Name: La salive, les glandes salivaires, et Collection hémolymphe de tiques Ixodes scapularis (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: Apprenez à prélever l'hémolymphe, les glandes salivaires et la salive chez Ixodes scapularis. Cette méthode permet d'étudier les interactions pathogènes et la transmission des maladies à tiques.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Les auteurs tiennent à remercier la Division de Vector-Borne Direction générale des ressources animales maladies, en particulier Andrea Peterson, Lisa Massoudi, Verna O&#39;Brien, et John Liddell pour leur entretien et de maintenance des souris et des lapins. Nous aimerions également remercier Amy Ullmann, Theresa Russell, et Barbara J. Johnson pour leurs contributions à l&#39;égard de ce manuscrit. Enfin, nous tenons à remercier Alissa Eckert dans le bureau du directeur adjoint pour la communication à la CDC pour la réalisation des illustrations graphiques et Judy Lavelle pour diriger tous les aspects juridiques liés à la prise de vue de ce manuscrit.

1. Collecte hémolymphe de préparation des lames (Film 1) <ol><li> Retirez délicatement activement tiques d&#39;alimentation d&#39;un animal et le lieu dans le peroxyde d&#39;hydrogène à 3% topique pour 5 minutes, puis dans l&#39;éthanol à 70% pendant 10 minutes à la surface de stériliser. </li><li> Avec un stylo pap dessiner un cercle sur une lame de microscope enduite de silane et de placer la tique dans le cercle stylo pap. <ol><li> Silane lames enduites sont utilisés pour une meilleure adhésion de l&#39;hémolymphe de la lame de microscope. </li></ol></li><li> Voir la tique sous une loupe binoculaire (1X objectif, oculaire 10x, un grossissement de 3.5X). </li><li> Poussez doucement sur le dos de la tique avec une pince à s&#39;évaser jambes de la tique et d&#39;immobiliser la tique. </li></ol> Remarque: Lorsque l&#39;immobilisation de la tique ne pas appuyer trop fort car cela peut perturber l&#39;intestin moyen ou de percer la tique et de contaminer l&#39;hémolymphe. <ol start="5"><li> Amputer la jambe de la tique ou les jambes à econjointe e distale avec une pointe fine scalpel jetable. Pour déterminer l&#39;infectiosité par l&#39;intermédiaire d&#39;hémolymphe seulement 1 jambe doit être amputée. Pour la collecte d&#39;hémolymphe sur une lame de plusieurs segments peuvent être amputé. </li></ol> Remarque: Ne pas couper la jambe trop près du corps, car cela peut provoquer une contamination intestin moyen de l&#39;hémolymphe. <ol start="6"><li> Après la ou les jambes sont coupées continuer à appliquer doucement la pression à dos de la tique pour l&#39;hémolymphe de sécréter sur les jambes sur la diapositive. Déplacez doucement la tique autour de la diapositive pour répandre l&#39;hémolymphe. </li></ol> 2. Ablation des glandes salivaires (Films 2 &amp; 3) <ol><li> Spot plusieurs piscines de 25 ul de tampon phosphate salin (PBS) sur une lame de microscope et placer une coche dans une des piscines de CPE. </li><li> Voir la tique sous une loupe binoculaire (1X objectif, oculaire 10x, un grossissement de 3.5X). </li><li> Stabiliser la tique avec pince à pointe amendes par la tenue du capitule base (pièces buccales) ou à l&#39;arrière de la tique. </li><li> Insérez les pinces fines pointes à l&#39;arrière de la tique et découper la tique est dos pour exposer les organes. Si vous le souhaitez l&#39;intestin moyen peut être retiré à ce moment et transféré à un pool de frais de PBS sur une lame de microscope ou à un microtube contenant du PBS. </li><li> Trouver la paire de glandes