont été déterminées à partir de la fréquence des mesures de pression pulsatile pour différents âges compris entre E 18 et P 14.

Les fréquences cardiaques ont été mesurées et les pressions systoliques du VG ont été calculées. Lors de cette procédure, il est important de penser à humidifier périodiquement les embryons et à vérifier l'état de la mère. Cette technique ouvre la voie aux chercheurs en physiologie cardiovasculaire pour explorer les variations de la pression artérielle chez les souriceaux en développement.