Name: Filtres laine de verre pour concentration des virus dorigine hydrique et agricole des agents pathogènes zoonotiques (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: Apprenez à construire des filtres en laine de verre pour concentrer efficacement les agents pathogènes d'origine hydrique, y compris les virus, bactéries et protozoaires. Cette méthode économique facilite la détection des pathogènes zoonotiques.

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Nous tenons à remercier William T. Eckert pour raconter la vidéo. Développement du protocole de laine de verre a fait partie de l&#39;eau du Wisconsin et de première instance de la santé pour les risques entériques (WAHTER étude), financés par des États-Unis EPA Grant STAR R831630. Échantillons de l&#39;Alaska ont été recueillis par A. Reeves, A. Ramey, et B. Meixell avec le soutien financier de l&#39;USGS. Toute utilisation des noms commerciaux, le produit, ou le cabinet est à des fins descriptives seulement et n&#39;implique pas l&#39;approbation par le Gouvernement des États-Unis.

1. Préparation de la laine de verre <ol><li> Avant et après avoir effectué chaque lot de filtres, la stérilisation de la zone de travail avec une solution javellisée à 10%. </li><li> Mettez des gants et une blouse. Stériliser un seau à l&#39;autoclave à 121 ° C et 15 psi pendant au moins 20 minutes. Placez la laine de verre dans le seau stérile. </li><li> Saturer la laine de verre avec de l&#39;eau par osmose inverse et laisser tremper pendant 15 minutes. </li><li> Égoutter l&#39;eau par osmose inverse dans le seau. </li><li> Saturer la laine de verre avec 1 M de HCl et laissez tremper pendant 15 minutes. </li><li> Égoutter le HCl 1 M dans le seau. </li><li> Rincer la laine de verre avec de l&#39;eau par osmose inverse. </li><li> Mélanger soigneusement. </li><li> Vérifiez le pH en utilisant du papier pH et répétez l&#39;eau par osmose inverse de rinçage jusqu&#39;à ce qu&#39;un pH neutre est atteint. </li><li> Décanter l&#39;eau de rinçage. </li><li> Saturer la laine de verre avec 1 M de NaOH et laisser tremper pendant 15 minutes. </li><li> Égoutter le NaOH 1 M dans le seau. </li><li> Répéter l&#39;osmose inverse de rinçage jusqu&#39;à ce qu&#39;un pH neutre soit atteinte. </li><li> Décanter l&#39;eau de rinçage. </li><li> Au lieu d&#39;un seau, une rondelle de laine de verre peuvent être construits, ce qui est de conception similaire à un lave-verres de pipette (Figure 1). </li><li> Couvrir la laine de verre complètement avec phosphate stérile (PBS) ajusté à pH 6,8. </li><li> Utilisez la laine de verre préparée immédiatement ou conserver à 4 ° C. Il peut être stocké pendant jusqu&#39;à deux semaines. Avant d&#39;utiliser, assurez-vous que le pH est neutre car il va augmenter au fil du temps. Si le pH n&#39;est pas neutre, re-rincer avec de phosphate stérile saline tamponnée (pH 6,8). </li></ol> 2. Montage du filtre de laine de verre <ol><li> Percer un trou 11/16 de pouce dans les capuchons de PVC et de fils de prise de sorte que les raccords mâles nylon adaptateur peut être vissées dans les bouchons. Cette étape est nécessaire seulement pour la première assemblée. Par la suite, les bouchons peuvent être utilisés pendant des années. Appliquez du Téflonruban adhésif pour les fils de nylon et raccords à vis pour les bouchons. </li><li> Emballez le tuyau en PVC avec des petits morceaux de laine de verre. Utilisez un piston en métal, comme une soupape de moteur de voiture, d&#39;emballer serré. Emballage ne nécessite pas une grande force. Pack assez serré pour que la laine de verre reste en place et les canaux ne font pas. Toutefois, ne placez pas si étroitement de l&#39;eau ne peut s&#39;écouler à travers le filtre. Lorsque emballés de manière appropriée, un débit de 4 à 5 litres par minute devrait pouvoir être atteint lorsque le filtre est attaché à des robinets d&#39;eau avec des pressions comprises entre 40-60 psi. Pour la taille des tuyaux en PVC spécifiée par ce protocole, environ 85 grammes lavé et laine de verre rempli