Name: Extériorisation Mésentère Rat: Un modèle pour étudier la dynamique cellulaires impliqués dans langiogenèse (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 29 s
Description: Découvrez un modèle d'extériorisation du mésentère chez le rat pour étudier l'angiogenèse et analyser la croissance des réseaux microvasculaires. Cette méthode simple permet la visualisation et la quantification des dynamiques cellulaires à l'échelle individuelle.

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Ce travail a été soutenu par le Board of Regents de l&#39;État de la Louisiane LEQSF (2009-12)-RD-A-19 (PI: WL Murfee) et l&#39;hypertension Tulane et du Centre rénale d&#39;excellence financé par le NIH subvention P20RR017659-08 (PI : L. Gabriel Navar).

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<li>Murfee, W. L., Rehorn, M. R., Peirce, S. M., Skalak, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perivascular+cells+along+venules+upregulate+NG2+expression+during+microvascular+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Perivascular cells along venules upregulate NG2 expression during microvascular remodeling.</a> Microcirculation. 13, 261-273 (2006).</li>
<li>Stapor, C. P., Murfee, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+class+III+%CE%B2-tubulin+as+a+marker+of+angiogenic+perivascular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">Identification of class III β-tubulin as a marker of angiogenic perivascular cells.</a> Microvascular Research. , Forthcoming (2011).</li>
<li>Yang, M., Aragon, M., Murfee, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+Mesenteric+Microvascular+Networks+from+Spontaneously+Hypertensive+Versus+Normotensive+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in Mesenteric Microvascular Networks from Spontaneously Hypertensive Versus Normotensive Rats.</a> Microcirculation. , (2011).</li>
<li>Robichaux, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphatic%2FBlood+endothelial+cell+connections+at+the+capillary+level+in+adult+rat+mesentery%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec.+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Lymphatic/Blood endothelial cell connections at the capillary level in adult rat mesentery.</a> Anat. Rec. (Hoboken). 293, 1629-1638 (2010).</li>
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</ol>

Nous n&#39;avons rien à communiquer.

