Name: Préparation des tranches de parasagittales denquête sur les dorso-ventrale de lOrganisation des rongeurs cortex entorhinal médian (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Découvrez la préparation de tranches parasagittales du cortex entorhinal médian chez le rongeur pour étudier l'organisation dorso-ventrale. Cette méthode permet d'analyser les propriétés électrophysiologiques des neurones stellaires en patch clamp.

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<ol><li>O'Donnell, C., Nolan, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+of+synaptic+responses%3A+an+organizing+principle+for+optimization+of+neural+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Tuning of synaptic responses: an organizing principle for optimization of neural circuits.</a> Trends Neurosci. 34, 51-60 (2011).</li>
<li>Garden, D. L. F., Dodson, P. D., O'Donnell, C., White, M. D., Nolan, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+of+synaptic+integration+in+the+medial+entorhinal+cortex+to+the+organization+of+grid+cell+firing+fields%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Tuning of synaptic integration in the medial entorhinal cortex to the organization of grid cell firing fields.</a> Neuron. 60, 875-889 (2008).</li>
<li>Kuba, H., Yamada, R., Fukui, I., Ohmori, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tonotopic+specialization+of+auditory+coincidence+detection+in+nucleus+laminaris+of+the+chick%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Tonotopic specialization of auditory coincidence detection in nucleus laminaris of the chick.</a> Journal of Neuroscience. 25, 1924-1934 (2005).</li>
<li>Hafting, T., Fyhn, M., Molden, S., Moser, M. -B., Moser, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microstructure+of+a+spatial+map+in+the+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Microstructure of a spatial map in the entorhinal cortex.</a> Nature. 436, 801-806 (2005).</li>
<li>Sargolini, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conjunctive+representation+of+position%2C+direction%2C+and+velocity+in+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Conjunctive representation of position, direction, and velocity in entorhinal cortex.</a> Science. 312, 758-762 (2006).</li>
<li>Fyhn, M., Hafting, T., Witter, M. P., Moser, E. I., Moser, M. -B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Grid+cells+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Grid cells in mice.</a> Hippocampus. 18, 1230-1238 (2008).</li>
<li>Giocomo, L. M., Zilli, E. A., Fransén, E., Hasselmo, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+frequency+of+subthreshold+oscillations+scales+with+entorhinal+grid+cell+field+spacing%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Temporal frequency of subthreshold oscillations scales with entorhinal grid cell field spacing.</a> Science. 315, 1719-1722 (2007).</li>
<li>Giocomo, L. M., Hasselmo, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+constants+of+h+current+in+layer+II+stellate+cells+differ+along+the+dorsal+to+ventral+axis+of+medial+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Time constants of h current in layer II stellate cells differ along the dorsal to ventral axis of medial entorhinal cortex.</a> Journal of Neuroscience. 28, 9414-9425 (2008).</li>
<li>Burgalossi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microcircuits+of+functionally+identified+neurons+in+the+rat+medial+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Microcircuits of functionally identified neurons in the rat medial entorhinal cortex.</a> Neuron. 70, 773-786 (2011).</li>
<li>Dodson, P. D., Pastoll, H., Nolan, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dorsal-ventral+organization+of+theta-like+activity+intrinsic+to+entorhinal+stellate+neurons+is+mediated+by+differences+in+stochastic+current+fluctuations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol.+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Dorsal-ventral organization of theta-like activity intrinsic to entorhinal stellate neurons is mediated by differences in stochastic current fluctuations.</a> J. Physiol. (Lond). 589, 2993-3008 (2011).</li>
<li>Nolan, M., Dudman, J., Dodson, P., Santoro, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HCN1+channels+control+resting+and+active+integrative+properties+of+stellate+cells+from+layer+II+of+the+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">HCN1 channels control resting and active integrative properties of stellate cells from layer II of the entorhinal cortex.</a> Journal of Neuroscience. 27, (2007).</li>
<li>Boehlen, A., Heinemann, U., Erchova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+range+of+intrinsic+frequencies+represented+by+medial+entorhinal+cortex+stellate+cells+extends+with+age%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The range of intrinsic frequencies represented by medial entorhinal cortex stellate cells extends with age.</a> Journal of Neuroscience. 30, 4585-4589 (2010).</li>
<li>Klink, R., Alonso, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+characteristics+of+layer+II+projection+neurons+in+the+rat+medial+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Morphological characteristics of layer II projection neurons in the rat medial entorhinal cortex.</a> Hippocampus. 7, 571-583 (1997).</li>
<li>van Groen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entorhinal+cortex+of+the+mouse%3A+cytoarchitectonical+organization%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Entorhinal cortex of the mouse: cytoarchitectonical organization.</a> Hippocampus. 11, 397-407 (2001).</li>
<li>Dolorfo, C. L., Amaral, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entorhinal+cortex+of+the+rat%3A+organization+of+intrinsic+connections%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Entorhinal cortex of the rat: organization of intrinsic connections.</a> The Journal of Comparative Neurology. 398, 49-82 (1998).</li>
</ol>

