Modèle endocardite expérimentale de résistant à la méthicilline Staphylococcus aureus (SARM) chez le rat

L’objectif global de cette procédure est d’établir un modèle expérimental d’endocardite infectieuse chez le rat. Ceci est accompli en cultivant d’abord l’aureus et en préparant des cathéters chirurgicaux pour l’infection. Ensuite, la zone chirurgicale est préparée et l’animal est anesthésié.

Une fois l’animal anesthésié, un cathéter est inséré dans l’artère carotide droite vers le cœur. La dernière étape consiste à infecter les animaux avec aureus par injection dans la veine de la queue. En fin de compte, les tissus cibles sont disséqués et préparés pour la culture quantitative.

Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, comme un modèle d’endocardite rapide, est que le modèle d’endocardite rouge peut être utilisé avec le système d’imagerie in vivo. Ivus. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la pathogenèse buccale, telles que la virulence et l’efficacité de l’agent antimicrobien. En général, les personnes qui ne connaissent pas cette technique auront du mal car l’intervention chirurgicale est difficile.

Tout d’abord, inoculez une boucle pleine de culture M SSA à partir d’un stock congelé à un cas de sang de mouton. La plaque de vis sans fin de soja incube la culture pendant la nuit à 37 degrés Celsius après s’être assurée qu’il n’y a pas de contamination. Choisissez une colonie dans l’assiette et utilisez-la pour inoculer cinq millilitres de bouillon de soja dans un tube à pression de 15 millilitres.

Incuber l’inoculum à 37 degrés Celsius pendant la nuit dans un incubateur agitant. Réglez à 200 tr/min pour préparer d’abord les cathéters. Coupez les tubes en polyéthylène à des longueurs de 10 centimètres et stérilisez les cathéters dans une solution désinfectante cex pendant 30 minutes.

Ensuite, faites fondre une extrémité d’un tube stérilisé en appuyant sur l’extrémité avec une pince stérile chauffée pour créer un cathéter qui passera de l’artère carotide droite au ventricule gauche et causera des dommages à l’endocarde lorsque le cœur bat. Ensuite, anesthésiez le rat en le plaçant dans une chambre contenant un mélange individuel de fluor et d’oxygène jusqu’à ce que l’anesthésique fasse effet. Confirmez l’anesthésie en vérifiant si les muscles sont détendus et si les réflexes de pédale sont absents.

Et maintenez un état anesthésié pendant la chirurgie en utilisant un cône nasal qui est relié au mélange gazeux. Nettoyez la zone chirurgicale avec de la bétadine et de l’éthanol à 70 % en utilisant une technique stérile tout au long de la chirurgie. Placez le rat en position dorsale et faites une incision verticale à travers la couche cutanée du cou au-dessus du sternum à l’aide d’une dissection contondante.

Séparez le fascia pour exposer l’artère carotide droite. L’artère carotide droite est située légèrement à droite de la ligne médiane au-dessus des clavicules. Tirez délicatement l’artère vers le haut hors de la cavité du cou et placez deux longueurs de 10 centimètres de suture en soie sous l’artère pour l’attacher à l’extrémité céphalique exposée.

Placez ensuite un clip sur l’artère pour éviter les saignements. Faites un petit trou dans le haut de l’artère à l’aide d’un introducteur de cathéter à l’aide d’une pince. Insérez l’extrémité non scellée du cathéter dans le trou de l’artère.

Retirez le clip et poussez le cathéter vers le cœur. Jusqu’à ce qu’une résistance soit rencontrée correctement insérée, le cathéter doit s’étendre de quatre à cinq centimètres dans l’artère et doit pulser avec le rythme cardiaque du rat. Une fois le cathéter en place, attachez une suture lâche autour de l’extrémité du dorloteur de l’artère et fixez le cathéter en place.

Avec une suture en soie, coupez l’excès de suture et les extrémités du cathéter, puis rentrez les extrémités sous la peau du cou. Fermez la peau à l’aide de pinces à peau. Placez le rat dans une cage propre et conservez-le dans un endroit chaud jusqu’à ce qu’il soit remis de l’anesthésie.

Fournissez de la nourriture et de l’eau et vérifiez fréquemment le rat, pendant et après sa convalescence. L’infection peut être réalisée entre un et sept jours après la chirurgie, mais le temps doit rester cohérent dans les expériences. Nettoyez la queue du rat avec de l’éthanol à 70 % et injectez 0,5 millilitre de culture de SARM dans la cellule souhaitée.

Comptez dans la veine de la queue. À l’aide d’une aiguille d’un demi-pouce de calibre 27, appliquez une pression sur le site d’injection jusqu’à ce que tout saignement ait cessé avant de remettre le rat dans sa cage. Après avoir sacrifié le rat, essuyez la poitrine avec de l’éthanol à 70 %, puis faites une incision en forme de V dans la poitrine sous le sternum.

Coupez le cartilage des côtes de chaque côté du sternum. Pour exposer le cœur, tirez doucement le cœur vers le haut et coupez à travers le tissu près de l’aorte et disséquez vers le haut pour libérer le cœur. Placez le cœur sur une boîte de Pétri stérile recouverte de gaze de quatre pouces sur quatre, puis faites une incision à travers la paroi interne du ventricule gauche et ouvrez la chambre du côté gauche.

Vérifiez que le cathéter est correctement placé, puis retirez-le. Examinez et retirez les végétations de la valve à l’aide de ciseaux et de pinces. Retirez également les reins et la rate, et après avoir pesé et homogénéisé les tissus et les végétations, faites des dilutions en série dans du PBS pour une culture quantitative.

On voit ici un cathéter correctement positionné, comme indiqué par la flèche la plus à gauche. Il s’étend à travers la valve aortique et dans le côté gauche de la cavité cardiaque, et de nombreuses végétations sont visibles autour des valves aortiques, comme l’indiquent les flèches du milieu et de la droite. Ce tableau fournit un exemple de la virulence d’une souche de ssus dans le modèle d’endocardite chez le rat.

Tous les animaux ont été confrontés à l’inoculaire de 10 à la cinquième et de 10 à la sixième. L’UFC a développé une endocardite avec de fortes densités de ssus dans les végétations cardiaques ainsi que dans les reins et la rate Une fois maîtrisée. Cette intervention chirurgicale peut être effectuée dans les 10 minutes si elle est effectuée correctement.

Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler de maintenir l’animal dans un état évalué pendant la chirurgie après cette procédure. Des méthodes comme ivus peuvent être mises en œuvre pour répondre à des questions supplémentaires telles que la surveillance en temps réel de l’efficacité des agents antimicrobiens et de l’expression génique in vivo après son développement. Cette technique est le moyen pour les chercheurs dans le domaine de l’art et de la fiction d’explorer son facteur de virulence pathogène dans l’infection endovasculaire.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’établir un modèle expérimental d’endocardite chez le rat. N’oubliez pas que travailler avec l’ARM peut être extrêmement dangereux et que des précautions telles que le port d’un laboratoire, d’un manteau et d’un gant doivent être prises lors de l’exécution de cette procédure.