salivaires (raisin, comme les grappes) situés bilatéralement aux côtés des jambes de la tique. Si les glandes salivaires ne sont pas visibles parmi les débris tique déplacer la partie principale tique, contenant encore des glandes salivaires, d&#39;une piscine fraîche de PBS pour réduire la perturbation et la perte des glandes salivaires. </li></ol> Remarque: Plus tôt dans la tétée, les glandes salivaires sont plus difficiles à localiser, car ils ne sont pas aussi développé que par rapport à plus tard dans l&#39;alimentation. <ol start="6"><li> Retirer les glandes salivaires de la tique avec une pince fine pointe et les placer dans une piscine fraîche de PBS. </li><li> Wie à pointe fine pince transférer les glandes salivaires à l&#39;autre propre 25 PBS piscine pl, répétez cette étape de lavage 3-4 fois plus pour éliminer les micro-organismes externes et les débris tique. </li></ol> Remarque: Lavez les grappes des glandes salivaires en douceur afin de réduire la perte et la perturbation des glandes salivaires individuelles. <ol start="8"><li> Placez les glandes dans une piscine propre de PBS sur une lame de silane enduit ou dans un microtube contenant du PBS. </li></ol> 3. Le prélèvement de salive (Film 4) <ol><li> Retirez délicatement les tiques femelles adultes du lapin ou autre hôte à l&#39;aide de fines pinces à bout juste avant qu&#39;ils ne déposeront complètement gorgées de sang, des journées d&#39;environ 5-7 après fixation. </li><li> Respecter la tique près engorgée sur une extrémité d&#39;une lame de microscope avec du scotch. Le ruban doit être placé à environ ¾ de la hauteur dos de la tique vers la tête, laissant capitule base de la tique (pièces buccales) exposés.</li><li> Lorsque la bande se réunit le bord antérieur de la surface dorsale des tiques pipette 5 pi d&#39;une solution de pilocarpine 5% (dans le méthanol). Permettre à la bande pour absorber la pilocarpine sur le dos du cocher, sans permettre à la pilocarpine à venir en contact avec capitule base de la tique. </li><li> Monter un morceau de pâte à modeler non toxique sur la lame de microscope d&#39;environ un pouce de pièces buccales de la tique. </li><li> Utilisation de fines pinces à bout rompre la pointe d&#39;un tube capillaire tiré 28 au diamètre souhaité. </li><li> Voir capitule base de la tique sous une loupe binoculaire. </li><li> Doucement s&#39;adapter hypostome de la tique dans le tube capillaire permettant tiré les palpes maxillaires de résider à l&#39;extérieur du tube capillaire. </li><li> Appuyer sur l&#39;extrémité opposée du tube capillaire dans la pâte à modeler pour maintenir le tube capillaire en place. </li><li> Placez la tique monté saliver l&#39;intérieur d&#39;une chambre noire avec une humidité élevée (par exemple, une boîte à couvercle en polystyrène bordée de pap humide<html> serviettes er). Incliner la lame de sorte que les points de hypostome au fond du récipient, permettant gravité à l&#39;aide de prélèvement de salive. </li><li> Placez le récipient à la température ambiante. </li><li> Surveiller de près les tiques saliver pour la première heure, et de recueillir la salive comme il est généré par l&#39;expulsion hors des tubes capillaires avec un bulbe de pipette Pasteur. Après la première heure, vérifiez l&#39;accumulation toutes les heures pendant au moins 4 heures. Continuer à collecter la salive car il est généré. </li></ol> Remarque: l&#39;acquisition salive peut être arrêté une fois assez de salive sont recueillis pour l&#39;étude en cours d&#39;exécution. <ol start="12"><li> Si les tiques ne sont pas saliver