Rien de divulguer.

Pour faciliter les enquêtes sur les propriétés du circuit de MEC qui suivent une organisation dorso-ventrale, nous avons décrit ici en détail une procédure pour la production d&#39;une préparation de tranches parasagittale qui préserve la mesure dorso-ventrale de la MEC. Les étapes critiques Retrait du cerveau de l&#39;animal. Prenez un soin particulier pour éviter d&#39;exercer des pressions sur le cerveau. Ceci est plus important que le retrait ra...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Coupe ACSF (mM) </td><td> Norme ACSF (mM) </td><td> Solution interne (mM) </td><td> CASNumber </td><td> Numéro de catalogue fournisseur </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 86 </td><td> 124 </td><td></td><td> 7647-14-5 </td><td> Sigma S9888 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 1.2 </td><td> 1.2 </td><td></td><td> 13472-35-0 </td><td> Sigma 71505 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 2.5 </td><td> 2.5 </td><td> 10 </td><td> 7447-40-7 </td><td> Sigma P3911 </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> 25 </td><td> 25 </td><td></td><td> 144-55-8 </td><td> Fischer S/4240 </td></tr><tr><td> Glucose </td><td> 25 </td><td> 20 </td><td></td><td> 50-99-7 </td><td> Sigma G5767 </td></tr><tr><td> Saccharose </td><td> 75 </td><td></td><td></td><td> 57-50-1 </td><td> Sigma S5016 </td></tr><tr><td> CalifornieCl 2 </td><td> 0.5 </td><td> 2 </td><td></td><td> 10043-52-4 </td><td> VWR 190464K </td></tr><tr><td> MgCl 2 </td><td> 7 </td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 7786-30-3 </td><td> Sigma 63020 </td></tr><tr><td> K gluconate </td><td></td><td></td><td> 130 </td><td> 299-27-4 </td><td> Sigma G4500 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td></td><td></td><td> 10 </td><td> 7365-45-9 </td><td> Sigma H3375 </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 0.1 </td><td> 67-42-5 </td><td> Sigma E4378 </td></tr><tr><td> Na 2 ATP </td><td></td><td></td><td> 2 </td><td> 34369-07-8 </td><td> Sigma A7699 </td></tr><tr><td> Na 2 GTP </td><td></td><td></td><td> 0.3 </td><td> 36051-31-7 </td><td> Sigma G8877 </td></tr><tr><td> NaPhospho-Créatine </td><td></td><td></td><td> 10 </td><td> 19333-65-4 </td><td> Sigma P7936 </td></tr><tr><td> Biocytine (facultatif) </td><td></td><td></td><td> 2.7 </td><td> 576-19-2 </td><td&gt; Sigma B4261 </td></tr></tbody></table> Tableau 1. Coupe ACSF, standard ACSF et K-gluconate recettes solution interne.

préparation des tranches de parasagittales d&#39;enquête sur les dorso-ventrale de l&#39;organisation des rongeurs cortex entorhinal médian

Preparation of Parasagittal Slices for the Investigation of Dorsal-ventral Organization of the Rodent Medial Entorhinal Cortex