Le modèle extériorisation a été signalé en 2006 et est adapté des modèles précédents de blessures mécaniques du mésentère de rat de l&#39;angiogenèse 4-7 et produit des résultats similaires à des modèles bien établis injection IP qui tirent parti du rat mésentère 9. Le temps de l&#39;extériorisation 20 minutes a été déterminée expérimentalement pour produire une réponse robuste angiogénique. Bien que cette période pourrait être modifiée, elle permet à une application locale d&#39;inhibiteurs de l&#39;angiogenèse 4 pour des études mécanistiques et l&#39;application directe des cellules exogènes pour les études de lignées cellulaires. De faisabilité de la constitution de cellules dans le remodelage des tissus mésentériques est appuyée par des études préliminaires dans notre laboratoire à l&#39;aide pré-étiquetés cellules de moelle osseuse et les cellules souches mésenchymateuses (Figure 7), et par le succès d&#39;enquêter sur le sort de l&#39;homme tissu adipeux ip injection cellules stromales 14 . Dans notre laboratoire, nous avons utilisé ce modèle pour identifier les phen péricyteschangements otypic au cours du temps de la réponse angiogénique 10 et d&#39;évaluer le potentiel angiogénique dans des conditions pathologiques, telles que l&#39;hypertension 12. La réponse angiogénique et les changements phénotypiques cellulaires associés à ce modèle peut également être observé dans d&#39;autres modèles mésentériques de rat angiogéniques y compris l&#39;exposition hypoxie chronique 10, 11. Une limitation du modèle extériorisation, c&#39;est que les mécanismes exacts de déclenchement de l&#39;angiogenèse ne sont pas connus. Extériorisation du mésentère a été liée à la dégranulation des mastocytes et une augmentation des taux d&#39;histamine 6, mais une enquête plus approfondie est nécessaire pour gagner plus de perspicacité. Le stimulus angiogénique est sans doute multifactorielle, produisant une réponse robuste remodelage dans la hiérarchie d&#39;un réseau microvasculaire. Bien que les mécanismes inconnus restent une critique majeure de ce modèle, sa reproductibilité et la simplicité le rendre attrayant pour identifier la dynamique cellulaire impliqués dans le processus intrinsèquement complexe germination capillaire. La reproductibilité du modèle est soutenu par comparables métriques angiogéniques au cours du temps de la croissance du réseau microvasculaire dans plusieurs souches de rats (mâles Wistar et Sprague-Dawley femelles) dans des études publiées antérieurement dans notre laboratoire 10, 12. Depuis, la majorité des adultes tissus mésentériques de rat sont vascularisés, le modèle permet aussi de multiples tissus à examiner par animal. Malheureusement, ce modèle n&#39;est manifestement pas applicable à des modèles génétiques de souris que les fenêtres mésentériques de souris ont une vascularisation moins natale et, dans notre expérience, manquent souvent observables réseaux de branchement. Les applications futures comprennent l&#39;étude de la fonctionnalité navire au cours de l&#39;angiogenèse en utilisant la microscopie intra-vitale à des moments précis et l&#39;enquête de la dynamique connexes cellulaires impliqués dans la lymphangiogenèse et la neurogenèse. Bien que la mesure de la vascularisation native par la fenêtre mésentérique semble être roughly proportionnelle avec l&#39;âge, nous avons observé de branchement des réseaux microvasculaires chez les rats mâles Wistar aussi jeunes que 4-5 semaines. Ces observations suggèrent que le modèle extériorisation pourrait également être appliqué pour comparer les différences angiogéniques à travers les âges.