ou si plus de salive est nécessaire, la salivation peut parfois être induite en utilisant le tube capillaire pour masser le hypostome. </li><li> Ajouter 0,1 volumes de cocktail inhibiteur de la protéase à la salive et les conserver à -80 ° C jusqu&#39;à ce que nécessaire. </li></ol> 4. Les résultats représentatifs e_content &quot;Film&gt; 1 montre comment tenir une nymphe I. scapularis et partiellement alimenté amputer les jambes pour recueillir hémolymphe sur une lame de microscope. Une fois la ou les jambes sont amputées un liquide clair est sécrétée (figure 1A et 1B). Si l&#39;intestin moyen est rompu l&#39;hémolymphe est trouble car il est sort de la jambe amputée (s) (figure 1C et 1D). L&#39;extraction des glandes salivaires après la nymphe a nourri pendant 48 ou 72 heures est démontrée dans les films 2 et 3. Après la tique est percé il ya généralement une grande quantité de débris (composé de la trachée, tubes de Malpighi, du sang, du tissu conjonctif, etc), pour empêcher la perte ou la perturbation des glandes salivaires de la tique se déplacer à un pool de frais de PBS. Les chiffres 2A et 2B montrent où les glandes salivaires sont situées après la nymphe a été coupée et la figure 2C montre enlevé grappes des glandes salivaires dans une mare de PBS. Le prélèvement de salive mis en place à partir de I. scapularis femelles adultes i<html> s montré dans le film 4 et la figure 3. Une coche saliver dans un tube capillaire est observé dans le film 5. Cette méthode de collecte de salive utilisée pour stimuler la salivation pilocarpine et peut produire plus de 20 ul de la salive par tique femelle adulte. <img alt="Figure 1." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig1.jpg" /> Figure 1. Structures marquées d&#39;une nymphe I. scapularis. Film 1. Collection Ixodes scapularis hémolymphe. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie1.avi">Cliquez ici pour regarder un film</a> . <img alt="Figure 2." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig2.jpg" /> Figure 2. Non contaminés (A &amp; B) et contaminés (C &amp; D) qui se dégage de la jambe hémolymphe de la nymphe. Movie 2. L&#39;extraction des glandes salivaires à partir d&#39;un 48 heures nourris I. nymphe scapularis.pload/3894/3894movie2.avi &quot;&gt; Cliquez ici pour regarder un film. L&#39;extraction Movie 3. La glande salivaire d&#39;un 72 heures nourris I. nymphe scapularis. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie3.avi">Cliquez ici pour regarder un film</a> . <img alt="Figure 3." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig3.jpg" /> Figure 3. Ixodes scapularis glandes salivaires nymphe. (A &amp; B) Des exemples de glandes salivaires dans un 72 heures nourris nymphe, avant l&#39;extraction. (C) Suppression de cluster glande salivaire. Le prélèvement de salive Movie 4. Mettre en place d&#39;un adulte I. scapularis tique femelle. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie4.avi">Cliquez ici pour regarder un film</a> . <img alt="Figure 4." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig4.jpg" /> Le prélèvement de salive Figure 4. De l&#39;adulte I. scapularis femelles tIcks. (A &amp; B) Cochez monté sur une glissière avec son hypostome à la fin tiré du tube capillaire avec la fin unpulled du tube capillaire détenu par la pâte à modeler. (C &amp; D) chambre humidifiée contenant adultes saliver I. scapularis tiques femelles. Film 5. Ixodes scapularis tique femelle saliver dans un tube capillaire. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie5.avi">Cliquez ici pour regarder un film</a> .