Calcul dans le cerveau repose sur les neurones en répondant correctement à leurs entrées synaptiques. Les neurones se différencient par leur complément et la distribution des canaux ioniques membranaires qui déterminent la façon dont ils réagissent aux entrées synaptiques. Cependant, la relation entre ces propriétés cellulaires et la fonction neuronale à se comporter animaux n&#39;est pas bien comprise. Une approche de ce problème est d&#39;étudier la topographie des circuits neuronaux organisés dans lequel la position des cartes de neurones individuels sur les informations qu&#39;ils codent ou calculs qu&#39;ils effectuent 1. Des expériences utilisant cette approche suggèrent des principes pour le réglage des réponses synaptiques qui sous-tendent codage de l&#39;information dans les circuits sensoriels et cognitifs 2,3. L&#39;organisation topographique des représentations spatiales le long de l&#39;axe dorso-ventral de l&#39;médial cortex entorhinal (MEC) fournit une occasion d&#39;établir des relations entre les mécanismes cellulaires et des calculs important pour la cognition spatiale. Les neurones de la couche II de la MEC rongeurs coder emplacement à l&#39;aide en forme de grille de cuisson champs 4-6. Pour les neurones à des positions trouvées dans la MEC dorsale de la distance entre les champs de tir individuels qui forment une grille est de l&#39;ordre de 30 cm, tandis que pour les neurones à des positions progressivement plus ventrales cette distance augmente à plus de 1 m. Plusieurs études ont révélé des propriétés cellulaires de neurones dans la couche II de la MEC qui, comme l&#39;espacement entre les champs de la grille de cuisson, diffèrent également en fonction de leur position de dorso-ventral, ce qui suggère que ces propriétés cellulaires sont importantes pour le calcul spatiale 2,7-10. Nous décrivons ici les procédures de préparation et d&#39;enregistrement électrophysiologique de tranches de cerveau qui maintiennent la mesure dorso-ventral de l&#39;enquête de MEC permettant de l&#39;organisation topographique des propriétés biophysiques et anatomique des neurones de MEC. La position dorso-ventral de n identifiéeurons par rapport à des repères anatomiques est difficile d&#39;établir avec précision les protocoles qui utilisent des tranches horizontales de MEC 7,8,11,12, car il est difficile d&#39;établir des points de référence pour l&#39;exacte dorso-ventral emplacement de la tranche. Les procédures que nous décrivons permettent une mesure précise et cohérente de la localisation des cellules enregistrées le long de l&#39;axe dorso-ventral de la MEC ainsi que la visualisation des gradients moléculaires 2,10. Les procédures ont été élaborées pour une utilisation avec des souris adultes (&gt; 28 jours) et ont été employées avec succès sur des souris jusqu&#39;à 1,5 ans. Avec les ajustements qu&#39;ils pourraient être utilisés avec de jeunes souris ou d&#39;autres espèces de rongeurs. Un système normalisé de préparation et de mesure aidera investigation systématique des propriétés cellulaires et microcircuit de cette région.

Nous décrivons les procédures de préparation et d&#39;enregistrement électrophysiologique de tranches de cerveau qui maintiennent l&#39;axe dorso-ventral de l&#39;médial cortex entorhinal (MEC). Parce que le codage neuronal de l&#39;emplacement suit une organisation dorso-ventrale au sein de la MEC, ces procédures de faciliter les enquêtes des mécanismes cellulaires importants pour la navigation et de la mémoire.

Préparation des tranches de parasagittales d&#39;enquête sur les dorso-ventrale de l&#39;Organisation des rongeurs cortex entorhinal médian

Le calcul cérébral repose sur la capacité des neurones à répondre de manière appropriée à leurs entrées synaptiques. Les neurones diffèrent par leur complément et la distribution de...

L'objectif général de l'expérience suivante est d'examiner l'organisation topographique des propriétés synaptiques et intégratives des neurones dans le cortex entorhinal médial RH. Cela est réalisé en préparant des tranches de cortex entorhinal médial RH orientées dans un plan dorso-ventral. Dans un deuxième temps, des enregistrements en configuration patch clamp sont effectués sur des neurones du cortex entorhinal RH afin d'étudier leurs propriétés synaptiques et intégratives.Ensuite, l'emplacement du neurone enregistré est déterminé afin d'évaluer l'organisation dorso-ventrale des propriétés mesurées par électrophysiologie. Les résultats obtenus montrent l'organisation topographique des propriétés intrinsèques des cellules étoilées de la couche II, fondée sur les mesures de leur résistance d'entrée, de la constante de temps membranaire et du seuil du potentiel d'action. Ce protocole sera démontré par Hugh Pastel, un étudiant diplômé de mon laboratoire. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, telles que les tranches cérébrales orientées horizontalement, est que la position du neurone enregistré le long de l'axe dorso-ventral du cortex entorhin

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La vidéo montre la préparation de tranches de cerveau colliculo-thalamocorticale à partir de cerveaux de bébés souris. Un cerveau isolé est aligné sur une lame marquée et coupé à un angle pour aligner le mésencéphale auditif et le cerveau antérieur dans le même plan. Le cerveau est ensuite tranché à l’aide d’un vibratome, et les tranches contenant les principales structures auditives du mésencéphale et du cerveau antérieur sont transférées dans une chambre de stockage pour la préservation.