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires additionnels </td></tr><tr><td> Draper </td><td> Cardinal Health </td><td> 4012 </td><td> 12 &quot;x12&quot; Bio-Shield stérilisation régulière Wraps </td></tr><tr><td> Noyes Micro ciseaux </td><td> Roboz instruments chirurgicaux </td><td> RS-5677 </td><td> Noyes Micro Ciseaux de dissection de printemps; Droites, Sharp-Blunt points; Cutting Edge 13mm; Largeur Astuce 0.25mm, 4 1/2 &quot;Longueur hors tout </td></tr><tr><td> Graefe Pince </td><td> Roboz instruments chirurgicaux </td><td> RS-5135 </td><td> Micro Pinces à disséquer; dentelé; légère courbe; Largeur Astuce 0.8mm; 4 &quot;Longueur </td></tr><tr><td> Graefe Pince </td><td> Roboz instruments chirurgicaux </td><td> RS-5130 </td><td> Micro Pince à dissection; en dents de scie, les droites; Largeur Astuce 0.8mm; 4 &quot;Longueur </td></tr&gt; <tr><td> Suture 4-0 </td><td> ETHICON </td><td> 699g </td><td> (1,5 métrique) monofilament en nylon noir Ethilon Suture </td></tr><tr><td> 5-0 </td><td> ETHICON </td><td> 8556 </td><td> (1,0 métrique) PROLENE Polyprolene suture monofilament Bleu </td></tr><tr><td> 7-0 suture </td><td> ETHICON </td><td> 1647G </td><td> (0,5 métrique) monofilament en nylon noir Ethilon Suture </td></tr><tr><td> Titulaire Castroviejo aiguille Micro </td><td> Outils belle science </td><td> 12060-02 </td><td> Largeur Astuce: 0.6mm De serrage Longueur: 5mm Longueur: 9cm Pointe droite </td></tr><tr><td> Porte-aiguille Castroviejo </td><td> Outils belle science </td><td> 12565-14 </td><td> Forme de la pointe: Droit Largeur Astuce: 1.5mm Longueur de serrage: 10mm Ciseaux: Aucun Lock: Oui Longueur: 14cm Dentelé: Oui </td></tr><tr><td> Manche de bistouri </td><td> Roboz d&#39;instruments chirurgicaux </td><td> RS-9843 </td><td> Scalpel Handle, n ° 3; solide; 4 &quot;Longueur </td></tr><tr><td> Stérile Lame chirurgicale </td><td> Cincinnati chirurgicale </td><td> 0110 </td><td> En acier inoxydable; Taille 10 </td></tr><tr><td> Boîte de Pétri </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-757-13 </td><td> Ridge biseauté, Slippable </td></tr></tbody></table> Table des matières spécifiques chirurgicales et outils. <table border="1"><tbody><tr><td> Nom </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires additionnels </td></tr><tr><td> Beuthanasia </td><td> Schering-Plough Animal Health Corp Union (Commandé par MWI alimentation vétérinaire) </td><td> MWI #: 011168 </td><td> Matière active: par 100 ml, 390 mg de sodium pentobarbital de sodium, 50 mg de phénytoïne </td></tr><tr><td> La kétamine </td><td> Fort Dodge Santé Animale (Commandé par MWI alimentation vétérinaire) </td><td> MWI #: 000680 </td><td> Kateset 100 mg / ml </td></tr><tr><td> La xylazine </td><td> LLOYD. Inc (Commandé par MWI alimentation vétérinaire) </td><td> MWI #: 009307 </td><td> Anased 100 mg / ml </td></tr><tr><td> Saline </td><td> Hospira Inc </td><td> 94-217-JT </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> SIGMA </td><td> 011M8207 </td><td></td></tr><tr><td> La saponine </td><td> Sigma </td><td> BCBB4080 </td><td></td></tr><tr><td> PECAM (CD31) </td><td> BD Pharmingen </td><td> 553371 </td><td></td></tr><tr><td> Streptavidine-Cy3 </td><td> Jackson ImmunoResearch </td><td> 016-160-084 </td><td></td></tr><tr><td> BSA </td><td> Jackson ImmunoResearch </td><td> 096555 </td><td></td></tr><tr><td> Vectastain Elite ABC </td><td> Vector Laboratories </td><td> PK-6100 </td><td></td></tr><tr><td> Vecteur Nouvelle-Rouge </td><td> Vector Laboratories </td><td> SK-4800 </td><td></td></tr><tr><td> VectaMount </td><td> Vector Laboratories </td><td> H-500 </td><td></td></tr></tbody></table> Table des réactifs spécifiques

