Name: Rapid Point-of-Care Test de lefficacité anticoagulante énoxaparine dans le sang total (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: Découvrez un test rapide au point de soins pour évaluer l'efficacité anticoagulante de l'énoxaparine dans le sang total. Cette méthode utilise l'héparinase pour déterminer les valeurs de coagulation de référence.

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Les enquêtes ont été menées uniquement avec l&#39;aide de ressources ministérielles et institutionnelles. L&#39;appareil de coagulation (Hemochron 801) a été prêté sans obligation auprès du fabricant. Les cartouches d&#39;essai ont été achetées à leur prix de détail. Le chiffre d&#39;initiation à la vidéo a été modifiée à partir Sanderink, et al. 12 La deuxième figure dans la vidéo (évolution dans le temps héparinase digestion) a été reproduite avec la permission de Inchiosa et al 1.

1. Reconstitution Héparinase <ol><li> Lyophilisé héparinase I est obtenu commercialement (Siemens, Newark Delaware, DadeHepzyme REF B4240-10) dans des flacons contenant 1 ug de la protéine purifiée. La protéine est dissous dans 0,25 ml de solution saline (0,9% NaCl). </li></ol> 2. Prélèvement des échantillons de sang <ol><li> Deux échantillons de sang sont attirés par le vide dans du citrate de sodium (0,3 ml 0,109 M; 3,2%) tamponné Vacutainer tubes (Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ), les tubes sont à la fois pré-pointes avec une concentration connue de l&#39;énoxaparine, le volume de sang qui est établi est de 2,7 ml. La teneur totale est ensuite 3,0 ml. </li></ol> 3. Digestion Héparinase <ol><li> La totalité du contenu du flacon héparinase qui peut être aspiré dans une seringue (environ 0,2 ml, 80% de la fiole, 0,8 g de protéine), est transféré dans un tube Vacutainer, 0,2 ml de solution saline (0,9% NaCl) est ajouté à le second tube, qui sert de BâleEtat ine avant élimination de l&#39;effet de l&#39;énoxaparine. </li><li> Les deux tubes Vacutainer sont placés dans les puits de l&#39;appareil thermostaté Hemochron pendant une période de 5 min. (L&#39;adéquation d&#39;un temps de digestion 5 min avec de l&#39;héparinase a été créé dans notre travail déjà publié. 1) </li></ol> 4. Les dosages de coagulation <ol><li> À la fin de l&#39;incubation héparinase, 2,0 ml de sang est transféré dans la cartouche d&#39;analyse. Dans le cas du tube MAA, il est pré-rempli avec 0,1 ml de 250 mM de CaCl 2 pour initier la coagulation. L&#39;analyse commerciale TCA cartouche (A104) est conçu pour initier la coagulation dans le sang total qui a été établi dans des tubes Vacutainer contenant du citrate de sodium comme anticoagulant. </li><li> L&#39;appareil signale la fin Hemochron de la coagulation sanguine et préserve les temps de coagulation en secondes. La différence entre les temps de coagulation de l&#39;échantillon traité à l&#39;héparinase et l&#39;échantillon de référence, divisée par la coagulation timoi pour l&#39;échantillon de référence, on obtient le pour cent de diminution résultant de l&#39;élimination de l&#39;énoxaparine. Comme on le verra ci-dessous, de fortes corrélations linéaires ont été obtenues pour la relation entre la diminution pour cent du temps de coagulation et la concentration de l&#39;énoxaparine dans les échantillons dopés de sang entier, ainsi que pour la corrélation avec les concentrations mesurées de l&#39;énoxaparine par le test chromgenic d&#39;anti-Xa activité. Anti-Xa tests de concentration énoxaparine ont été réalisées avec un kit commercial pour un dosage chromogénique en deux étapes (BIOPHEN; Aniara, Mason, OH). </li></ol>