est utilisé par tuyau. Tare du tube vide en PVC sur un équilibre chargement par le haut et le bloc avec de la laine de verre lavé jusqu&#39;à ce que la masse tuyau augmente de 85 grammes. </li><li> Insérez maille de polypropylène dans les bouchons en PVC avec raccords mâles en nylon adaptateur. </li><li> Appliquer du ruban de téflon pour les parties filetées du tuyau en PVC. </li><li> Visser les capuchons en PVC à l&#39;p PVCipe et l&#39;étiquette d&#39;une extrémité de filtre à l&#39;afflux et l&#39;autre extrémité l&#39;écoulement. Ceci est important plus tard pour l&#39;étape d&#39;élution. Par quel bout est marqué d&#39;entrée n&#39;a pas d&#39;importance. </li><li> Poussez 60 ml de phosphate stérile saline tamponnée (pH = 6,8) dans le filtre à l&#39;aide d&#39;un cathéter basculé seringue. Excédent sortira extrémité opposée. </li><li> Wrap se termine bien avec du Parafilm pour éviter toute fuite. Les filtres peuvent être stockées jusqu&#39;à 30 jours à 4 ° C. </li></ol> 3. D&#39;échantillonnage <ol><li> Stériliser tube utilisé pour l&#39;échantillonnage par recirculation ou par immersion articles pendant 30 minutes dans 0,525% (ie, une solution à 10% d&#39;eau de Javel standard) NaClO. Suivez ce en drainant la solution d&#39;hypochlorite et de neutraliser avec du thiosulfate de sodium à 0,05%, en ajoutant 25 ml d&#39;un stock anhydre solution à 2% de thiosulfate de sodium à un litre d&#39;eau par osmose inverse. </li><li> Pour l&#39;échantillon d&#39;eau avec un pH supérieur à 7,5, ajuster le pH à entre 6,5 et 7,0 avec HCl. La concentration de HCl peut varier de 0,25M à 1 M. Quatre litres HCl 0,5 M est généralement suffisant pour deux échantillons de 800 litres, selon le pH ambiant de l&#39;eau et la capacité de mémoire tampon. Injecter HCl lors de l&#39;échantillonnage à l&#39;aide d&#39;une pompe péristaltique ou Venturi (Figure 2). Ajuster la vitesse de la pompe ou l&#39;ouverture à venturi pour obtenir le pH cible. Mesurer le pH à la sortie de conduit échantillon en utilisant un pH-mètre champ. </li><li> Utilisez un préfiltre si les sabots de laine de verre filtre de l&#39;eau avec une turbidité élevée. (Spécifications pour le préfiltre et son logement sont dans la ligne la liste des matériaux.) Parce que les agents pathogènes peuvent être attachés à des particules piégées par le préfiltre doit être élue avec le filtre de laine de verre (voir ci-dessous). </li><li> Régler le débit à entre 2 et 4 litres par minute. Volumes d&#39;échantillons typiques sont comprises entre 200 et 1.500 litres. </li><li> Débrancher le filtre de laine de verre et le ranger dans un sac en plastique stérile à 4 ° C pendant jusqu&#39;à 48 heures. </li></ol> 4. Élution <ol><li> Apposer le filtre de laine de verre à un anneautenir avec l&#39;extrémité d&#39;entrée d&#39;échantillon pointant vers le bas dans une bouteille en polypropylène. Éluer opposé de la direction d&#39;écoulement de l&#39;échantillon. </li><li> Pousser 80 ml d&#39;extrait de boeuf stérile 3% en 0,05 M de glycine ayant un pH de 9,5 dans le filtre. </li><li> Attendre 15 minutes. </li><li> Pousser un autre ml de l&#39;extrait de boeuf 80 stérile 3% en 0,05 M de glycine ayant un pH de 9,5 dans le filtre. </li><li> Poussez l&#39;air approfondie du filtre jusqu&#39;à ce que la mousse sort de l&#39;entrée du filtre. </li><li> Ajuster le pH éluat à entre 7,0 et 7,5 avec HCl 1M. </li><li> Éluat Conserver à 4 ° C pendant jusqu&#39;à 24 heures ou à -20 ° C pendant de longues périodes de temps. </li><li> Éluer le préfiltre si elle est utilisée. Dévissez la partie supérieure de la cartouche du logement et verser toute l&#39;eau résiduelle à l&#39;intérieur du boîtier tout en maintenant le préfiltre en place avec des mains gantées stériles. </li><li> Retirez le préfiltre de la cartouche du logement et de le glisser dans un 15 &quot;x 6&quot; sac zip-lock. </li><li> Verser 200 ml d&#39;extrait de boeuf stérile 3% dans 0,05 M glycine avec un pH de 9,5 dans le sac, fermer hermétiquement avec la fermeture à glissière. </li><li> Inverser