extériorisation mésentère rat: un modèle pour étudier la dynamique cellulaires impliqués dans l&#39;angiogenèse

Rat Mesentery Exteriorization: A Model for Investigating the Cellular Dynamics Involved in Angiogenesis

La croissance du réseau Microvacular et le remodelage sont des aspects cruciaux de la cicatrisation des plaies, l&#39;inflammation, la rétinopathie diabétique, la croissance tumorale et les conditions d&#39;autres maladies 1, 2. Croissance du réseau est communément attribué à l&#39;angiogenèse, définie comme la croissance de nouveaux vaisseaux à partir de vaisseaux pré-existants. Le procédé angiogénique est également directement relié à artériogenèse, défini comme l&#39;acquisition d&#39;un capillaire de revêtement cellule périvasculaire et l&#39;élargissement navire. Inutile de dire que, l&#39;angiogenèse est complexe et implique de multiples acteurs au niveau cellulaire et moléculaire 3. Comprendre comment un réseau microvasculaire augmente, il faut identifier les dynamiques spatiales et temporelles ainsi que la hiérarchie d&#39;un réseau au cours du temps de l&#39;angiogenèse. Cette information est essentielle pour le développement de thérapies visant à manipuler la croissance des vaisseaux. Le modèle extériorisation décrit dans cet article représente un modèle simple et reproductible pour stimulerLating l&#39;angiogenèse dans le mésentère de rat. Il a été adapté à partir de cicatrisation des modèles chez le rat mésentère 4-7, et est une alternative à stimuler l&#39;angiogenèse dans le mésentère via des injections ip de pro-angiogéniques 8, 9. Le modèle extériorisation est attrayante parce qu&#39;elle nécessite un minimum d&#39;intervention chirurgicale et produit des augmentations dramatiques, reproductibles dans les germes de la zone capillaire, vasculaire et de la densité vasculaire au cours d&#39;une évolution dans le temps relativement court dans un tissu qui permet de visualiser en deux dimensions des réseaux microvasculaires entières vers le bas pour unique niveau de la cellule. La croissance stimulée reflète naturelles réponses angiogéniques dans un environnement physiologique, sans ingérence des étrangers molécules angiogéniques. En utilisant des méthodes immunohistochimiques étiquetage, ce modèle a été révélée extrêmement utile pour identifier de nouveaux événements cellulaires impliqués dans l&#39;angiogenèse. Les enquêteurs peuvent facilement corréler les mesures angiogéniques au cours du temps de remodelage avec le temps spdynamique, tels que S PROPRES cellulaires changements phénotypiques ou interactions cellulaires 4, 5, 7, 10, 11.