<ol><li>Inchiosa, M. A. J. r, Pothula, S., Kubal, K., Sanchala, V. T., Navarro, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+development+of+a+point-of-care+assay+of+enoxaparin+anticoagulant+activity+in+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Thromb.+Thrombolysis%22%5BJournal%5D)">Toward development of a point-of-care assay of enoxaparin anticoagulant activity in whole blood.</a> J. Thromb. Thrombolysis. 32, 47-53 (2011).</li>
<li>Despotis, G. J., Filos, K. S., Levine, V., Alsoufiev, A., Spitznagel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aprotinin+prolongs+activated+and+nonactivated+whole+blood+clotting+time+and+potentiates+the+effect+of+heparin+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth.+Analg%22%5BJournal%5D)">Aprotinin prolongs activated and nonactivated whole blood clotting time and potentiates the effect of heparin in vitro.</a> Anesth. Analg. 82, 1126-1131 (1996).</li>
<li>Pothula, S., Inchiosa, M. A. Jr, Sanchala, V. T., Sarabu, M., Inchiosa, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+effect+of+protamine+excess+on+blood+coagulation+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">In vitro effect of protamine excess on blood coagulation assays.</a> Anesth Analg. 96, SCA39(2010).</li>
<li>Inchiosa, M. Jr, Pothula, S., Sanchala, V., Kubal, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+low+plasma+levels+of+low+molecular+weight+heparin%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">Detection of low plasma levels of low molecular weight heparin.</a> Anesth Analg. 102, SCA10(2010).</li>
<li>Gogarten, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+new+antithrombotic+drugs+on+regional+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Anaesthesiol%22%5BJournal%5D)">The influence of new antithrombotic drugs on regional anesthesia.</a> Curr. Opin. Anaesthesiol. 19, 545-550 (2006).</li>
<li>Gouin-Thibault, I., Pautas, E., Siguret, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+profile+of+different+low-molecular+weight+heparins+used+at+therapeutic+dose%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Saf%22%5BJournal%5D)">Safety profile of different low-molecular weight heparins used at therapeutic dose.</a> Drug Saf. 28, 333-349 (2005).</li>
<li>Bazinet, A., Almanric, K., Brunet, C., Turcotte, I., Martineau, J., Caron, S., Blais, N., Lalonde, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dosage+of+enoxaparin+among+obese+and+renal+impairment+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb.+Res%22%5BJournal%5D)">Dosage of enoxaparin among obese and renal impairment patients.</a> Thromb. Res. 116, 41-50 (2005).</li>
<li>El Rouby, S., Cohen, M., Gonzales, A., Hoppensteadt, D., Lee, T., Zucker, M. L., Khalid, K., LaDuca, F. M., Fareed, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+a+HEMOCHRON+JR.+HEMONOXTM+point+of+care+test+in+monitoring+the+anticoagulant+effect+of+enoxaparin+during+interventional+coronary+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Thromb.+Thrombolysis%22%5BJournal%5D)">The use of a HEMOCHRON JR. HEMONOXTM point of care test in monitoring the anticoagulant effect of enoxaparin during interventional coronary procedures.</a> J. Thromb. Thrombolysis. 21, 137-145 (2006).</li>
<li>Yang, V. C., Bernstein, H., Cooney, C. L., Kadam, J. C., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+the+anticoagulant+activities+of+the+low+molecular+weight+heparin+fractions+and+fragments+with+flavobacterial+heparinase%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Removal of the anticoagulant activities of the low molecular weight heparin fractions and fragments with flavobacterial heparinase.</a> Thromb Res. 44, 599-610 (1986).</li>
<li>Maddineni, J., Walenga, J. M., Jeske, W. P., Hoppensteadt, D. A., Fareed, J., Wahi, R., Bick, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Product+individuality+of+commercially+available+low-molecular-weight+heparins+and+their+generic+versions%3A+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Applied+Thrombosis%2FHemostasis%22%5BJournal%5D)">Product individuality of commercially available low-molecular-weight heparins and their generic versions: therapeutic implications.</a> Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis. 12, 267-276 (2006).</li>
<li>Wijnhoven, T. J., van de Westerlo, E. M., Smits, N. C., Lensen, J. F., Rops, A. L., vander Vlag, J., Berden, J. H., vanden Heuvel, L. P., van Kuppevelt, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+anticoagulant+heparinoids+by+immunoprofiling%5BTitle%5D)+AND+%22Glycoconj.+J%22%5BJournal%5D)">Characterization of anticoagulant heparinoids by immunoprofiling.</a> Glycoconj. J. 25, 177-185 (2008).</li>
<li>Sanderink, G. -J. C. M., Guimart, C. G., Ozoux, M. -L., Jariwala, N. U., Shukla, U. A., Boutouyrie, B. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+and+pharmacodynamics+of+the+prophylactic+dose+of+enoxaparin+once+daily+over+4+days+in+patients+with+renal+impairment%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb.+Res%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics and pharmacodynamics of the prophylactic dose of enoxaparin once daily over 4 days in patients with renal impairment.</a> Thromb. Res. 105, 225-231 (2002).</li>
</ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à révéler.