<ol><li>Quach, K. A., Boctor, F. N., Elston, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What%27s+eating+you%3F+Hyalomma+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Cutis%22%5BJournal%5D)">What's eating you? Hyalomma ticks.</a> Cutis. 87, 165-167 (2011).</li>
<li>Graham, J., Stockley, K., Goldman, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick-borne+illnesses%3A+a+CME+update%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr.+Emerg.+Care%22%5BJournal%5D)">Tick-borne illnesses: a CME update.</a> Pediatr. Emerg. Care. 27, 141-147 (2011).</li>
<li>Nuttall, P. A., Paesen, G. C., Lawrie, C. H., Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vector-host+interactions+in+disease+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Microbiol.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Vector-host interactions in disease transmission.</a> J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 2, 381-386 (2000).</li>
<li>Estrada-Pena, A., Jongejan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ticks+feeding+on+humans%3A+a+review+of+records+on+human-biting+Ixodoidea+with+special+reference+to+pathogen+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Appl.+Acarol%22%5BJournal%5D)">Ticks feeding on humans: a review of records on human-biting Ixodoidea with special reference to pathogen transmission.</a> Exp. Appl. Acarol. 23, 685-715 (1999).</li>
<li>Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogen-tick-host+interactions%3A+Borrelia+burgdorferi+and+TBE+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Zentralbl+Bakteriol%22%5BJournal%5D)">Pathogen-tick-host interactions: Borrelia burgdorferi and TBE virus.</a> Zentralbl Bakteriol. 289, 492-505 (1999).</li>
<li>Jones, L. D., Hodgson, E., Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+virus+transmission+by+tick+salivary+glands%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Enhancement of virus transmission by tick salivary glands.</a> J. Gen. Virol. 70, 1895-1898 (1989).</li>
<li>Labuda, M., Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick-borne+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick-borne viruses.</a> Parasitol. 129, 221-245 (2004).</li>
<li>Socolovschi, C., Mediannikov, O., Raoult, D., Parola, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+tick-borne+bacterial+diseases+in+Europe%5BTitle%5D)+AND+%22Parasite%22%5BJournal%5D)">Update on tick-borne bacterial diseases in Europe.</a> Parasite. 16, 259-273 (2009).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Interactions+that+Enable+Movement+of+the+Lyme+Disease+Agent+from+the+Tick+Gut+into+the+Hemolymph%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Molecular Interactions that Enable Movement of the Lyme Disease Agent from the Tick Gut into the Hemolymph.</a> PLoS Pathog. 7, e1002079(2011).</li>
<li>Piesman, J., Schneider, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+changes+in+Lyme+disease+spirochetes+during+transmission+by+nymphal+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Appl.+Acarol%22%5BJournal%5D)">Dynamic changes in Lyme disease spirochetes during transmission by nymphal ticks.</a> Exp. Appl. Acarol. 28, 141-145 (2002).</li>
<li>Brossard, M., Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick+immunobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick immunobiology.</a> Parasitol. , Suppl 129. S161-S176 (2004).</li>
<li>Machackova, M., Obornik, M., Kopecky, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+salivary+gland+extract+from+Ixodes+ricinus+ticks+on+the+proliferation+of+Borrelia+burgdorferi+sensu+stricto+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Effect of salivary gland extract from Ixodes ricinus ticks on the proliferation of Borrelia burgdorferi sensu stricto in vivo.</a> Folia Parasitol. 53, 153-158 (2006).</li>
<li>Nuttall, P. A., Labuda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick-host+interactions%3A+saliva-activated+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick-host interactions: saliva-activated transmission.</a> Parasitol. 129, 177-189 (2004).</li>
<li>Anguita, J., Hedrick, M. N., Fikrig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+of+Borrelia+burgdorferi+in+the+tick+and+the+mammalian+host%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Adaptation of Borrelia burgdorferi in the tick and the mammalian host.</a> FEMS Microbiol. Rev. 27, 493-504 (2003).</li>
<li>Hovius, J. W., van Dam, A. P., Fikrig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick-host-pathogen+interactions+in+Lyme+borreliosis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick-host-pathogen interactions in Lyme borreliosis.</a> Trends Parasitol. 23, 434-438 (2007).</li>
<li>Dunham-Ems, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+reveals+a+biphasic+mode+of+dissemination+of+Borrelia+burgdorferi+within+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Live imaging reveals a biphasic mode of dissemination of Borrelia burgdorferi within ticks.</a> Journal Clin. Invest. 119, 3652-3665 (2009).</li>
<li>Ribeiro, J. M., Mather, T. N., Piesman, J., Spielman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissemination+and+salivary+delivery+of+Lyme+disease+spirochetes+in+vector+ticks+%28Acari%3A+Ixodidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Dissemination and salivary delivery of Lyme disease spirochetes in vector ticks (Acari: Ixodidae).</a> J. Med. Entomol. 24, 201-205 (1987).</li>
<li>Piesman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+of+Lyme+disease+spirochetes+%28Borrelia+burgdorferi%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Appl.+Acarol%22%5BJournal%5D)">Transmission of Lyme disease spirochetes (Borrelia burgdorferi.</a> Exp. Appl. Acarol. 7, 71-80 (1989).</li>
<li>De Silva, A. M., Fikrig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+migration+of+Borrelia+burgdorferi+in+Ixodes+ticks+during+blood+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Trop.+Med.+Hyg%22%5BJournal%5D)">Growth and migration of Borrelia burgdorferi in Ixodes ticks during blood feeding.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 53, 397-404 (1995).</li>