le préfiltre sac à plusieurs reprises afin d&#39;assurer la surface entière entre en contact avec l&#39;extrait de boeuf. </li><li> Attendez 15 minutes, à l&#39;occasion d&#39;inversion et de masser le préfiltre en sac. </li><li> Ouvrez le zip-lock. Saisir le sac autour du préfiltre étroitement à retirer le plus d&#39;extrait de boeuf autant que possible et tirer le préfiltre avec des mains gantées stériles,. </li><li> Verser l&#39;éluat extrait de boeuf dans une bouteille en polypropylène. </li><li> Ajuster le pH éluat à entre 7,0 et 7,5 avec HCl 1M. </li><li> Éluat Conserver à 4 ° C pendant jusqu&#39;à 24 heures ou à -20 ° C pendant de longues périodes de temps. L&#39;éluat préfiltre peut être analysé séparément pour les agents pathogènes ou combiné avec l&#39;éluat filtre de laine de verre. </li></ol> 5. Les résultats représentatifs <table border="1"><tbody><tr><td> Des agents pathogènes </td><td> Niveau turbidité de l&#39;eau (NTU) un </td><td> Montant ensemencée / L b, c, d </td><td> % De récupération ± 1 SD </td><td> Essais Nombre indépendants </td></tr><tr><td> Entérovirus-poliovirus Sabin III </td><td> 0.5 </td><td> 500 </td><td> 81% ± 11 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Entérovirus poliovirus Sabin III </td><td> 0.5 </td><td> 5000 </td><td> 67% ± 12 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Entérovirus-poliovirus Sabin III </td><td> 215 </td><td> 500 </td><td> 59% ± 32 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Entérovirus-poliovirus Sabin III </td><td> 215 </td><td> 5000 </td><td> 38% ± 22 </td><td> 6 </td></tr><tr><td> Entérovirus-poliovirus Sabin III </td><td> 447 </td><td> 500 </td><td> 56% ± 18 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Entérovirus-poliovirus Sabin III </td><td> 447 </td><td> 5000 </td><td> 63% ± 37 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 0.5 </td><td> 5 </td><td> 38% ± 14 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 0.5 </td><td> 50 </td><td> 53% ± 19 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Pleurerptosporidium parvum </td><td> 215 </td><td> 5 </td><td> 40% ± 16 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 215 </td><td> 50 </td><td> 30% ± 6 </td><td> 6 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 447 </td><td> 5 </td><td> 33% ± 13 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 447 </td><td> 50 </td><td> 28% ± 11 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 0.5 </td><td> 5 </td><td> 29% ± 24 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 0.5 </td><td> 500 </td><td> 56% ± 16 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 215 </td><td> 5 </td><td> 32% ± 24 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td&gt; <td> 215 </td><td> 500 </td><td> 34% ± 11 </td><td> 6 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 447 </td><td> 5 </td><td> 34% ± 18 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 447 </td><td> 500 </td><td> 31% ± 24 </td><td> 8 </td></tr></tbody></table><ol class="lalpha"><li> Unité de turbidité néphélométrique </li><li> Les entérovirus énumérés par qPCR que des copies génomiques / L </li><li> C. parvum énumérés par immunofluorescence comme oocystes </li><li> S. enterica énumérés par la culture comme formant des colonies-unités </li></ol> Tableau 1. La concentration de la laine de verre avec des turbidités d&#39;eau variables et des densités de pathogènes. <table border="1"><tbody><tr><td> Des agents pathogènes </td><td> Lieu d&#39;échantillons d&#39;eau </td><td> Montant ensemencée / L, un </td><td> Reco%<html> très </td></tr><tr><td> Grippe aviaire H5N2 </td><td> Sundi lac, Anchorage arrondissement </td><td> 2500 </td><td> 42,9% </td></tr><tr><td> Grippe aviaire H5N2 </td><td> Minto Flats, Fairbanks North Star Borough </td><td> 2500 </td><td> 36,7% </td></tr><tr><td> Grippe aviaire H5N2 </td><td> Portage Valley, Anchorage arrondissement </td><td> 2500 </td><td> 7,8% </td></tr><tr><td> Grippe aviaire H5N2 </td><td> Potter Marsh, Anchorage arrondissement </td><td> 2500 </td><td> 