Développement de la bronchiolite oblitérante dans un modèle murin de transplantation pulmonaire orthotopique

L’objectif global de cette procédure est d’établir un modèle littératif de bronchiolite en miroir de la transplantation pulmonaire orthotopique. Pour ce faire, on prélève d’abord le poumon du donneur sur une souris C 57 BL 10. La deuxième étape consiste à préparer le brassard de la bronche, de l’artère pulmonaire et de la veine pour l’anastomose.

Ensuite, le poumon du donneur préparé est transplanté chez la souris receveuse C cinq sept BL six. La dernière étape consiste à observer la souris transplantée pendant 21 ou 28 jours après la transplantation. En fin de compte, l’analyse histologique est utilisée pour montrer les lésions littératives de bronchiolite dans le poumon transplanté.

Le principal avantage de ce modèle par rapport au modèle de transplantation hétérotopique des voies respiratoires est que le modèle actuel imite la condition humaine. En général, les individus novices dans cette méthode auront du mal car les structures supérieures chez les souris sont très délicates et plus susceptibles de se blesser car les masses seulement un dixième de la masse du rat Placez la souris donneuse dans une chambre de détention scellée et induisez une anesthésie avec 5 % de fluor. Ensuite, utilisez le cathéter intraveineux de calibre 20 pour intuber la souris ou Trae, puis placez-le sur un ventilateur pour rongeurs.

Maintenez l’anesthésie avec un à 2 % de fluor. Après vous être assuré que la souris est complètement anesthésiée par l’absence de réponse au mouvement de la queue et au pincement des orteils, placez-la en position couchée et préparez l’abdomen avec de l’alcool à 70 %. Maintenant, coupez la peau recouvrant l’abdomen avec une paire de ciseaux et exposez la musculature abdominale.

Ensuite, effectuez une sternotomie lapar en faisant d’abord une incision médiane à travers la paroi abdominale, puis en coupant transversalement à travers le sternum, éloignez les intestins et localisez la veine cave inférieure, qui se trouve juste en dessous du foie. Injectez de l’héparine à 100 microlitres par kilogramme dans la VCI. Ensuite, tirez vers le bas le ligament falciforme du foie et coupez le diaphragme le long de l’attache causale ventrale vers la colonne vertébrale.

Coupez les deux côtés de la paroi thoracique jusqu’au cou afin d’exposer la cavité thoracique. Coupez la cage thoracique bilatéralement tout en protégeant le poumon et retirez le thymus. Ensuite, coupez la VCI intrathoracique au niveau du diaphragme.

Localisez maintenant le cœur et excisez l’appendice auriculaire droit. Ensuite, faites une incision transversale à la racine du tronc de l’artère pulmonaire et utilisez l’incision pour rincer les poumons avec deux millilitres de bagues lactées refroidies et 0,1 millilitre d’héparine. Exposez la trachée, puis coupez-la avec l’œsophage.

Arrêtez maintenant la ventilation aux deux tiers de l’inflation finale du courant. Excisez le bloc long du cœur et conservez-le sur de la glace. Placez de la gaze sur le poumon excisé pour le protéger de la lumière.

Inciser le ligament pulmonaire jusqu’à la veine pulmonaire ou pv. Retirez l’œsophage et l’aorte pour localiser le hile. Trouvez l’artère pulmonaire ou pa, qui est située à l’aspect le plus crânien du hile et de la bronche principale attachée.

Disséquez soigneusement l’artère pulmonaire en l’éloignant de la bronche. Maintenant, fabriquez un brassard PA à partir d’un cathéter IV de calibre 24 en le coupant à 0,5 millimètre de longueur avec une extension de 0,7 millimètre. La surface de la manchette est tressée en AB.

Afin de fournir une surface pour l’anastomose, fabriquez un brassard pour la bronche en utilisant un matériau similaire au brassard PA uniquement à l’aide d’un cathéter de calibre 20 coupé à une longueur d’un millimètre avec une extension de 0,7 millimètre. La taille du brassard PV varie en fonction du poids de la souris donneuse. Pour les souris pesant de 24 à 27 grammes.

