Remplacement ovariectomie et 17β-estradiol chez les rats et les souris: une démonstration visuelle

L'objectif général de cette procédure est d'obtenir un contrôle strict des concentrations sériques d'œstrogènes, qui varient normalement chez les rats et souris femelles. Ceci est réalisé en retirant d'abord les ovaires par la racine dorsale. Ensuite, des capsules élastiques en céramique et un mélange de Nutella sont préparés.

Enfin, une capsule est insérée par voie sous-cutanée, ou bien le mélange Nutella est administré par voie orale. En définitive, les résultats peuvent être obtenus par radioimmunoessai, qui montre des concentrations stables ou variables d’œstradiol 17 bêta sérique, respectivement pour la méthode de la capsule et celle du Nutella. Le principal avantage de ces techniques par rapport aux méthodes existantes, telles que les comprimés à libération lente, est qu’elles se sont révélées capables de produire des concentrations physiologiques d’œstradiol pendant de longues périodes.

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des œstrogènes, telles que les différences d'effets entre les voies d'administration, les origines et les doses. Après avoir anesthésié l'animal, placez-le en position prona sur une plaque chauffante reliée à un thermomètre rectal. Appliquez l'IGEL et un analgésique postopératoire sur la face latérale du cou de l'animal par voie sous-cutanée.

Administrer cinq milligrammes par kilogramme d'IL dans du sérum physiologique par voie antérieure à partir de la crête iliaque sur une zone de quatre centimètres sur quatre centimètres. Ensuite, désinfecter la zone avec un antiseptique avant de recouvrir l'animal d'un champ opératoire de quatre centimètres sur quatre centimètres comportant une ouverture. Réaliser une incision médiane de deux à trois centimètres et disséquer par émoussage la peau de la fascia sous-jacente, à un centimètre latéralement par rapport à la ligne médiane.

Effectuez une autre incision à travers la fascia. Ensuite, aussi superficiellement que possible, disséquez latéralement par dissection émoussée sous cette fascia jusqu'à atteindre la cavité abdominale. À l'aide de pinces, saisissez le tissu adipeux qui entoure l'ovaire dans la cavité abdominale et tirez-le doucement vers l'extérieur.

Identifier l'ovaire et ligaturer les cornes utérines et les vaisseaux à 0,5 à un centimètre proximalement par rapport à cette structure. Enlever l'ovaire et le tissu adipeux ligaturé, puis remettre le tissu restant dans la cavité abdominale.

Effectuez une autre incision dans la fascia controlatérale et retirez l'autre ovaire. Fermez les plaies, puis laissez l'animal se réveiller de l'anesthésie, s'il ne reçoit pas immédiatement du 17 bêta-estradiol.

Placer l'animal dans une cage chauffée pendant au moins deux heures après la chirurgie. Héberger le rat séparément pendant les premiers jours suivant l'intervention. 24 heures après la chirurgie, par voie sous-cutanée.

Injectez les animaux avec cinq milligrammes par kilogramme d'IL afin d'administrer de l'estradiol 17 bêta par des capsules scolastiques. Mélangez soigneusement la quantité souhaitée dans de l'huile de sésame. Découpez des morceaux de tube scolastique de trois centimètres de longueur et des morceaux de bâtonnets applicateurs en bois de cinq millimètres de longueur pour boucher à l'aide de pinces.

Insérez un bouchon en bois dans la capsule scolaire avant d'y injecter la solution d'œstradiol 17 bêta dans l'huile de sésame. Pour remplir toute la longueur, obturez délicatement l'extrémité ouverte de la capsule scolaire avec un autre bouchon en bois. Incubez les capsules dans la solution restante d'œstradiol 17 bêta toute la nuit avant l'implantation.

Après la fermeture des incisions d'ectomie, raser et désinfecter une zone carrée de deux sur deux centimètres sur l'aspect dorsal du cou du rat. Réaliser une incision d'un centimètre et écarteler latéralement par dissociation prudente. Disséquer une poche sous-cutanée en ménageant un espace suffisant pour la capsule.

Essuyez la capsule scolaire et insérez-la délicatement par l'incision. Fermez ensuite l'incision à l'aide d'un point de suture. Veillez à ce que la capsule exerce une tension minimale sur la peau, en particulier autour de la plaie.

Pour utiliser la crème de noix Nutella comme support d'administration d'œstrogène, dissoudre complètement l'estradiol 17 bêta dans de l'huile de sésame, puis mélanger l'huile de sésame avec la crème de noix. Préparer une crème de noix placebo sans l'estradiol 17 bêta cinq jours avant l'expérience. Habituer les rats à consommer la crème de noix sans hormone du premier au troisième jour.

Entraînez les animaux par groupes les quatrième et cinquième jours. Nourrissez-les avec la crème de noix dans des cages séparées tout au long des expériences. Placez les animaux dans des cages séparées lorsqu'ils reçoivent la crème de noix en sérum physiologique.

Les concentrations en 17 bêta-estradiol que les méthodes actuelles visent à reproduire sont d'environ cinq à 140 picogrammes par millilitre chez le rat, et de cinq à 35 picogrammes par millilitre chez la souris. Comme indiqué ici, lorsqu'elles sont administrées à des rates femelles de 300 grammes de souche Sprague-Dawley.

Les capsules élastiques sous-cutanées produisent une diminution lente des concentrations sériques d'estradiol 17 bêta, passant d'environ 40 picogrammes par millilitre au jour 2 à 10 picogrammes par millilitre au jour 35. Toutefois, immédiatement après l'administration, on observe un pic de concentration sérique d'environ 1000 picogrammes par millilitre, qui retombe dans la plage physiologique dans les huit heures suivant l'administration chez des souris femelles C57BL/6 de 25 grammes.

La concentration sérique a lentement diminué d'environ 90 picogrammes par millilitre au jour 2 à 25 picogrammes par millilitre au jour 35 lorsqu'elle a été administrée via la crème de noix à 300 grammes. Spra de rats. Les niveaux physiologiques de 17 bêta-estradiol ont varié quotidiennement entre 10 et 70 picogrammes par millilitre chez la souris.

Les taux d'œstradiol 17 bêta ont varié entre 20 et 120 picogrammes par millilitre. Une fois maîtrisée, la technique d'ectomie et d'implantation de la capsule peut être réalisée en 10 minutes si elle est effectuée correctement. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de se rappeler de respecter strictement les consignes d'hygiène.