Cet article décrit un modèle simple pour stimuler l&#39;angiogenèse dans le mésentère de rat. Le modèle produit des augmentations spectaculaires de la germination capillaire, la zone vasculaire et la densité vasculaire au cours d&#39;une évolution dans le temps relativement court dans un tissu qui permet la visualisation en face de l&#39;ensemble des réseaux microvasculaires vers le niveau de la cellule unique.

Extériorisation Mésentère Rat: Un modèle pour étudier la dynamique cellulaires impliqués dans l&#39;angiogenèse

La croissance et le remodelage du réseau microvasculaire sont des aspects critiques de la cicatrisation des plaies, de l'inflammation, de la rétinopathie diabétique, de la croissance tumorale et d'autres pathologies...

L'objectif de l'expérience suivante est d'identifier les dynamiques cellulaires spatiales et temporelles impliquées dans l'angiogenèse, définie comme la formation de nouveaux vaisseaux sanguins à partir de vaisseaux préexistants. À l'aide d'un modèle simple et reproductible, stimuler d'abord l'angiogenèse en extériorisant brièvement le mésentère de rat, puis prélever les tissus mésentériques à différents moments après la stimulation. Ensuite, marquer immunologiquement les coupes de tissus.Par exemple, utilisez un marqueur de cellule endothéliale pour visualiser l'ensemble du remodelage du réseau vasculaire au sein d'un tissu et créer une visualisation bidimensionnelle essentielle des réseaux microvasculaires en croissance. Ce modèle est intéressant car il produit une augmentation marquée de plusieurs paramètres angiogéniques pris ensemble, sur une période relativement courte. La visualisation des réseaux au niveau cellulaire unique et la corrélation de ces paramètres avec un marquage multicellulaire se sont révélées extrêmement utiles pour identifier de nouveaux phénotypes cellulaires impliquant la bourgeonnement capillaire.Cette méthode pourrait aider à répondre à des questions clés concernant la dynamique cellulaire impliquée dans la croissance du réseau microvasculaire. Cela inclut le moment et l'endroit où certaines cellules sont présentes au cours du processus de bourgeonnement capillaire. Les principaux avantages de cette méthode sont sa simplicité, la nécessité d'une intervention chirurgicale minimale et la production d'une réponse angiogénique robuste sur une période relativement courte.En outre, cette méthode tire parti du mésentère de rat, un tissu qui permet l'observation d'un réseau intact jusqu'au niveau cellulaire. Selon notre expérience, elle est très facile à apprendre et, par conséquent, reproductible d'un chercheur à l'autre lors de la démonstration de la procédure. Aujourd'hui, Peter Stapler, étudiant diplômé dans notre laboratoire, se préparera à la chirurgie selon les indications détaillées dans le texte accompagnant.Après avoir rasé la zone abdominale du rat, placer le rat anesthésié sur le dos sur un tapis chauffant afin de maintenir sa température corporelle, nettoyer la zone abdominale avec des lingettes stériles imbibées d'alcool à 70 % et d'iodine, effectuer une petite incision longitudinale au niveau de la peau environ un pouce sous le sternum, puis au niveau de la ligne alba, poser le champ opératoire pré-découpé sur la région abdominale de manière à ce que l'ouverture s'aligne avec l'incision. Appliquer doucement une pression autour de l'incision pour faire apparaître l'intestin grêle. À l'aide d'appliquateurs en coton, extraire délicatement une section de l'intestin grêle en posant le mésentère sur la platine en plastique contenant du sérum physiologique stérile, puis localiser l'iléon.Identifier six à huit fenêtres mésentériques vascularisées, la membrane mince et translucide située entre les paires artère-veine, qui vascularisent l'intestin grêle. Enregistrer l'heure de début de l'intervention et régler une minuterie sur 20 minutes. Marquer les deux fenêtres mésentériques situées au centre à l'aide d'un fil de suture stérile de calibre 7-0 dans la zone grasse proche de l'intestin.Reconstituez périodiquement la solution saline dans la boîte de Pétri à l’aide d’une seringue stérile de cinq millilitres afin de garantir que le tissu reste immergé et humide. Après la période d’extériorisation, replacez le mésentère dans la cavité abdominale. Fermez le muscle abdominal à l’aide d’un point de suture monofilament de calibre cinq zéro, en surjet interrompu.Ensuite, fermer la peau avec quatre points séparés de suture monofilament zéro, nettoyer la zone de suture avec des compresses alternées en utilisant la gaze stérile imbibée d’alcool à 70 % et d’iode, appliquer un gel lubrifiant sur les deux yeux du rat et le replacer dans sa cage pour la récupération. Le jour d’intérêt, après la stimulation, anesthésier et euthanasier le rat conformément aux directives institutionnelles. Ensuite, rouvrir la cavité abdominale et recouvrir la zone abdominale avec un morceau de film plastique. Maintenant, extraire délicatement l’intestin grêle et localiser les deux fenêtres marquées à l’aide de forceps et de ciseaux microchirurgicaux.Découper chacune des fenêtres mésentériques extériorisées, en incluant une bordure de tissu adipeux. S'efforcer d'éviter de sectionner les paires artère-veine situées dans la bordure grasse des fenêtres afin de minimiser un éventuel remplissage sanguin des fenêtres. Également limiter la section du tube digestif, qui pourrait entraîner une fuite de contenu intestinal.En contactant les fenêtres, immergez immédiatement chaque fenêtre dans du PBS. Utilisez ensuite des pinces pour étaler les tissus sur une lame d'objectif chargée positivement. Montez