L'alcool polyvinylique Modèle éponge Implantation

L'objectif général de cette procédure est d'utiliser une éponge en alcool polyvinylique pour modéliser la cicatrisation des plaies chez la souris. Cela est réalisé en hydratant et en chargeant d'abord l'éponge en vue de son implantation. Ensuite, l'éponge est insérée dans une poche située entre le muscle abdominal et la peau de la souris.

Après l'implantation, chaque éponge peut ensuite être injectée avec un traitement. La dernière étape consiste à retirer les éponges de la souris. Enfin, des coupes histologiques, des colorations et des dosages quantitatifs peuvent être réalisés afin d'observer les modifications et variations du processus de cicatrisation.

Bien que cette méthode puisse fournir des informations sur la cicatrisation des plaies, elle peut également être appliquée à d'autres domaines d'étude tels que l'angiogenèse tumorale, la distribution de médicaments et la survie de cellules implantées. Pour la greffe, commencez par hydrater les éponges par agitation nocturne dans une solution aqueuse de chlorure de sodium à 0,9 %. Puis stérilisez par autoclavage 75 millilitres de la suspension d'éponge hydratée pendant 25 minutes à 121 degrés Celsius.

Pour stériliser les éponges, placez la solution d'éponge pour autoclave dans une hotte stérile, puis utilisez des pinces stériles pour saisir une éponge, comprimez l'éponge avec les pinces et utilisez une pointe de vide pour éliminer autant de solution que possible de l'éponge. Placez ensuite l'éponge essorée dans une plaque de culture tissulaire, en prenant soin de laisser un espace entre les éponges, et déposez goutte à goutte la solution de traitement directement au centre d'une éponge. Appuyez ensuite doucement sur l'éponge avec la pointe de la pipette pour l'aider à absorber la solution.

Une fois que toutes les éponges sont chargées, conserver la plaque sur de la glace jusqu'à l'implantation des éponges dans la souris. Après avoir confirmé la sédation par le test réflexe de pincement, placer la souris en position supine dans un cône nasal. Ensuite, à l'aide d'un rasoir électrique, raser une zone de un pouce sur un pouce de poils sur la face ventrale inférieure de la souris, en dessous de la cage thoracique.

Nettoyer la zone en essuyant les cheveux coupés. Stériliser la zone rasée avec de la Bétadine, suivie d’alcool à 70 %. Ensuite, tendre la peau fermement.

Utilisez le scalpel pour pratiquer une incision verticale d'une profondeur d'une fois et demie à deux fois le diamètre des éponges à insérer, en prenant soin de ne pas sectionner la cavité corporelle. Utilisez la pince pour saisir le bord de la peau.

Ensuite, utilisez des ciseaux de Metzenbaum pour séparer lentement la peau du muscle sur les deux côtés de l'incision. Étendez la poche sur toute la largeur de la souris, depuis la cage thoracique jusqu'aux pattes arrière. Maintenant, utilisez la pince pour saisir le premier éponge à insérer dans l'animal en la pinçant par les côtés.

Ensuite, transférez l'éponge vers une paire de pinces droites de manière à ce qu'elle soit maintenue par le haut et par le bas. Puis, saisissez et soulevez le bord de la peau à l'aide d'une autre paire de pinces, et insérez lentement l'éponge en évitant de toucher la peau ou le muscle sous-jacent. Une fois toutes les éponges insérées, utilisez une paire de pinces pour maintenir ensemble les deux côtés de l'incision, puis passez le fil de suture à travers les deux couches de peau.

Serrer le premier nœud juste assez pour rapprocher les bords de la peau et terminer le nœud carré avec un autre nœud dans l'autre sens, en tirant fermement sur le nœud cette fois. Ensuite, faire deux nœuds carrés supplémentaires pour terminer le point de suture.

Placer des sutures supplémentaires pour fermer entièrement l'incision. Enfin, retirer l'animal du système d'anesthésie et le surveiller jusqu'à ce que la conscience soit rétablie. La souris devrait rapidement commencer à se déplacer et retrouver sa mobilité préopératoire.

Commencez par remplir une seringue avec la solution souhaitée et fixez une aiguille de calibre 28 à la seringue. Ensuite, après avoir confirmé la sédation par une pincée au niveau de l'orteil, insérez l'aiguille dans l'animal selon un angle de 45 degrés à travers la peau au centre des éponges afin de vous assurer que l'aiguille se trouve bien dans l'éponge. Relevez lentement l'aiguille verticalement.

Si l'aiguille est dans l'éponge, l'éponge montera avec l'aiguille. Ensuite, injectez lentement la substance dans l'éponge et retirez l'aiguille. Après avoir sacrifié l'animal, tenez la peau avec une paire de pinces et faites une incision près de l'éponge souhaitée.

Enfin, séparez soigneusement les éponges de la capsule environnante, en évitant de prélever des tissus supplémentaires autour de l'éponge retirée. Les éponges peuvent être conservées dans différentes conditions selon le type d'analyse qui sera effectuée. Pour la coupe histologique, les éponges récupérées peuvent être incluses dans un milieu de congélation, tel que le composé optimal pour la température de coupe, ou placées dans du formol à 10 % pour l'inclusion et la coupe en blocs de paraffine, comme cela a été fait pour ces éponges colorées à l'hématoxyline et à l'éosine.

Et dans ces sections de spéculums de trière colorés, les meilleurs résultats de coupe sont obtenus lorsque le spéculum est sectionné en deux dans le sens du diamètre, comme illustré ici, puis inclus avec la surface coupée vers le bas. Comme le montre cet exemple, les sections du spéculum doivent être réalisées de manière à ce que toute la largeur du spéculum soit visible sur cette figure. Le spéculum à gauche a été inclus ou sectionné incorrectement, comme en témoigne le bord tissulaire perturbé le long du côté droit de la section, tandis que le spéculum intact à droite a été traité correctement.

Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la préparation, de l'implantation, de l'injection et du retrait des éponges en alcool polyvinylique afin d'étudier la cicatrisation des plaies chez la souris.