Ce test d&#39;efficacité énoxaparine peut servir comme une option importante pour déterminer la sécurité relative de l&#39;exécution d&#39;une procédure invasive qui présente un risque de saignement ou d&#39;agent de développement d&#39;un hématome. Ce serait particulièrement important quand une injection péridurale est envisagée. La majorité des lignes directrices recommandent une période d&#39;attente de 12 heures entre l&#39;injection d&#39;énoxaparine et l&#39;ouverture d&#39;une procédure invasive 5 Insuffisance rénale, l&#39;obésité et la grossesse peut influencer les exigences de dosage de l&#39;énoxaparine 6,7 Depuis le dosage peut être effectué dans un 10.. - période min, il pourrait également être utilisé dans une clinique ou un cabinet de médecin, où il serait de fournir des informations sur l&#39;adéquation du traitement anticoagulant chez les patients qui présentent un risque de développement de la maladie thromboembolique veineuse. Ajustements posologiques immédiates pourraient être mis en place, selon les besoins. La concentration dans le plasma énoxaparine peut être mesurée par un développement chromogène d&#39;unssay de l&#39;étendue de l&#39;inhibition du facteur de coagulation, Xa. Toutefois, cela ne donne sa concentration, ne sont pas spécifiquement son efficacité anticoagulante, qui varie considérablement d&#39;un patient 6-8. Nos études ont été réalisées uniquement avec l&#39;énoxaparine. Cependant, il peut être prévu que l&#39;essai pourrait être appliquée à n&#39;importe quel HBPM qui est dégradé par l&#39;héparinase I. Cela est déjà connu pour être le cas pour la daltéparine, tinzaparine nadroparine et 9-11. Nous avons conçu le test en ce qui concerne les caractéristiques de l&#39;instrument le temps de coagulation Hemochron. L&#39;instrument est relativement peu coûteux; aussi, les tubes jetables de collecte de sang, ampoule héparinase et cartouches de dosage pour effectuer une analyse pour un patient est d&#39;environ 15 dollars américains. Ainsi, on pourrait s&#39;attendre à être approprié pour surveiller l&#39;état de l&#39;anticoagulant dans divers contextes cliniques.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Hepzyme </td><td> Siemens </td><td> B4240 </td><td> héparinase I </td></tr><tr><td> «MAA» Cartouche </td><td> Technidyne </td><td> FTK-ACT </td><td> le kaolin modifié par élimination </td></tr><tr><td> TCA cartouche </td><td> Technidyne </td><td> A104 </td><td></td></tr></tbody></table>

rapid point-of-care test de l&#39;efficacité anticoagulante énoxaparine dans le sang total