deux tissus par lame. Une fois que les tissus sont partiellement séchés, retirez l'excès de graisse à l'aide d'une lame de scalpel.Fixer les échantillons dans du méthanol pendant 30 minutes à moins 20 degrés Celsius en les plaçant au congélateur. Sécher les lames sous vide pour éliminer l'excès de solution tampon. En outre, délimiter les tissus avec un stylo à cire pour éviter l'écoulement incontrôlé des solutions d'anticorps en dehors du tissu.Ajoutez maintenant environ 200 microlitres de solution d'anticorps primaire diluée pour recouvrir entièrement le tissu. Incubez pendant une heure à température ambiante, puis lavez les tissus avec du PBS contenant 0,1 % de sapin en effectuant trois changements de tampon. Ensuite, ajoutez la solution d'anticorps secondaire peroxydase streptavidine et incubez à température ambiante pendant une heure ; après trois lavages, incubez les échantillons dans le réactif Vector Nova Red pendant 15 minutes.Rincez à l'eau pour monter les lames. Plongez 10 fois dans de l'éthanol à 95 %, puis effectuez des étapes successives de déshydratation. Laissez sécher les lames, recouvrez les tissus d'une fine couche, ajustez la quantité et la position des lamelles après séchage sous vide et marquage.Les lames. Recouvrez les échantillons de tissu avec une solution d'anticorps primaire diluée. Incubez pendant une heure à température ambiante.Laver trois fois avec du PBS contenant 0,1 % de saponine, 10 minutes par lavage. Ensuite, ajouter l'anticorps secondaire et incuber pendant une heure. Effectuer les lavages dans du PBS contenant 0,1 % de saponine, monter les lames dans du PBS avec du glycérol et sceller avec du vernis à ongles.Ici, nous détaillons la modification d'une boîte de Petri courante afin de l'utiliser comme plateau chirurgical. De la pâte à modeler jaune a été utilisée pour offrir une surface lisse à travers laquelle le mésentère peut être tiré par l'ouverture préalablement découpée. Là encore, les fenêtres mésentériques montrées ici sur le plateau pendant la période d'extériorisation sont définies comme les membranes minces et translucides situées entre les paires artère-veine qui vascularisent l'intestin à cet endroit.L'étiquetage par PCAM permet d'identifier tous les types de vaisseaux le long de la hiérarchie des réseaux microvasculaires en cours de remodelage à des points temporels spécifiques après l'externalisation. Ces images peuvent être utilisées pour quantifier des paramètres angiogéniques à des points temporels précis. Après la stimulation.L'étiquetage PCAM permet de distinguer les artérioles des veinules. Notez que les artérioles nourricières présentent généralement des diamètres plus petits et une morphologie allongée des cellules endothéliales par rapport aux veinules appariées. Les caractéristiques typiques des réseaux remodelés incluent la surface vascularisée, la bourgeonnement capillaire et la densité vasculaire.La quantification de ces divers paramètres angiogéniques caractérise le déroulement temporel de la croissance du réseau. La bourgeonnement capillaire à partir de vaisseaux préexistants atteint un maximum entre le troisième et le cinquième jour, puis revient à un niveau non stimulé au dixième jour. Cette augmentation transitoire du bourgeonnement est suivie, dans notre laboratoire, par une augmentation de la surface vascularisée et de la densité vasculaire.Ce système modèle a été utilisé pour identifier de nouveaux changements phénotypiques cellulaires à des points temporels spécifiques au cours de ce processus de remodelage. La coloration immunofluorescente par marquage PCA met en évidence les cellules endothéliales en rouge, tandis que le marquage de la bêta-tubuline de classe trois colore en vert les nerfs et les parasites le long des vaisseaux angiogéniques. Fait intéressant, dans les tissus non stimulés, l'expression de la bêta-tubuline de classe trois est spécifique aux nerfs.En revanche, au pic de la bourgeonnement capillaire, la tubuline bêta de classe trois est exprimée par les cellules périvasculaires. Ce type de résultat met en évidence l'utilité de ce modèle angiogénique simple et robuste pour identifier de nouveaux types cellulaires impliqués dans le processus angiogénique. Au jour 10, le profil d'expression de la tubuline bêta de classe trois commence à revenir au scénario non stimulé.Ce modèle pourrait également être utilisé potentiellement pour des études de lignage cellulaire. La faisabilité de l'incorporation cellulaire dans le tissu mésentérique en cours de remodelage est appuyée par ces études préliminaires, au cours desquelles des cellules de la moelle osseuse prémarquées ou des cellules souches mésenchymateuses ont été superfusionnées sur des fenêtres mésentériques pendant la période d'extériorisation de 20 minutes. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la manière d'utiliser notre modèle d'intériorisation du mésentère de rat pour étudier la dynamique cellulaire impliquée dans la croissance du réseau microvasculaire.Cette technique simple peut être réalisée en environ 45 minutes à une heure. N'oubliez pas qu'il est essentiel de manipuler délicatement le mésentère et d'éviter de percer les vaisseaux après une intervention chirurgicale. Un marquage immunohistochimique peut être effectué pour identifier plusieurs types cellulaires le long des vaisseaux sanguins.Vous pouvez également marquer les vaisseaux lymphatiques et les nerfs. Cela nous permet d'étudier non seulement les changements phénotypiques cellulaires impliqués dans l'angiogenèse, mais aussi la coordination entre l'angiogenèse, la neurogenèse et l'angiogenèse lymphatique.