<li>Horka, H., Cerna-Kyckova, K., Skallova, A., Kopecky, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick+saliva+affects+both+proliferation+and+distribution+of+Borrelia+burgdorferi+spirochetes+in+mouse+organs+and+increases+transmission+of+spirochetes+to+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Med.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Tick saliva affects both proliferation and distribution of Borrelia burgdorferi spirochetes in mouse organs and increases transmission of spirochetes to ticks.</a> Int. J. Med. Microbiol. 299, 373-380 (2009).</li>
<li>Brossard, M., Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunology+of+interactions+between+ticks+and+hosts%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Vet.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Immunology of interactions between ticks and hosts.</a> Med. Vet. Entomol. 11, 270-276 (1997).</li>
<li>Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick+modulation+of+host+immunity%3A+an+important+factor+in+pathogen+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick modulation of host immunity: an important factor in pathogen transmission.</a> Int. J. Parasitol. 29 (99), 851-859 (1999).</li>
<li>Binnington, K. C., Kemp, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+tick+salivary+glands+in+feeding+and+disease+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Role of tick salivary glands in feeding and disease transmission.</a> Adv. Parasitol. 18, 315-339 (1980).</li>
<li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+neutrophil+function+by+two+tick+salivary+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Inhibition of neutrophil function by two tick salivary proteins.</a> Infect. Immun. 77, 2320-2329 (2009).</li>
<li>Montgomery, R. R., Lusitani, D., De Boisfleury Chevance, A., Malawista, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick+saliva+reduces+adherence+and+area+of+human+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Tick saliva reduces adherence and area of human neutrophils.</a> Infect. Immun. 72, 2989-2994 (2004).</li>
<li>Lima, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+infectivity+of+the+Lyme+disease+spirochete+Borrelia+burgdorferi+derived+from+Ixodes+scapularis+salivary+glands+and+midgut%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Differential infectivity of the Lyme disease spirochete Borrelia burgdorferi derived from Ixodes scapularis salivary glands and midgut.</a> J. Med. Entomol. 42, 506-510 (2005).</li>
<li>Severinova, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-inoculation+of+Borrelia+afzelii+with+tick+salivary+gland+extract+influences+distribution+of+immunocompetent+cells+in+the+skin+and+lymph+nodes+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Co-inoculation of Borrelia afzelii with tick salivary gland extract influences distribution of immunocompetent cells in the skin and lymph nodes of mice.</a> Folia Microbiol. 50, 457-463 (2005).</li>
<li>How to pull capillary tubes [Internet]. , benchflydotcom. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.youtube.com/watch?v=2yKHvKCatmM">http://www.youtube.com/watch?v=2yKHvKCatmM</a> (2009).</li>
<li>Labuda, M., Jones, L. D., Williams, T., Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+tick-borne+encephalitis+virus+transmission+by+tick+salivary+gland+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Vet.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Enhancement of tick-borne encephalitis virus transmission by tick salivary gland extracts.</a> Med. Vet. Entomol. 7, 193-196 (1993).</li>
<li>Kariu, T., Coleman, A. S., Anderson, J. F., Pal, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+Rapid+Transfer+and+Localization+of+Lyme+Disease+Pathogens+Within+the+Tick+Gut%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Methods for Rapid Transfer and Localization of Lyme Disease Pathogens Within the Tick Gut.</a> J. Vis. Exp. (48), e2544(2011).</li>
<li>Edwards, K. T., Goddard, J., Varela-Stokes, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Examination+of+the+internal+morphology+of+the+Ixodid+tick+Amblyomma+maculatum+koch%2C+%28Acari%3AIxodidae%29%3B+a+%22How-to%22+pictorial+dissection+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Midsouth+Entomologist%22%5BJournal%5D)">Examination of the internal morphology of the Ixodid tick Amblyomma maculatum koch, (Acari:Ixodidae); a "How-to" pictorial dissection guide.</a> Midsouth Entomologist. 2, 28-39 (2009).</li>
<li>Ledin, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Borreliacidal+activity+of+saliva+of+the+tick+Amblyomma+americanum%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Vet.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Borreliacidal activity of saliva of the tick Amblyomma americanum.</a> Med. Vet. Entomol. 19, 90-95 (2005).</li>
<li>Ribeiro, J. M., Zeidner, N. S., Ledin, K., Dolan, M. C., Mather, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+much+pilocarpine+contaminates+pilocarpine-induced+tick+saliva%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Vet.+Entomol%22%5BJournal%5D)">How much pilocarpine contaminates pilocarpine-induced tick saliva?</a> Med. Vet. Entomol. 18, 20-24 (2004).</li>
<li>Barker, R. W., Burris, E., Sauer, J. R., Hair, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition+of+tick+oral+secretions+obtained+by+three+different+collection+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Composition of tick oral secretions obtained by three different collection methods.</a> J. Med. Entomol. 10, 198-201 (1973).</li>
<li>Burgdorfer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemolymph+test.+A+technique+for+detection+of+rickettsiae+in+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Trop.+Med.+Hyg%22%5BJournal%5D)">Hemolymph test. A technique for detection of rickettsiae in ticks.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 19, 1010-1014 (1970).</li>
</ol>