41,5% </td></tr><tr><td> Grippe aviaire H5N2 </td><td> Willow Lake, au Yukon-Koyukuk arrondissement </td><td> 2500 </td><td> 15,5% </td></tr></tbody></table><ol class="lalpha"><li> Mesuré par qPCR que des copies génomiques / L </li></ol> Tableau 2. Concentration de laine de verre du virus de la grippe aviaire en utilisant l&#39;eau provenant de cinq sites en Alaska. les/ftp_upload/3930/3930fig1.jpg &quot;alt =&quot; Figure 1 &quot;/&gt; Figure 1. Schéma de la rondelle de laine de verre. Cela peut être utilisé à la place d&#39;un seau, un gain de temps de rinçage. Le concept est semblable à une rondelle pipette en verre. <img src="/files/ftp_upload/3930/3930fig2.jpg" alt="Figure 2" /> Figure 2. De filtration de laine de verre avec injection d&#39;acide par une pompe péristaltique. Noter la &quot;T&quot; de connecteur lorsque le tuyau de pompe présente acide dans la ligne d&#39;échantillonnage entre le robinet d&#39;eau et d&#39;un filtre en laine de verre. ajustement du pH n&#39;est nécessaire que si l&#39;eau prélevée a un pH&gt; 7,5. Filtres de laine de verre sont efficaces en concentrant les agents pathogènes de l&#39;eau avec un large éventail de niveaux de turbidité et de la densité des agents pathogènes (tableau 1). Pour tester cette hypothèse, 20 litres d&#39;eau du robinet déchlorée a été mélangé avec du limon du sol séché loam (0, 1,27, ou 2,75 g / L) pour atteindre le niveau désiré de la turbidité et ensuite ensemencé avec des agents pathogènes à des densités différentes. L&#39;eaua été adoptée à travers un filtre de laine de verre, les agents pathogènes concentrés dans l&#39;éluat ont été dénombrés, et cette valeur a été le numérateur dans le calcul de récupération pour cent. La quantité d&#39;agents pathogènes dans l&#39;eau ensemencés, qui est, le dénominateur du calcul de récupération pour cent, a été déterminée d&#39;abord par l&#39;ensemencement des agents pathogènes dans un éluat négatif, alors l&#39;énumération des agents pathogènes. L&#39;éluat négative a été préparé par le passage d&#39;un échantillon de 20 litres non ensemencées à travers un filtre et d&#39;élution. Quantifier les agents pathogènes ensemencées dans un éluat négative évite des différences de dénombrement des agents pathogènes qui pourraient résulter de différences matrice créée par le filtre de laine de verre. L&#39;importance de cette étape lors de la quantification des agents pathogènes par PCR en temps réel est discuté dans Lambertini et al. 3. Un échantillon de 20 litres de contrôle négatif a été concentré par filtration de laine de verre afin de déterminer n&#39;y avait pas présente natif agents pathogènes qui pourraient confondre le calcul de récupération pour cent. Un 10 um nominale des pores de taille pré-filtre wtel qu&#39;il est utilisé lorsque le niveau de turbidité était ≥ 215 NTU. Poliovirus a été quantifiée par PCR quantitative en temps réel en utilisant la concentration secondaire et procédures d&#39;extraction des acides nucléiques et des amorces et la sonde décrite dans Lambertini et al. 3. Cryptosporidium parvum a été quantifiée dans le volume de l&#39;échantillon concentré final (FCSV) créée par la procédure de concentration secondaire pour le poliovirus . Les oocystes ont été visualisés par immunofluorescence (MERIFLUOR Cryptosporidium et Giardia Kit de détection, Meridian Life Science, Inc, Cincinnati, OH). Salmonella enterica a été quantifiée dans le FCSV par placage sur une gélose XLD (Remel, Lenexa, KS) et le comptage des colonies de formage unités. Filtres de laine de verre sont efficaces dans la concentration des virus de la grippe aviaire (tableau 2). Faible virus de la grippe aviaire pathogène (H5N2) a été ensemencée dans l&#39;eau à plusieurs endroits en Alaska et dans la récupération pour cent calculé tel que décrit Above. La concentration secondaire et les procédures d&#39;acides nucléiques ont été réalisées comme pour le poliovirus, le virus a été quantifiée par PCR en temps réel en utilisant les amorces et les sondes décrites dans Spackman et al 4.