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

Il est nécessaire pour un dosage clinique pour déterminer la mesure dans laquelle le sang d&#39;un patient est effectivement anticoagulé par le bas poids moléculaire, l&#39;héparine (HBPM), l&#39;énoxaparine. Il ya aussi urgence des situations cliniques où il serait important si cela pouvait être déterminé rapidement. Le présent essai est conçu pour accomplir cette tâche. Nous avons seulement analysé des échantillons de sang de l&#39;homme qui ont été dopés avec des concentrations connues de l&#39;énoxaparine. La caractéristique essentielle de l&#39;analyse actuelle est la quantification de l&#39;efficacité de l&#39;énoxaparine dans un échantillon de sang d&#39;un patient en le dégradant à une inactivité complète avec de l&#39;héparinase. Deux échantillons de sang ont été prélevés dans des tubes Vacutainer (Becton-Dickenson, Franklin Lakes, NJ) qui ont été enrichis avec l&#39;énoxaparine, un échantillon a été digéré avec l&#39;héparinase pendant 5 min à 37 ° C, l&#39;autre échantillon représenté l&#39;état de base du patient sous anticoagulant. Le raccourcissement du temps de coagulation pour cent de l&#39;échantillon traité à l&#39;héparinase, par rapport à la bEtat aseline, a donné la contribution anticoagulant de l&#39;énoxaparine. Nous avons utilisé le portatif fonctionnant sur piles Hemochron 801 appareils pour la mesure des temps de coagulation (International Technidyne Corp, Edison, NJ). L&#39;appareil dispose de 2 thermostatiques (37 ° C) de puits tubulaires dosage. Nous avons effectué les tests dans deux types de cartouches d&#39;essai qui sont disponibles auprès du fabricant de l&#39;instrument. Une cartouche a été modifié pour augmenter sa sensibilité. Nous avons enlevé le kaolin de la cartouche FTK-ACT par une vaste rinçage à l&#39;eau distillée, ne laissant que la surface en verre du tube, et peut-être l&#39;aimant de détection, comme activateurs. Nous avons appelé ce test minimalement activé notre (MAA). L&#39;utilisation d&#39;un test peu actif a été étudié par nous et les autres. 2-4 La deuxième cartouche qui a été étudiée était un temps de céphaline activée (TCA) test (A104). Il a été utilisé tel que fourni par le fabricant. Les puits thermostatés de l&#39;instrument were utilisé à la fois pour la digestion héparinase et les tests de coagulation. L&#39;essai peut être terminé dans les 10 min. Le test a montré des changements MAA robustes dans le temps de coagulation après digestion héparinase de l&#39;énoxaparine sur une gamme de concentration clinique typique. À 0,2 UI anti-Xa de l&#39;énoxaparine par ml d&#39;échantillon de sang, la digestion héparinase provoqué une baisse moyenne de 9,8% (20,4 secondes) du temps de coagulation; à 1,0 UI par ml d&#39;énoxaparine il y avait une diminution de 41,4% (148,8 sec). Ce rapport ne présente que l&#39;application expérimentale de l&#39;essai, sa valeur dans un contexte clinique doit encore être établi.

La figure 1 présente les résultats pour les relations entre la diminution du temps de coagulation pour cent après l&#39;élimination de l&#39;énoxaparine à l&#39;héparinase pour une série de concentrations dopés de l&#39;énoxaparine (0,2, 0,4 et 1,0 UI anti-Xa par ml). Les résultats sont présentés à la fois pour le MAA et cartouches d&#39;essai TCA. Les concentrations mesurées de l&#39;énoxaparine à partir du dosage chromogénique activité anti-Xa sont également inclus dans l&#39;abscisse de chaque parcelle. La figure 2 présente les parcelles des mêmes données que pour cent de diminution dans le temps de coagulation vs chromogène mesure de l&#39;activité anti-Xa. De fortes corrélations linéaires, avec des hauts significations statistiques, ont été trouvées pour les quatre relations. <img src="/files/ftp_upload/3852/3852fig1.jpg" alt="Figure 1" /> Figure 1. Point de déterminations de soins de contr énoxaparineibution au temps de coagulation du sang total à pointes basées sur le changement pour cent (raccourcissement) du temps de coagulation après incubation avec de l&#39;héparinase. Les concentrations énoxaparine pointes ajouté au sang total et les mesure anti-Xa plasmatique (moyenne ± écart type entre parenthèses) sont placés dans l&#39;axe des abscisses de chaque graphique. Toutes les variations exprimées en temps de coagulation sont présentés comme des moyennes et SE, ainsi que le raccourcissement du temps de coagulation moyenne en secondes. Les données provenant du même patient sont reliés par des lignes pointillées. Les données pour les quatre patients identifiés par des astérisques sur la parcelle A sont (résultats MAA) de même que les quatre patients sur la parcelle B (tests TCA). Tous les résultats représentent une détermination unique. Les coefficients de corrélation de Pearson ont été r = 0,869 (p = 1,9 x 10 -5) et r = 0,916 (p = 2,8 x 10 -5) pour les relations avec le MAA et aPTTassay, respectivement. Reproduit avec la permission de Inchiosa et al 1. . Figure 2 Les résultats pour les variations en pourcentage du temps de coagulation dans les essais au point de soins indiquées dans les figures 1A et B sont tracées en fonction des concentrations plasmatiques anti-Xa facteur A, les résultats MAA;. B, TCA essais. Tous les résultats sont de simples temps de coagulation et des déterminations individuelles de concentrations Xa anti-facteur. Les coefficients de corrélation de Pearson ont été r = 0,910 (p = 2,5 x 10 -6) et r = 0,922 (p = 2,0 x 10 -5) pour les relations avec le MAA et le dosage du TCA, respectivement Reproduit avec la permission de Inchiosa et al 1.