Nous n&#39;avons rien à communiquer.

La collection de l &#39;hémolymphe tique, les glandes salivaires et la salive est important dans l&#39;étude des tiques transmission d&#39;agents pathogènes, la prévalence, la diffusion, la prolifération, et la persistance dans les deux la tique et l&#39;hôte 6,11-13,20,23,29. Il ya plusieurs façons de disséquer une tique 30,31. Toutefois, lors de la collecte des glandes salivaires, il est essentiel de disséquer la tique proprement les glandes salivaires ne sont pas rompues ou perdu dans les restes...

<table border="1"><tbody><tr><td> Réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td></tr><tr><td> Le peroxyde d&#39;hydrogène </td><td> Pêcheur </td><td> H312-500 </td></tr><tr><td> L&#39;éthanol </td><td> Acros </td><td> 61509-5000 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Bioproduits Boston </td><td> BM-2205 </td></tr><tr><td> Dumont fine pince (3C) </td><td> Pêcheur </td><td> NC9906085 </td></tr><tr><td> Silane lames de microscope traitées </td><td> Bioworld </td><td> 42763007-1 </td></tr><tr><td> Stylo Pap </td><td> Bioworld </td><td> 21750008-1 </td></tr><tr><td> Super Frost, plus des lames de microscope </td><td> Pêcheur </td><td> 12-550-18 </td></tr><tr><td> Pilocarpine </td><td> Sigma </td><td> P6503-5G </td></tr><tr><td> Cocktail d&#39;inhibiteurs de protéase </td><td> Sigma </td><td> P2714 </td></tr><tr><td> # 11 scalpel jetable </td><td> Plume </td><td> 2975 # 11 </td></tr><tr><td> Pâte à modeler non toxique </td><td&gt; Fisher </td><td> S17307 </td></tr><tr><td> Les tubes capillaires </td><td> Chase scientifiques verre, inc </td><td> 40A502 </td></tr></tbody></table>

la salive, les glandes salivaires, et collection hémolymphe de tiques ixodes scapularis