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</ol>

Pas de conflits d&#39;intérêts déclarés.

Filtres de laine de verre ont été utilisés par plusieurs équipes de recherche de se concentrer 3,5,6 virus entériques humains à partir d&#39;une variété de sources d&#39;eau comme l&#39;eau potable a terminé en 7, les eaux souterraines 8,9, 10 eaux de surface, eau de mer 11, des eaux usées 12, et ruissellement des terres agricoles 13. Nous rapportons ici les filtres sont également efficaces dans la concentration du virus de la grippe aviaire ainsi que les...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom de réactif ou d&#39;un élément </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td></tr><tr><td> Acide chlorhydrique </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> A144-500 </td></tr><tr><td height="24"> L&#39;hydroxyde de sodium </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> BP359-212 </td></tr><tr><td> Phosphate Buffered Saline Le chlorure de sodium Phosphate de potassium dibasique- Phosphate de potassium monobasique- </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td><html> BP358-212 BP363-500 BP362-500 </td></tr><tr><td> L&#39;hypochlorite de sodium à savoir, eau de Javel </td><td> <a href="http://www.clorox.com" target="_blank">Le Co. Clorox</a> </td><td></td></tr><tr><td> Thiosulfate de sodium anhydre </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> S 475-212 </td></tr><tr><td> Extrait de bœuf, desséchée </td><td> <a href="http://www.bd.com" target="_blank">Becton, Dickinson and Company</a> </td><td> 211520 </td></tr><tr><td> Glycine </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> G46-500 </td></tr><tr><td> La laine de verre sodocalcique huilé Ou R-11 d&#39;isolation en fibre de verre sans revêtement </td><td> <a href="http://www.isover.com" target="_blank">Isover</a> <html> ref = &quot;http://www.jm.com&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; Johns Manville </td><td> Bourré 725 QN </td></tr><tr><td> Polypropylène maille </td><td> <a href="http://www.industrialnetting.com" target="_blank">Industrielle de compensation</a> </td><td> xN4510 </td></tr><tr><td> 2 &quot;x4&quot; Sch 80 mamelon tuyau en PVC fileté </td><td> <a href="http://www.grainger.com" target="_blank">Grainger</a> </td><td> 6MW35 </td></tr><tr><td> 2 &quot;PVC SCH 40 bouchon </td><td> <a href="http://www.grainger.com" target="_blank">Grainger</a> </td><td> 5WDW3 </td></tr><tr><td> Homme de montage en nylon adaptateur (1/2 &quot;x1 / 2&quot;) </td><td> <a href="http://www.usplastic.com" target="_blank">Etats-Unis en plastique Corp</a> </td><td> 62178 </td></tr><tr><td> Les bouteilles d&#39;échantillonnage pour éluat-1 litre </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> 03-313-4F </td></tr><tr><td> 60 ml seringue </td><td>&quot;Http://www.fishersci.com&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; Fisher Scientific </td><td> NC9661991 </td></tr><tr><td> bandes de pH </td><td> <a href="http://www.whatman.com" target="_blank">Whatman</a> </td><td> 2614 991 </td></tr><tr><td> Préfiltre, polypropylène, 10 pouces cartouche, 10 pm </td><td> McMaster-Carr </td><td> 4411K75 </td></tr><tr><td> Préfiltre de logement </td><td> Cole-Parmer </td><td> S-29820-10 </td></tr></tbody></table>

filtres laine de verre pour concentration des virus d&#39;origine hydrique et agricole des agents pathogènes zoonotiques

Glass Wool Filters for Concentrating Waterborne Viruses and Agricultural Zoonotic Pathogens

