Name: Une technique simplifiée pour In situ de la cornée et éviscération du tissu rétinien de globe oculaire humain (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 58 s
Description: Apprenez une technique simplifiée d'excision cornéenne et d'éviscération rétinienne sur globe oculaire humain. Cette méthode préserve la qualité des tissus pour transplantation et recherche.

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Ce travail a été soutenu en partie par des subventions de la Région de la Vénétie (Ricerca Sanitaria Finalizzata n.292/2008 et Ricerca Sanitaria Finalizzata 2009). Les auteurs remercient le Dr C. Griffoni pour les données 2009/2010 de synthèse sur l&#39;utilisation des globes oculaires humains.

<ol><li>Fay, A. Diseases of the visual system. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFay%2C+A+%22Cecil+Medicine%22">Cecil Medicine</a>. Goldman, L., Ausiello, D. , 23rd ed, Saunders Elsevier. Philadelphia, Pa. (2007).</li>
<li>Parekh, M., Megaw, R., Ray-Chaudhuri, A., Ahmad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patents+in+Limbal+Stem+Cell+Biology%5BTitle%5D)+AND+%22Recent+patents+on+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Patents in Limbal Stem Cell Biology.</a> Recent patents on Regenerative Medicine. 1, 207-212 (2011).</li>
<li>Pharm, U. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Eye%3A+The+physiology+of+human+perception%5BTitle%5D)+AND+%22Britannica+educational+publishing%22%5BJournal%5D)">The Eye: The physiology of human perception.</a> Britannica educational publishing. 36, 19-27 (2011).</li>
<li>Lang, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLang%2C+G+%22Ophthalmology%3A+A+pocket+textbook+atlas%22">Ophthalmology: A pocket textbook atlas</a>. , 2nd Edition, 115-117 Forthcoming.</li>
<li>Liesbeth, P. els <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+Culture%3A+The+method+of+choice+for+preservation+of+human+donor+corneas%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Organ Culture: The method of choice for preservation of human donor corneas.</a> Br. J. Ophthalmol. 81, 523-525 (1997).</li>
<li>Meyer, J. S., Howden, S. E., Wallace, K. A., Verhoeven, A. D., Wright, L. S., Capowski, E. E., Pinilla, I., Martin, J. M., Tian, S., Stewart, R., Pattnaik, B., Thomson, J., Gamm, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optic+vesicle-like+structures+derived+from+human+pluripotent+stem+cells+facilitate+a+customized+approach+to+retinal+disease+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Optic vesicle-like structures derived from human pluripotent stem cells facilitate a customized approach to retinal disease treatment.</a> Stem Cells. , (2011).</li>
<li>Trifunovic, D., Karali, M., Camposampiero, D., Ponzin, D., Banfi, S., Marigo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-resolution+RNA+expression+atlas+of+retinitis+pigmentosa+genes+in+human+and+mouse+retinas%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">A high-resolution RNA expression atlas of retinitis pigmentosa genes in human and mouse retinas.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 2330-2336 (2008).</li>
<li>Mora, P., Montanini, L., Ferrari, S. Retina. 30, 1555(2010).</li>
<li>Claybon, A., Bishop, A. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+of+a+Mouse+Eye+for+a+Whole+Mount+of+the+Retinal+Pigment+Epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium.</a> J. Vis. Exp. (48), e2563(2011).</li>
<li>Skeie, J. M., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evisceration+of+Mouse+Vitreous+and+Retina+for+Proteomic+Analyses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses.</a> J. Vis. Exp. (50), e2795(2011).</li>
</ol>

Les auteurs n&#39;ont aucun conflit d&#39;intérêts.

Les deux, l&#39;excision correcte et la bonne conservation des tissus de la cornée et la rétine sont essentielles comme des défauts mineurs tels que des lésions endothéliales ou nombre élevé de plis de Descemet peut conduire à l&#39;échec de greffe de la cornée tandis que les modifications de température ou une mauvaise manipulation peut compromettre l&#39;intégrité des tissus rétiniens. Le but de cet article est de montrer comment les tissus de la cornée et la rétine peut être isolé de manière optimale, sans induire de...