La taille du brassard est de calibre 22 avec une longueur de 0,7 millimètre et une extension de 0,7 millimètre pour les souris pesant de 27 à 32 grammes. Les longueurs sont les mêmes, mais un cathéter de calibre 20 est utilisé. Maintenant, insérez les brassards dans le cristallin distal de l’artère pulmonaire, de la veine pulmonaire et des bronches, en fixant chacun avec neuf sutures en soie.

Une fois que les poignets ont tous été correctement attachés. Enveloppez le poumon préparé du donneur dans de la gaze imbibée de bagues lactées et placez-le sur de la glace jusqu’à la transplantation. Pour préparer la souris receveuse, induire une anesthésie et placer sur une ventilation mécanique de la même manière que celle utilisée pour le donneur.

Rasez la paroi thoracique gauche et préparez-la avec de l’alcool à 70 %. Commencez par faire une incision thoracotomique dans le tiers gauche de l’espace intercostal. Étendez l’incision dorsalement près de la colonne vertébrale.

Assurez-vous que le champ opératoire est drapé de manière stérile et placez une pince de micro-vaisseaux sur les vaisseaux pulmonaires gauches et les bronches adjacentes au cœur. L’artère pulmonaire peut être visualisée au niveau de l’aspect crânien, la veine pulmonaire à l’extrémité du dorlotement du hile et la bronche entre elles. Ensuite, utilisez une traction douce sur un hémostat pour provoquer une légère tension sur le pa, le PV et les bronches.

Laissez les structures hilaires serrées et réséquez soigneusement le poumon gauche. Isolez l’artère pulmonaire, la veine pulmonaire et les bronches, puis placez une suture lâche autour de chaque structure. Disséquez complètement l’AP de sa gaine adventice, puis faites une petite incision transversale d’environ un quart de la circonférence du vaisseau dans la paroi antérieure.

Tout en laissant intacte la continuation de la partie dorsale de l’artère, procurez-vous le poumon donneur, qui est enveloppé dans de la gaze de coton imbibée de bagues lactées froides, et positionnez-le dans la cavité thoracique. Ensuite, insérez les brassards dans le pa, le PV et la bronche du receveur pour créer une anastomose et ligaturez-les avec une nano suture. Ensuite, retirez le poumon du receveur.

Retirez ensuite la pince transversale hilaire, qui permet la reperfusion et la ventilation. Repositionnez le poumon transplanté dans le thorax du receveur et fermez l’incision de la thoracotomie À l’aide de cinq sutures, la souris devrait maintenant se remettre de l’anesthésie. La buprénorphine peut être administrée pour soulager la douleur après que la souris a repris conscience.

Ce tableau montre les scores histologiques de rejet aigu et la prévalence de la bronchiolite littérative ou OB. Le score post-greffe du rejet aigu est appelé score A. Les combinaisons d’allogreffes présentent une pathologie de rejet nettement plus aiguë ou chronique par rapport à la greffe ISO. De plus, la prévalence de la bronchiolite littérative était significativement plus élevée dans les combinaisons d’allogreffes que dans les greffes ISO aux jours 21 et 28 après la greffe.

Les macro-résultats et l’histopathologie à 28 jours après la transplantation pulmonaire sont présentés ici. Ces images représentent des macro-résultats et un poumon greffé ISO coloré en H et E, et un poumon naïf droit. Ces images représentent l’allogreffe pulmonaire de BL 10 et de masen trirème colorée transplantée chez un receveur de souris BL six, qui a développé respectivement OB et non OB.

La flèche blanche dans un B identifie les lésions OB. Ce panneau montre l’allogreffe pulmonaire BL six transplantée chez un receveur de souris BL 10 une fois maîtrisée. Cette technique peut être réalisée en près d’une demi-heure si elle est correctement exécutée.

L’utilité de cette technique est qu’elle peut être utilisée pour répondre à des questions mécanistes concernant le dysfonctionnement primaire du greffon, le rejet aigu et la bronchiolite ablative après une transplantation pulmonaire.