La première étape clé dans l&#39;évaluation des niveaux d&#39;agents pathogènes dans l&#39;eau contaminée présumée est la concentration. Les méthodes de concentration ont tendance à être spécifique à un groupe particulier pathogène, par exemple aux États-Unis de l&#39;environnement Méthode Agence de protection de 1623 pour Giardia et Cryptosporidium 1, ce qui signifie de multiples méthodes sont nécessaires si le programme d&#39;échantillonnage vise plus d&#39;un groupe pathogène. Un autre inconvénient des méthodes actuelles est l&#39;équipement peut être compliqué et coûteux, par exemple la méthode VIRADEL avec la cartouche du filtre à 1MDS pour concentrer les virus 2. Dans cet article, nous décrivons comment construire des filtres de laine de verre pour la concentration des agents pathogènes d&#39;origine hydrique. Après élution de filtre, le concentré se prête à une étape de concentration seconde, comme la centrifugation, suivie par la détection des pathogènes et le dénombrement par des méthodes culturales ou moléculaire. Les filtres ont plusieurs avantages. La construction est simple et les filtres peuvent être construits à unetaille ny pour satisfaire aux exigences spécifiques d&#39;échantillonnage. Les pièces du filtre sont peu coûteux, permettant de recueillir un grand nombre d&#39;échantillons, sans de graves répercussions sur le budget du projet. Grands volumes d&#39;échantillons (100S à 1000 s L) peut être concentrée en fonction du taux de colmatage de turbidité de l&#39;échantillon. Les filtres sont faciles à transporter et avec un équipement minimal, comme une pompe et d&#39;un débitmètre, ils peuvent être mis en œuvre dans le domaine de l&#39;échantillonnage de l&#39;eau potable traitée, l&#39;eau de surface, eaux souterraines, et le ruissellement agricole. Enfin, la filtration de la laine de verre est efficace pour concentrer une variété de types d&#39;agents pathogènes de sorte qu&#39;un procédé est nécessaire. Nous rapportons ici l&#39;efficacité des filtres à base d&#39;eau en concentrant l&#39;entérovirus humain, S almonella enterica, Cryptosporidium parvum, et le virus de la grippe aviaire.

Filtres de laine de verre ont été utilisés pour concentrer les virus d&#39;origine hydrique par un certain nombre de groupes de recherche à travers le monde. Ici, nous montrons une approche simple pour la construction de filtres de laine de verre et de démontrer les filtres sont également efficaces dans la concentration d&#39;origine hydrique, les bactéries pathogènes viraux et protozoaires.

Filtres laine de verre pour concentration des virus d&#39;origine hydrique et agricole des agents pathogènes zoonotiques

La première étape clé pour évaluer les niveaux de pathogènes dans une eau suspectée d'être contaminée est la concentration. Les méthodes de concentration ont tendance à être spécifiques à un...

L'objectif général de cette procédure est de concevoir un filtre peu coûteux et efficace permettant de concentrer une grande variété de pathogènes présents dans l'eau à partir de grands volumes d'eau. La fabrication du filtre consiste d'abord à rincer la laine de verre, à la laver avec un acide puis une base, puis à rincer à nouveau la laine jusqu'à obtenir un pH neutre. Ensuite, la laine de verre est rincée dans une solution saline tamponnée au phosphate.À l'étape suivante, la laine de verre est compactée dans un tube en PVC afin de former le filtre en laine de verre. Après avoir utilisé le filtre pour l'échantillonnage de l'eau, une étape d'éluage est réalisée. L'échantillon peut alors être conservé, concentré davantage ou analysé pour détecter des agents pathogènes par des méthodes culturales ou moléculaires.Les maladies hydriques constituent une menace importante pour la santé publique. La transmission mondiale de maladies peut résulter de la consommation d'eau contaminée ou d'activités récréatives en milieu aquatique. Une approche pour évaluer la qualité sanitaire de l'eau consiste à la tester directement à la recherche de pathogènes responsables de maladies.Il existe plusieur

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Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Le taux de rotation du virus dans les systèmes marins et d'eau douce peut être estimée par une réduction et la technique ne se reproduise. Les données permettent aux chercheurs de déduire les taux de mortalité microbienne virus de médiation dans les systèmes aquatiques.

Estimation des taux de production de virus dans les systèmes aquatiques

Ce protocole décrit l'utilisation d'un flux de fibres creuses système d'ultrafiltration tangentielle concentration de l'échantillon et une dissociation de chaleur étapes alternatives pour la détection de...