Matériaux pour l&#39;excision de la cornée et la rétine. <table border="1"><tbody><tr><td> Description du produit </td><td> Dimensions </td><td> Société / Institut </td></tr><tr><td> Surveillé scalpel jetable </td><td> Dimension de la lame 15 </td><td> Swann-Morton </td></tr><tr><td> Pansements stériles </td><td> 5 cm X 5 cm, 8 couches, 5 pcs </td><td> Artsana </td></tr><tr><td> Stérile serviette jetable médicale </td><td> 35 X 50 cm </td><td> U.Jet </td></tr><tr><td> Des ciseaux stériles </td><td> Lames 24 mm / longueur globale. 95 mm courbée, émoussée </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> Pinces stériles </td><td> En acier inoxydable -100 mm 11 x 2 gouverné par 0,70 mm dents </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> Griffe cornée - dispositif médical à usage unique </td><td></td><td> NIIOS (Hippocratech) </td></tr&gt; <tr><td></td><td> Préparations </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> 100 ml de PBS [10x] dans 900 ml d / w (eau distillée) </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Na-thiosulfate </td><td> 1 g de Na-thiosulfate dans 1 litre de PBS [1x] </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> I-PVP </td><td> 5 g I-PVP dans 1 litre d / w </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr></tbody></table> Tableau 2. Le tableau suivant décrit les matériaux utilisés pour l&#39;excision de la cornée et la rétine et la société qu&#39;ils sont reçus. Matériaux pour support de stockage (2000 ml). <table border="1"><tbody><tr><td> Composants </td><td> Fournisseur </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Concentration </td><td> Quantité </td></tr><tr><td> MEM(1X) liquide </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1900 ml </td></tr><tr><td> Pyruvate de sodium </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1 mM (10ml / l) </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> L-glutamine </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2 mM (10ml / l) </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> Antibiotiques / antifongique </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5955-20ML </td><td> 10ml / l </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> Veau nouveau-né du sérum </td><td> Invitrogen </td><td> 26010-74 </td><td> 2% (de 20 ml / l) </td><td> 40 ml </td></tr></tbody></table> Tableau 3. Matériaux pour support de stockage. Préparation de support de stockage Ajouter tous les ingrédients en utilisant des concentrations spécifiques indiquées ci-dessus dans un bocal et bien mélanger. Les filtreren utilisant la taille des pores de 0,2 micron (Millipore, Milan, Italie) avec l&#39;aide d&#39;une pompe péristaltique. Préserver le milieu dans des bouteilles à la température ambiante. Matériaux pour le milieu de transport (2000 ml). <table border="1"><tbody><tr><td> Composants </td><td> Fournisseur </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Concentration </td><td> Quantité </td></tr><tr><td> MEM (1X) liquide </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1800 ml </td></tr><tr><td> Pyruvate de sodium </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1mM (10 ml / l) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> L-glutamine </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2 mM (10 ml / l) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> Veau nouveau-né du sérum </td><td> Invitrogen </td><td> 26010-74 </td><td> 2% (de 20 ml / l) </td&gt; <td> 40 ml </td></tr><tr><td> Dextran T500 </td><td> Pharmacosmos </td><td> 551005004007 </td><td> 6% (60 g / litre) </td><td> 120 g / l </td></tr></tbody></table> Tableau 4. Matériel pour le milieu de transport. Préparation de milieu de transport Ajouter Dextran 6% dans ~ 1,5 litre de MEM et laisser toute la nuit. Ajouter le reste des ingrédients dans les médias et filtrer à l&#39;aide du filtre de 0,2 micron (Millipore, Milan, Italie) en utilisant une pompe à vide. Préserver le milieu dans des bouteilles à la température ambiante.

une technique simplifiée pour<em&gt; in situ</emexcision&gt; de la cornée et éviscération du tissu rétinien de globe oculaire humain