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Ce protocole décrit l’imagerie intravitale des souris transgéniques exprimant des marqueurs fluorescents spécifiques des cellules. Intravitale imagerie fournit une méthode non invasive pour les observations à haute résolution dans les animaux vivants à l’aide de windows implantables permettant la visualisation microscopique des processus est possible. Cette méthode est particulièrement utile pour étudier les processus longitudinales.

La microscopie intravitale du système vasculaire associées à la tumeur en utilisant Advanced dorsale pli fenêtre Chambers sur des souris transgéniques fluorescents

L’angiogenèse implique des interactions multicellulaires et multisystémiques qui doivent être étudiées dans un environnement physiologiquement pertinent. L’objectif de cette étude est de démontrer la capacité du modèle de culture de mésentère de rat à faire des comparaisons en time-lapse de réseaux microvasculaires intacts au cours de l’angiogenèse.

Un<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Méthode pour imagerie time-lapse de Cultured Rat mésentériques microvasculaires Networks

Ce test utilise des cellules souches embryonnaires de souris différenciées en corps embryoïdes cultivés dans un gel de collagène 3D pour analyser les processus biologiques qui contrôlent la germination de l’angiogenèse in vitro. La technique peut être appliquée pour tester des médicaments, modéliser des maladies et étudier des gènes spécifiques dans le contexte de délétions mortelles pour les embryons.

In vitro Essai tridimensionnel de germination de l’angiogenèse à l’aide de cellules souches embryonnaires de souris pour la modélisation de maladies vasculaires et l’analyse de médicaments

Cette étude présente le test de migration bidimensionnel (2D) et le test de germination de sphéroïdes tridimensionnel (3D), ainsi que leurs méthodes d’analyse respectives en aval, y compris l’extraction d’ARN et l’immunocytochimie, comme des tests appropriés pour étudier l’angiogenèse in vitro.

Étude de l’angiogenèse aux niveaux fonctionnel et moléculaire en exploitant le test de migration des plaies par égratignures et le test de germination des sphéroïdes

L’angiogenèse germinative, fondamentale pour le développement et la maladie, implique des processus moléculaires et mécaniques complexes. Nous présentons un modèle 2,5D ex vivo polyvalent qui analyse la germination cellulaire des artères carotides porcines, révélant l’angiogenèse dépendante de la rigidité et la mécanique cellulaire distincte leader-follower. Ce modèle aide à faire progresser les stratégies d’ingénierie tissulaire et les approches de thérapie contre le cancer.

Modèle 2.5D pour la caractérisation mécanique ex vivo de l’angiogenèse germinative dans les tissus vivants

Christopher Hughes CW décrit l'utilité de son système de culture pour étudier l'angiogenèse in vitro. Il explique l'importance des fibroblastes qui sécrètent une critique, encore non identifiés, facteur soluble qui permettent aux cellules endothéliales pour former des vaisseaux dans la culture de cette branche, la forme correcte lumens, et subissent anastomose.

Christopher Hughes: un modèle in vitro pour l&#39;étude de l&#39;angiogenèse (Interview)

Découvrez un modèle d'extériorisation du mésentère chez le rat pour étudier l'angiogenèse et analyser la croissance des réseaux microvasculaires. Cette méthode simple permet la visualisation et la quantification des dynamiques cellulaires à l'échelle individuelle.

Extériorisation Mésentère Rat: Un modèle pour étudier la dynamique cellulaires impliqués dans l'angiogenèse

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