Une méthode mise à jour EPA 1623 qui utilise tangentielle débit à fibres creuses d&#39;ultrafiltration et de chaleur étapes de dissociation pour la détection de voie d&#39;eau<em&gt; Cryptosporidium</em&gt; Et<em&gt; Giardia spp.</em

Une approche a été développée pour identifier les conditions optimales de concentration virale pour des échantillons d’eau de petit volume à l’aide de pointes d’adénovirus humains. Les techniques décrites ici sont utilisées pour identifier les paramètres de concentration d’autres cibles virales et appliquées à l’expérimentation de concentration virale à grande échelle.

Une procédure de petit volume pour la concentration virale de l&#39;eau

La méthode EPA 1615 utilise un filtre électropositif pour concentrer les entérovirus et les norovirus dans l’environnement et les eaux potables. Ce manuscrit décrit la procédure de collecte d’échantillons pour les analyses de la méthode 1615.

Méthode EPA 1615. Mesure de entérovirus et Norovirus présence dans l&#39;eau par Culture et RT-qPCR. I. Prélèvement des échantillons de virus

Un anion exchange résines méthode, adaptée au liquide impingement base bioaérosols prélèvement d’échantillons de virus est démontrée. Lorsqu’il est couplé avec la détection moléculaire en aval, la méthode permet une détection facile et sensible des virus de bioaérosols.

Détection des virus de bioaérosols à l’aide de résine échangeuse d’anions

Les bactéries sécrètent des vésicules extracellulaires (VE) de taille nanométrique transportant des molécules biologiques bioactives. La recherche sur les véhicules électriques se concentre sur la compréhension de leur biogenèse, de leur rôle dans les interactions microbes-microbes et hôte-microbe et des maladies, ainsi que de leurs applications thérapeutiques potentielles. Un flux de travail pour l’isolation évolutive des véhicules électriques de diverses bactéries est présenté pour faciliter...

Isolement et purification évolutifs de vésicules extracellulaires à partir d’Escherichia coli et d’autres bactéries

De nombreuses nouvelles séquences pseudo-virales ont été trouvées chez les moustiques en raison de l’utilisation intensive des technologies de séquençage. Nous fournissons une procédure efficace pour isoler et amplifier les virus à l’aide de lignées cellulaires de vertébrés et de moustiques, qui pourrait servir de base à de futures études sur les virus associés aux moustiques, y compris les virus transmis par les moustiques et les virus spécifiques aux moustiques.

Isolement du virus associé aux moustiques à partir de moustiques collectés sur le terrain

La concentration de virus à partir d’échantillons d’eau et d’eaux usées dans l’environnement est une tâche difficile, effectuée principalement pour l’identification et la quantification des virus. Bien que plusieurs méthodes de concentration virale aient été développées et testées, nous démontrons ici l’efficacité de l’ultrafiltration et de la floculation du lait écrémé pour les virus à ARN avec différents types d’échantillons.

Concentration de particules virales provenant d’échantillons d’eau et d’eaux usées prélevés dans l’environnement par floculation et ultrafiltration du lait écrémé

Nous décrivons ici des méthodes d’échantillonnage dans les zones euphotiques des écosystèmes marins et d’eau douce pour isoler les cyanophages (et leurs hôtes) et des processus de post-échantillonnage qui enrichissent les génotypes uniques et caractérisent la dynamique d’interaction virus-hôte.

Échantillonnage environnemental des microbes photosynthétiques et de leurs virus : du champ au laboratoire

Ici, nous présentons une étude pour évaluer l’efficacité antivirale des revêtements de surface à base de cuivre et d’argent sur les filtres à air. En utilisant une chambre à bioaérosol et un bactériophage Phi6, cette méthode quantifie l’inactivation virale et l’efficacité de filtration mécanique pour des technologies d’air intérieur auto-désinfectantes.

Évaluation de l’effet des filtres et préfiltres recouverts sur l’infectiosité et la concentration du virus Phi6 en aérosol

Apprenez à construire des filtres en laine de verre pour concentrer efficacement les agents pathogènes d'origine hydrique, y compris les virus, bactéries et protozoaires. Cette méthode économique facilite la détection des pathogènes zoonotiques.

Filtres laine de verre pour concentration des virus d'origine hydrique et agricole des agents pathogènes zoonotiques

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