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Les tiques se trouvent dans le monde entier et affligent les humains avec de nombreuses maladies transmises par les tiques. Les tiques sont des vecteurs d&#39;agents pathogènes qui causent la maladie de Lyme et fièvre récurrente à poux (Borrelia spp.), Rocky fièvre pourprée des montagnes (Rickettsia rickettsii), l&#39;ehrlichiose (Ehrlichia chaffeensis et E. equi), l&#39;anaplasmose (Anaplasma phagocytophilum), l&#39;encéphalite (tic- virus de l&#39;encéphalite transmise par), de la babésiose (Babesia spp.), de la fièvre à tiques du Colorado (Coltivirus), et la tularémie (Francisella tularensis) 1-8. Pour être correctement transmis à l&#39;hôte de ces agents infectieux différentielle réguler l&#39;expression génique, interagir avec des protéines de tiques, et migrent à travers la tique 3,9-13. Par exemple, l&#39;agent de la maladie de Lyme, Borrelia burgdorferi, s&#39;adapte à travers l&#39;expression différentielle des gènes aux stades de fête et de la famine de cycle enzootique de la tique 14,15. En outre, comme une tique Ixodes consomme unerepas de sang Borrelia reproduire et migrer de l&#39;intestin moyen dans le hémocèle, où ils se rendent aux glandes salivaires et sont transmis à l&#39;hôte avec la salive expulsées 9,16-19. Comme une tique se nourrit de l&#39;hôte répond généralement avec une forte réponse immunitaire innée et hémostatique 11,13,20-22. En dépit de ces réponses de l&#39;hôte, I. scapularis peut nourrir pendant plusieurs jours en raison salive de la tique contient des protéines qui sont immunomodulateur, des agents lytiques, les anticoagulants, et fibrinolysins pour aider la tique nourrir 3,11,20,21,23. Les activités immunomodulatrices possédés par la salive de tique ou extrait des glandes salivaires (SGE) de faciliter la transmission, la prolifération et la diffusion de nombreux agents pathogènes transmis par les tiques 3,20,24-27. Pour mieux comprendre comment tiques agents infectieux provoquer une maladie, il est essentiel de disséquer les tiques se nourrissent activement et de recueillir la salive des tiques. Ce protocole vidéo montre les techniques de dissection pourla collection de l &#39;hémolymphe et la suppression des glandes salivaires de nourrir activement I. nymphes scapularis après 48 et 72 heures le placement de la souris après. Nous démontrons également le prélèvement de salive d&#39;un adulte femelle I. tique scapularis.

La collection de l &#39;hémolymphe tique infectée, des glandes salivaires et la salive est important d&#39;étudier comment les tiques agents pathogènes causent la maladie. Dans ce protocole, nous montrer comment recueillir les glandes salivaires et l&#39;hémolymphe de se nourrir<em&gt; Ixodes scapularis</em&gt; Nymphes. Nous démontrons également le prélèvement de salive de la femelle<em&gt; I. scapularis</em&gt; Les adultes.

La salive, les glandes salivaires, et Collection hémolymphe de tiques Ixodes scapularis

Les tiques sont présentes dans le monde entier et affectent les humains par de nombreuses maladies transmises par les tiques. Les tiques sont des vecteurs d'agents pathogènes responsables de la maladie de Lyme et de...

L'objectif général de cette procédure est de recueillir des tiques, de l'hémolymphe, des glandes salivaires lymphoïdes et de la salive à partir de tiques Ixodes scapularis en phase d'alimentation active. Cette opération s'effectue tout d'abord en amputant la patte de la tique au niveau de l'articulation distale afin d'expulser l'hémolymphe. Ensuite, les glandes salivaires sont recueillies en disséquant la tique dans une solution saline tamponnée au phosphate, en localisant les glandes salivaires, puis en les transférant dans une nouvelle solution de PBS.La salive est collectée en appliquant de la pilocarpine sur le dos de la tique, en insérant l'ombon de la tique dans un tube capillaire collecteur et en laissant la tique saliver dans le tube. En fin de compte, des résultats peuvent être obtenus montrant les micro-organismes présents dans l'hémolymphe ou les glandes salivaires par immunofluorescence ou par détection de protéines. Interactions protéiques avec les protéines salivaires, entre autres résultats.En général, les personnes novices dans la collecte d'hémolymphe éprouveront des difficultés, car il est délicat d'immobiliser la tique sans rompre le tube digestif moyen, ce qui e

saliva-salivary-gland-hemolymph-collection-from-ixodes-scapularis

Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

La production de tiques élevées élevées en laboratoire est essentielle pour les études sur la biologie des tiques et les interactions tic-pathogène. Ici, nous démontrons un protocole simple pour l'alimentation de tiques immatures qui est rentable et moins stressant pour les souris.