La démonstration d&#39;une analyse quantitative rapide de l&#39;inhibition de la coagulation sanguine par le bas poids moléculaire, l&#39;héparine, l&#39;énoxaparine. La contribution de l&#39;énoxaparine est évaluée en retirant son influence à travers la digestion avec de l&#39;héparinase. Une description plus complète de l&#39;analyse est détaillée dans notre article publié.<sup&gt; 1</sup&gt; Le dosage nécessite toujours la confirmation clinique.

Rapid Point-of-Care Test de l&#39;efficacité anticoagulante énoxaparine dans le sang total

Il est nécessaire de disposer d'un essai clinique permettant de déterminer dans quelle mesure le sang d'un patient est efficacement anticoagulé par le ...

À titre d'introduction, nous faisons référence ici aux travaux publiés sur le cours du temps des concentrations plasmatiques de l'héparine de bas poids moléculaire Énoxaparine chez des sujets humains. Nous présentons aujourd'hui nos résultats obtenus avec un test rapide au point d'intervention pour l'héparine de bas poids moléculaire. Dans ce cas, l'entité est Énoxaparine.Les résultats présentés dans cette diapositive illustrent la concentration plasmatique chez des patients recevant chroniquement le médicament une fois par jour, à raison de 40 milligrammes par jour. En suivant l'évolution de la concentration après la dernière administration jusqu'à sa disparition ultérieure, on observe qu'approximativement quatre heures après l'administration, une concentration maximale de 0,4 unité internationale par mL est atteinte, un niveau qui se situe dans la plage thérapeutique du médicament. Un point particulièrement intéressant concerne également la quantité restant 12 heures après l'administration, car il existe une recommandation cliniquement admise selon laquelle il convient d'attendre au moins 12 heures après l'administration d'une héparine de bas poids moléculaire, dans ce cas l'énoxaparine, avant de pratiquer une procédure particulièrement invasive, susceptible de présenter un risque de saignement. Il nous importe de noter qu'une quantité clairement détectable est encore présente à ce moment-là, un aspect sur lequel nous nous sommes penchés dans certaines de nos études, comme nous le démontrerons.Également présenté dans ce travail par Sender et al. est le fait que les individus présentant une altération rénale ont des concentrations considérablement plus élevées du médicament tout au long du temps, et nous constatons que la recommandation de 12 heures pourrait être très insuffisante dans le cas d'un patient souffrant d'altération rénale ou, comme on le sait, chez une femme enceinte ou chez des patients obèses. Je souhaite présenter les chercheurs qui ont participé à ce projet au New York Medical College. Je m'appelle Mario Osa.Je suis professeur de pharmacologie ici. Je suis le Dr. Surya Patula, professeur agrégé d'anesthésiologie clinique au New York Medical College. Je m'appelle Keshar Kal.Je suis un étudiant en troisième année de médecine. Voici l'appareil que nous utilisons pour ces dosages. L'appareil est produit par la société Omicron Corporation.Il peut être utilisé sur secteur ou avec des piles, ce qui en fait un véritable dispositif de diagnostic au point d’intervention dans ce sens. L’appareil dispose de deux compartiments contrôlés thermostatiquement, que nous utilisons pour la pré-incubation des échantillons lors de la préparation du test proprement dit, ainsi que pour le test de coagulation lui-même. Une caractéristique majeure du test réside dans l’utilisation d’une préparation hautement purifiée et disponible commercialement d’héparinase.Nous l'avons acheté auprès de la société Siemens. Il est fourni sous une forme très stable et est facilement soluble dans du sérum physiologique ou toute solution aqueuse. L'utilisation de l'ACE héparinée est particulièrement précieuse dans notre approche, car elle nous permet d'obtenir la valeur de base de la coagulation du patient.En l'absence de toute influence de l'héparine, l'ACE est capable de dégrader complètement l'héparine de bas poids moléculaire et l'héparine non fractionnée, mais notre intérêt particulier ici porte sur l'héparine de bas poids moléculaire, que l'on souhaite dégrader jusqu'à l'inactivation afin d'obtenir une valeur du temps de coagulation en l'absence de toute influence de l'héparine. Ce que nous illustrons ici est le cours temporel de la dégradation de l'héparine de bas poids moléculaire, dans ce cas l'énoxaparine, par l'héparinase. Les données sont représentées