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Énucléation est le processus de récupération du globe oculaire à partir d&#39;un donneur décédé en laissant le reste du globe non perturbé. Excision se réfère à la récupération des tissus oculaires, en particulier la cornée, en le coupant distinct du globe oculaire. L&#39;éviscération est le processus d&#39;élimination des organes internes visés ici que la rétine. Le globe oculaire est constitué de la cornée, la sclère, le corps vitré, la lentille, l&#39;iris, la rétine, la choroïde, etc muscles (figure Suppl. 1). Quand un patient souffre de lésions de la cornée, la cornée doit être retiré et une saine doit être transplanté par des cabinets de kératoplastique. Troubles génétiques ou des malformations dans la fonction rétinienne peut compromettre la vision. Globes oculaires de l&#39;homme peut être utilisé pour diverses procédures chirurgicales telles que la banque des yeux, la transplantation de la cornée humaine ou de la sclérotique et de la recherche sur les tissus oculaires. Cependant, il ya peu d&#39;informations disponibles sur l&#39;excision de la cornée et la rétine humaine, probablement due à la ll&#39;accessibilité imited aux tissus humains. La plupart des études décrivant les procédures similaires sont effectuées sur des modèles animaux. Les chercheurs comptent sur la disponibilité des tissus oculaires bien disséquées et très bien conservée afin d&#39;étendre les connaissances sur le développement œil humain, l&#39;homéostasie et de la fonction. Comme nous recevons grande quantité de globes oculaires dont environ 40% (tableau 1) d&#39;entre eux sont utilisés à des fins de recherche, nous sommes en mesure d&#39;effectuer énorme quantité d&#39;expériences sur ces tissus, la définition des techniques à l&#39;accise et de les préserver régulièrement. La cornée est un tissu avasculaire qui permet la transmission de la lumière sur la rétine et à cette fin devrait toujours maintenir un bon degré de transparence. Dans la cornée, la région du limbe, qui est un réservoir de cellules souches, aide à la reconstruction des cellules épithéliales et limite la prolifération de la conjonctive maintien de la transparence de la cornée et la clarté. La taille et la e<html> ickness de la cornée sont essentiels pour une vision claire, des changements dans l&#39;un d&#39;eux pourrait conduire à distraire, vision floue. La cornée est composée de 5 couches; a) l&#39;épithélium, b) la couche de Bowman, c) stroma, d) la membrane de Descemet et e) l&#39;endothélium. Toutes les couches doivent fonctionner correctement pour assurer une vision claire 4,5,6. La choroïde est la tunique intermédiaire entre la sclérotique et la rétine, délimitée à l&#39;intérieur par la membrane de Bruch et est responsable de la circulation sanguine dans l&#39;œil. La choroïde contribue également à réguler la température la nourriture et des fournitures pour les couches externes de la rétine 5,6. La rétine est une couche de tissu nerveux qui couvre le dos du globe oculaire (Figure Suppl. 1) et se compose de deux parties: une partie photoréceptrice et une partie non-réceptifs. La rétine permet de recevoir la lumière de la cornée et le cristallin et le convertit en énergie chimique éventuellement transmis au cerveau avec l&#39;aide du nerf optique 5,6. ove_content &quot;&gt; Le but de ce document est de fournir un protocole pour la dissection des tissus de la cornée et la rétine de globes oculaires de l&#39;homme. Éviter la contamination croisée avec des tissus adjacents et en préservant l&#39;intégrité ARN est d&#39;une importance fondamentale que ces tissus sont indispensables à des fins de recherche visant à (i) la caractérisation du transcriptome des tissus oculaires, (ii) l&#39;isolement de cellules souches pour des projets de médecine régénérative, et (iii) l&#39;évaluation des différences histologiques entre les tissus normaux de / touchée sujets. Dans cet article, nous décrivons la technique que nous utilisons actuellement pour éliminer la cornée, la choroïde et la rétine des tissus à partir d&#39;un globe oculaire. Ici nous fournissons un protocole détaillé pour la dissection du globe oculaire humaine et l&#39;excision des tissus de la cornée et la rétine. La vidéo d&#39;accompagnement aidera les chercheurs à en apprendre une technique appropriée pour la récupération de précieux tissus humains, qui sont difficiles à trouver régulièrement.

Le document décrit une technique simplifiée pour la cornée d&#39;accise et d&#39;éviscérer les tissus rétiniens du globe oculaire de l&#39;homme donneurs cadavériques. La technique décrite ici aidera à accises tissus de bonne qualité pour être utilisés aux fins de transplantation, la chirurgie ou de recherche sans endommager les autres tissus du globe oculaire.

Une technique simplifiée pour<em&gt; In situ</emExcision&gt; de la cornée et éviscération du tissu rétinien de globe oculaire humain

L'énucléation est le processus de prélèvement du globe oculaire d'un donneur cadavérique tout en laissant le reste du globe intact. L'excision fait référence à l'...

Aujourd'hui, nous démontrons une technique simplifiée permettant de prélever le tissu cornéen et le tissu rétinien d'un globe oculaire humain provenant de donneurs cadavériques. La technique décrite ici aidera à prélever un tissu de bonne qualité destiné à la transplantation, à des fins chirurgicales ou à la recherche scientifique, sans endommager les autres tissus du globe oculaire. Forts de 18 années d'expertise et de milliers de cornées transplantées chaque année, nous maintenons un haut niveau de qualité dans notre travail en développant continuellement de nouvelles techniques et en améliorant nos compétences au quotidien.Pour y parvenir, nous exerçons d'abord sur la cornée, suivie des yeux rétiniens. La cornée est un tissu avasculaire qui permet la transmission de la lumière vers la rétine et, à cet effet, doit toujours conserver un bon degré de transparence. La cornée comprend cinq couches : l'épithélium, la membrane de Bowman, le stroma, la membrane de Descemet et l'endothélium.Si la cornée est endommagée, elle peut être remplacée à l’aide d’une cornée donneuse appropriée. L’épichoroïde est la tunique intermédiaire située entre la sclérotique et la rétine, délimitée intérieu

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La technique de dissection illustre énucléation de l'oeil de la souris pour la fixation des tissus pour réaliser le phénotypage à haut débit écrans.