Élevage<em&gt; Ixodes scapularis,</em&gt; La tique à pattes noires: alimentation sur des souris étapes Immature

Nous présentons ici un protocole pour spatialement et temporellement évaluer la présence de la microflore viable dans les tripes de tique à l’aide d’une approche modifiée entier-Montez l’hybridation in situ.

Visualisation du microbiote dans Guts Tick par hybridation entier-Montez In Situ

L’analyse de l’hémolymphe des tiques représente une source importante d’information sur la façon dont certains agents pathogènes causent la maladie et comment les tiques réagissent immunologiquement à cette infection. La présente étude montre comment inoculer les propagules fongiques et recueillir l’hémolymphe des femelles de Rhipicephalus MICROPLUS engorgés.

Divulgation de la collection d’hémolymphe et inoculation des blastospores de Métarhizium dans les tiques de Rhipicephalus MICROPLUS vers les études de pathologie des invertébrés

Dans cette étude, un système d’alimentation pour les stades nymphaux et larvaires de la tique dure a été développé à l’aide d’une capsule attachée à la souris de laboratoire. La capsule d’alimentation est faite à partir de matériaux flexibles et reste fermement attachée à la souris pendant au moins une semaine et permet une surveillance confortable de l’alimentation des tiques.

Un modèle à base de capsules pour l’infestation immature des stades de tiques dures sur des souris de laboratoire

Le présent protocole décrit l’isolement des microARN des glandes salivaires des tiques et des vésicules extracellulaires purifiées. Il s’agit d’une procédure universelle qui combine des réactifs et des fournitures couramment utilisés. La méthode permet également l’utilisation d’un petit nombre de tiques, ce qui donne des microARN de qualité qui peuvent être facilement séquencés.

Isolement de microARN à partir de cultures de glandes salivaires ex vivo et de vésicules extracellulaires

Présenté ici est une méthode pour nourrir les tiques en sang in vitro via un système de membrane artificielle pour permettre l’engorgement partiel ou complet d’une variété de stades de vie des tiques.

Alimentation par membrane artificielle de tiques pour Ixodes scapularis

Nous décrivons une méthode pour recueillir efficacement l’hémolymphe quantifiable de petits arthropodes pour une analyse ultérieure.

Une méthode précise et quantifiable pour recueillir l’hémolymphe de petits arthropodes

Cet article présente la méthodologie d’exposition de l’homme à la larve d’Ixodes scapularis pour la recherche clinique. La technique est relativement simple, tolérable par les volontaires de la recherche, et peut être modifiée en fonction des besoins expérimentaux. De telles recherches impliquant des sujets humains doivent être menées selon des protocoles d’étude clinique approuvés par les autorités réglementaires compétentes.

Un modèle d’exposition expérimentale des humains aux tiques larvaires Ixodes scapularis

Ici, nous présentons un protocole pour collecter de la salive, de l’hémolymphe, des glandes salivaires et de l’intestin moyen, après la dissection d’une tique nourrie individuellement, afin d’étudier la localisation tissulaire spécifique des agents pathogènes transmis par les tiques afin de faire progresser la compréhension de la compétence des vecteurs et des interactions pathogène-microbiome.

Extraction de la salive, de l’hémolymphe, des glandes salivaires et de l’intestin moyen de tiques individuelles (Acari : Ixodidae)

Cette méthode décrit le développement d’un système d’alimentation sanguine in vitro pour tiques intégrant une chambre imprimée en 3D et une membrane en silicone fabriquée en laboratoire. Le système permet l’alimentation artificielle des tiques, permettant un échantillonnage facile à différents stades d’alimentation et utilisant de faibles volumes de sang, fournissant un outil inestimable pour étudier les tiques ixodidés.

Sang de tiques passant par une membrane artificielle sur une chambre imprimée en 3D dans la recherche sur les tiques ixodides

Apprenez à prélever l'hémolymphe, les glandes salivaires et la salive chez Ixodes scapularis. Cette méthode permet d'étudier les interactions pathogènes et la transmission des maladies à tiques.

La salive, les glandes salivaires, et Collection hémolymphe de tiques Ixodes scapularis

Explorer plus de vidéos