en pourcentage du temps de coupure de base ; ce que nous observons ici, c'est que l'énoxaparine ajoutée à une concentration d'une unité anti-10. Une unité internationale par mL provoque environ une prolongation de 50 % du temps de coagulation du sang. Ensuite, après des périodes d'incubation variables avec l'héparinase à 37 degrés Celsius, nous observons le temps nécessaire à la récupération des temps de coagulation de base. En d'autres termes, la dégradation complète de l'énoxaparine jusqu'à l'inactivité.En ce qui concerne l'effet anticoagulant, on observe déjà une récupération quasi complète du temps de coagulation de base au bout d'une minute et demie. Il y a essentiellement un rétablissement à 100 % du temps de coagulation de référence. Après examen de cette cinétique, nous avons choisi d'utiliser une incubation de cinq minutes comme pré-incubation standard du sang avant la mesure du temps de coagulation.Les tubes d'analyse pour ce test de diagnostic rapide ont été légèrement modifiés par rapport à la manière dont nous les recevons du fabricant. Ces tubes contenaient à l’origine du kaolin activateur, présent pour la mesure du temps de coagulation activé. Nous avons constaté que l’utilisation du tube sans l’activateur augmente considérablement sa sensibilité.Nous avons appelé ce test notre test d'activation minimale, car nous pensons que les seules sources possibles d'activation seraient désormais la surface en verre du tube et peut-être l'aimant. L'aimant constitue la partie essentielle du test automatisé. Ces tubes tournent dans les alvéoles et, lorsque l'aimant est piégé par un caillot de densité suffisante entraînant l'arrêt de son mouvement, ce blocage est détecté et signale la fin de la coagulation.Nous avons également étudié le test en utilisant la cartouche de temps de thromboplastine partielle activée omicron. Le test est réalisé de la même manière. Ce système présente une activation légèrement plus importante.Notre première étape consiste à reconstituer l'héparinase de lys provenant du flacon dans lequel elle est fournie. Nous ajoutons 0,25 ml de solution saline dans le flacon, puis laissons environ 20 secondes pour une dissolution complète. Ensuite, nous aspirons la totalité du contenu du flacon dans une seringue tuberculinique, obtenant habituellement environ 0,2 ml lors de cette étape suivante.Les ajouts pour la pré-incubation sont effectués sur des échantillons de sang fraîchement prélevés contenant de l'énoxaparine, placés dans des tubes vacutainer de trois ml. La première addition correspond à l'héparinase, qui est mélangée à ce moment-là. Ensuite, on ajoute 0,2 ml de solution saline dans le tube contenant de l'énoxaparine mais pas d'héparinase, afin d'obtenir un volume total comparable à VO.Nous utilisons le minuteur intégré de l'appareil pour décompter les 300 secondes. Cela correspond à cinq minutes de pré-incubation. Les tubes à vide sont retirés lorsque la pré-incubation est terminée.La dernière étape consiste à transférer deux ml des échantillons préincubés dans nos tubes de dosage faiblement activés. Ces tubes sont préremplis avec cent microlitres de chlorure de calcium à 0,25 molaire afin d'initier la coagulation. Ce premier tube est celui qui a été préincubé avec de l'héparinase.Le deuxième échantillon est celui contenant l'énoxaparine mais aucune héparinase. Les chronomètres indiquent le temps écoulé depuis l'ajout de chlorure de calcium, et nous pouvons constater que le premier échantillon est terminé. C'est le tube supérieur qui a nécessité 200 secondes pour l'achèvement de la coagulation.L'échantillon qui ne contenait pas d'héparinase a pris plus de temps et est maintenant terminé. Ceci simule un résultat typique obtenu avec du sang additionné de 0,4 unités internationales d'énoxaparine par ml. Cela correspond à un raccourcissement d'environ 45 secondes du temps de coagulation à cette concentration d'énoxaparine, soit une diminution de 18 % du temps de coagulation.Comme on peut le constater, la détection de la coagulation est automatisée et les temps sont conservés sur l'appareil jusqu'à la fin de l'analyse. Nous devons mentionner que nous avons effectivement testé cet essai à une concentration aussi faible que 0,1 unité internationale d'énoxaparine par ml. Comme indiqué dans l'introduction, il s'agit de la concentration pouvant être présente 12 heures après une dose thérapeutique typique d'énoxaparine.Nous avons également été en mesure de détecter de façon fiable à cette concentration.