Préparation de tranches colliculo-thalamocorticales à partir du cerveau d’un bébé souris

Cette vidéo présente un protocole détaillé pour la préparation de coupes horizontales de cerveau d’hippocampe à partir de souris, en se concentrant sur la préservation de l’intégrité des voies des fibres de l’hippocampe. Le processus consiste à couper et à fixer soigneusement le cerveau, à utiliser un vibratome pour le tranchage et à maintenir des conditions tissulaires optimales avec un liquide carbogéné, ce qui permet d’obtenir des tranches de cerveau d’hippocampe prêtes pour d’autres...

Obtention de tranches horizontales de cerveau d’hippocampe de souris

La vidéo montre la préparation de coupes du thalamus médian et du cortex cingulaire antérieur (MT-ACC) à partir de cerveaux de souris. Le cerveau d'une souris est disséqué, des coupes sont faites pour exposer la voie MT-ACC et des coupes sont générées à l'aide d'un vibratome. Les coupes MT-ACC sont ensuite maintenues dans du liquide céphalo-rachidien artificiel oxygéné.

Génération de tranches du cortex cingulaire antérieur du thalamus médian à partir de cerveaux de souris

La vidéo décrit l’enregistrement électrophysiologique des synapses de rétinogéniculate et de corticogéniculate dans des tranches de cerveau de souris. Les tranches contenant le noyau géniculé latéral dorsal (dLGN) sont placées dans une chambre d’enregistrement. Une pipette stimulante est positionnée soit sur le tractus optique pour stimuler les cellules ganglionnaires rétiniennes (CGR) et étudier les synapses rétinogéniculées, soit sur le noyau réticulaire thalami pour stimuler les neurones...

Une étude électrophysiologique des synapses de rétinogéniculate et de corticogéniculate dans des tranches de cerveau de souris

Cette vidéo démontre l’induction d’événements ictaux dans des coupes corticales coronales d’une souris transgénique exprimant des canaux cationiques activés par la lumière dans les neurones pyramidaux excitateurs corticaux. La tranche est placée dans une chambre d’enregistrement et une électrode d’enregistrement est insérée dans la couche corticale superficielle. Lors de la perfusion avec un médicament provoquant des crises d’épilepsie qui bloque les canaux potassiques, les neurones deviennent...

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Nous avons développé une préparation de tranche horizontale de la rétine adulte de mammifère avec le plan de la coupe parallèle à la surface de la rétine. champs dendritiques des neurones rétiniens orientés nonradially ne sont pas tronquées, permettant l'étude du traitement du signal avec des techniques de patch-clamp et d'imagerie.

Préparation des horizontales Tranches de souris adultes Retina pour les études électrophysiologiques

Cet article décrit une méthodologie détaillée pour obtenir aplaties sections tangentielles des cortex mammifère et visualiser les modules corticales en utilisant histochimiques et méthodes immunohistochimiques.

Visualisation des Modules corticales dans cortex mammifère aplatie

Ici, nous présentons des protocoles pour la préparation des tranches aigues de cerveau contenant le noyau génuulé latéral et l'investigation électrophysiologique de la fonction de synapses de rétinogeniculate et de corticogeniculate. Ce protocole fournit un moyen efficace d'étudier les synapses avec la probabilité de libération élevée et faible dans les mêmes tranches de cerveau aigus.

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Cet article vise à décrire un protocole systématique pour obtenir des tranches horizontales de cerveau hippocampal chez la souris. L’objectif de cette méthodologie est de préserver l’intégrité des voies de fibre hippocampal, telles que le chemin perforant et le tractus de fibre moussée pour évaluer les processus neurologiques liés au gyrus dentate.

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Nous présentons un protocole pour préparer des tranches aiguës de l’hippocampe dorsale-intermédiaire des souris. Nous comparons cette préparation transversale avec le tranchage coronal en termes de qualité des enregistrements et de préservation des caractéristiques morphologiques des neurones enregistrés.

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