L&#39;énucléation des yeux de souris à distance pour le phénotypage à haut débit

Cette vidéo présente une méthode pour induire une inflammation de la surface oculaire et un dysfonctionnement de la glande de Meibomius dans un modèle murin. La stimulation du système immunitaire de la souris à l'aide d'un immunogène et la restimulation ultérieure avec le même immunogène favorisent l'inflammation de la surface oculaire, ce qui provoque l'obstruction de la sécrétion de la glande de Meibomius par les aggNET produites par les neutrophiles et conduit à la sécheresse oculaire.

Procédé d’induction d’une inflammation de la surface oculaire dans un modèle murin

La suppression des yeux, aussi appelé l'énucléation, fournit une stratégie utile pour étudier les aspects de visuel, multi-modal, et la plasticité du développement le long du système visuel des mammifères, car il induit irréversible partielle (monoculaire) ou complète (binoculaire) la perte de vision. Nous décrivons ici une approche hautement reproductible et simple à effectuer dans l'énucléation in vivo.

Une méthode hautement reproductible et facile à Effectuer In Vivo Oculaire énucléation chez la souris après ouverture des yeux

L’objectif de ce protocole est de mettre en évidence une technique efficace pour isoler le noyau et le cortex vitréens entiers et intacts des yeux porcins énucléés post-mortem.

Whole Vitré Dissection d&#39;analyse Vitreodynamic

Cette étude vise à développer un nouveau modèle de culture rétinienne organotypique humaine (HORC) qui empêche de compromettre l’intégrité rétinienne lors de la manipulation des explants. Ceci est réalisé en cultivant la rétine avec le vitré sous-jacent et le pigment rétinien sous-jacent épithélium-choroïde (RPE-choroïde) et la sclérotique.

Caractérisation d’une nouvelle technique de culture rétinienne organotypique humaine

La modification de l’équipement existant de réseau multiélectrodes ou de pince patch rend l’électrorétinogramme ex vivo plus largement accessible. Des méthodes améliorées pour enregistrer et maintenir les réponses lumineuses ex vivo facilitent l’étude du photorécepteur et de la fonction des cellules ON-bipolaires dans la rétine saine, des modèles animaux de maladies oculaires et des rétines de donneurs humains.

Optimisation de la configuration et des conditions de l’électrorétinogramme ex vivo pour étudier la fonction de la rétine dans les petits et grands yeux

Ce protocole présente et décrit les étapes pour l’isolement, la dissection, la culture et la coloration des explants rétiniens obtenus à partir d’une souris adulte. Cette méthode est bénéfique comme modèle ex vivo pour étudier différentes maladies neurovasculaires rétiniennes telles que la rétinopathie diabétique.

Explant rétinien de la rétine de souris adulte comme modèle ex vivo pour l’étude des maladies neurovasculaires rétiniennes

Cet article présente un protocole pour la microdissection oculaire chez les rongeurs. Le processus implique l’énucléation du globe oculaire avec la membrane nictitante (c’est-à-dire la troisième paupière). Ceci est ensuite suivi par la séparation des cupules postérieures et antérieures.

Microdissection de l’œil de rongeur

Nous décrivons une méthode pour séparer efficacement l’épithélium pigmentaire rétinien (EPR) de la rétine dans les yeux humains et générer des supports plats RPE / choroïdes entiers pour les analyses histologiques et morphométriques de l’EPR.

Génération efficace et cohérente d’épithélium/platures choroïdes pigmentaires rétiniens à partir d’yeux humains pour l’analyse histologique

Ici, nous fournissons une méthodologie détaillée pour isoler la rétine de l’œil de la souris pour une expérimentation ex vivo étendue. Ce protocole vise à rendre cette approche techniquement exigeante accessible aux chercheurs qui souhaitent tirer parti des avenues de recherche offertes par le maintien de la glie rétinienne in situ dans les tissus vivants.

Un modèle d’explant ex vivo pour étudier les interactions gliales dans la rétine de la souris

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