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Nous présentons un modèle in vitro de maladie vasculaire pour étudier des interactions de sang entier avec l’endothélium patient-dérivé. Ce système permet l’étude des propriétés thrombogéniques des cellules endothéliales primaires dans diverses circonstances. La méthode est particulièrement adaptée pour évaluer la thrombogénicité in situ et la thérapie anticoagulation pendant les différentes phases de la coagulation.

Modèle de maladie microfluidique in vitro pour étudier les interactions endoteléliales du sang entier et la dynamique des caillots sanguins en temps réel

Ce protocole étudie l’utilisation d’un plasma riche en vésicules extracellulaires (VE) comme indicateur de la capacité de coagulation de l’EV. Le plasma riche en VE est obtenu par un processus de centrifugation différentielle et de recalcification ultérieure.

Détermination de l’activité procoagulante de la vésicule extracellulaire (EV) à l’aide du temps de coagulation activé par EV (EV-ACT)

Nous présentons un protocole de paillasse pour induire une thrombose dans des dispositifs d’assistance ventriculaire (DAV) au sein d’une plate-forme de test en recirculation. Cette méthode sert à identifier les points chauds thrombogènes dans le flux sanguin et peut aider à améliorer la thromborésistance avant les tests précliniques sur des modèles animaux.

In vitro Test de thrombose pour les dispositifs d’assistance ventriculaire

Ce protocole décrit le test d’hémostase de Nimègue, qui permet une mesure simultanée et temporelle de la génération de thrombine et de plasmine afin d’assurer une évaluation intégrée de la coagulation et de la fibrinolyse. Le test vise à améliorer la caractérisation de l’équilibre hémostatique dans les milieux de recherche et cliniques, au-delà du cadre des tests hémostatiques conventionnels.

Le test d’hémostase de Nimègue : mesure simultanée fluorogénique de la génération de thrombine et de plasmine dans un seul puits

Nous décrivons une méthodologie pour le traitement du sang total afin d’obtenir une variété de composants pour une analyse plus approfondie. Nous avons optimisé un protocole rationalisé qui permet un traitement simultané rapide et à haut débit d’échantillons de sang total dans un cadre non clinique.

Fractionnement rapide et isolement de composants de sang total dans les échantillons obtenus à partir d&#39;un milieu communautaire

Un protocole pour mesurer les leucocytes du sang périphérique à l’aide d’un analyseur de leucocytes basé sur une carte POCT est présenté ici. Les mêmes échantillons de sang ont été analysés par deux analyseurs d’hématologie automatisés pour évaluer la cohérence et l’exactitude des résultats. Les résultats ont montré que l’analyseur évalué avait une bonne corrélation avec le système de référence.

Évaluation d’un analyseur de test au point de service pour la mesure des leucocytes du sang périphérique

Découvrez un test rapide au point de soins pour évaluer l'efficacité anticoagulante de l'énoxaparine dans le sang total. Cette méthode utilise l'héparinase pour déterminer les valeurs de coagulation de référence.

Rapid Point-of-Care Test de l'efficacité anticoagulante énoxaparine dans le sang total

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