Do-It-Yourself dispositif de récupération d'échantillons cryoconservés tombé accidentellement dans les réservoirs de stockage cryogéniques

L’objectif de cette procédure est de faciliter la récupération d’échantillons dans des boîtes cryogéniques et des flacons cryogéniques à partir de réservoirs duo remplis d’azote liquide à l’aide d’un dispositif facile à construire. Pour ce faire, il suffit d’abord de retirer une ou deux grilles de congélation de l’exécuteur pour laisser de l’espace pour manœuvrer et d’insérer l’appareil verticalement dans l’exécuteur. La deuxième étape consiste à racler doucement le bas de l’exécuteur avec l’appareil.

Ensuite, tirez l’appareil à la verticale le long des parois de l’armoire Pour retirer la boîte de congélation du réservoir, la dernière étape consiste à saisir la boîte récupérée au fond de l’armoire et à replacer les grilles de congélation retirées. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes telles que la décantation, la barre pleine d’azote liquide, est qu’elle offre une alternative facile, sûre et rapide, qui préserve l’intégrité de l’échantillon et peut être réalisée par un seul opérateur. Pour commencer l’assemblage du dispositif tolérant à la cryogénisation, utilisez une pince pour redresser un côté d’une attache solide à trois côtés afin de former une attache solide LHA.

Comme on le voit ici, les dimensions de l’attache solide peuvent être sélectionnées en fonction du diamètre du cou de l’exécutant. Deux de ces attaches solides doivent être faites pour permettre à l’appareil de récupérer des boîtes cryogéniques de cinq pouces et demi sur cinq pouces et demi. Fixez-les avec une sangle TST à attache solide à l’aide d’un boulon de couronne, d’une rondelle d’écrou et d’une vis pour former la base de la pelle cryogénique.

L’appareil devrait maintenant apparaître comme on le voit ici. Maintenant, à l’aide d’une plaque fendue, alignez les fentes sur la sangle en T de l’attache solide avec les fentes à une extrémité de la plaque fendue. Fixez ensuite les deux ensemble avec des écrous et des boulons Hillman.

Percez des trous pour la fixation si la plaque fendue et les attaches solides n’ont pas de trous pré-percés. Si vous le souhaitez, une poignée peut être formée en pliant l’autre extrémité de la plaque fendue et en l’enveloppant de mousse. Pour mieux saisir l’appareil, assurez-vous de retirer la mousse avant de couler l’eau.

Le dispositif de récupération DIY tolérant à la cryo peut également être adapté pour la récupération de flacons cryogéniques. Cela implique de remplacer la base plate par une passoire en acier inoxydable modifiée pour retirer les flacons du liquide. Pour commencer l’assemblage, dévissez d’abord les écrous et les boulons de la couronne, en fixant la sangle en T du pneu solide à la plaque fendue.

Ensuite, avant de fixer la passoire en acier inoxydable à la plaque fendue, pliez doucement le col de la passoire à l’aide d’une pince pour orienter la base à un angle qui ressemble à une louche. Si la crépine utilisée est livrée avec une lèvre, utilisez une pince pour plier la lèvre vers le bas. Cela facilitera les manœuvres avec l’appareil.

Alignez le trou sur la poignée de la crépine avec les trous sur la plaque fendue et fixez la crépine à l’aide d’écrous et de boulons Hillman. Percez des trous si la crépine n’est pas livrée avec des trous pré-percés. Pour commencer à récupérer les boîtes cryogéniques d’un acteur, assurez-vous d’abord de mettre des gants cryogéniques.

Retirez ensuite une ou deux grilles de congélation de l’appareil pour laisser de la place pour manœuvrer avec l’appareil. Ensuite, utilisez le dispositif de récupération de bricolage vertical tolérant à la cryogénicité équipé de la base ttra à attache solide pour gratter doucement le long du fond du faiseur et recueillir la boîte, tomber dans le fond du réservoir du faiseur. Ensuite, tirez l’appareil à la verticale le long des parois de l’armoire pour retirer la boîte de congélation du réservoir.

Notez que l’appareil doit être tenu verticalement et tiré vers le haut pour éviter que la boîte ne glisse à nouveau dans l’exécuteur. Pour récupérer des flacons cryogéniques, utilisez la cuillère cryogénique équipée d’une passoire pour racler doucement le fond de l’actionneur comme pour la récupération des boîtes cryogéniques, tirez l’appareil à la verticale et saisissez les flacons collectés dans la passoire. L’un des principaux défis des études d’expression génique est que la qualité de l’ARN dépend des conditions de stockage des échantillons de tissus congelés et de l’ARN extrait.

Cette figure montre l’effet de la manipulation de l’échantillon sur l’intégrité de l’ARN total L’ARN total de la même source tissulaire a été soumis à une manipulation différente de l’échantillon avant l’expérience intact total, le taux de préparation de l’ARN montre clairement 28 s et 18 s ribosomal, bandes d’ARN avec la bande d’ARN ribosomique 28 s, environ deux fois plus intense que la bande d’ARN ribosomique 18 s. C’est une indication que l’ARN est intact. Les couloirs trois et quatre représentent des échantillons présentant une dégradation significative due à une décongélation partielle répétée par des prélèvements à court terme auprès de l’exécutant, modélisant ainsi un stockage à long terme avec décantation périodique en raison de la nécessité de récupérer les flacons tombés sur des boîtes.

Cependant, les échantillons stockés dans le service d’exécution à l’aide de l’appareil de bricolage et donc pas de décongélation partielle contiennent de l’ARN intact dans la deuxième voie. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de récupérer des échantillons du dvar rempli d’azote liquide sans avoir besoin de le décanter.