Name: Microdialyse déthanol au cours de léthanol détermination opérant auto-administration et déthanol par chromatographie en phase gazeuse (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 11 s
Description: Apprenez la microdialyse cérébrale chez le rat pour surveiller l'éthanol pendant l'auto-administration opérante. Cette méthode par chromatographie en phase gazeuse permet une analyse en temps réel des mécanismes d'addiction.

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Cette recherche a été financée par des subventions du NIH / NIAAA (AA11852 et AA007471).

<ol><li>Geiger, B. M., Frank, L. E., Caldera-Siu, A. D., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survivable+stereotaxic+surgery+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Survivable stereotaxic surgery in rodents.</a> J. Vis. Exp. (20), e880(2008).</li>
<li>Howard, E. C., Schier, C. J., Wetzel, J. S., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dopamine+response+in+the+nucleus+accumbens+core-shell+border+differs+from+that+in+the+core+and+shell+during+operant+ethanol+self-administration%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin.+Exp.+Res%22%5BJournal%5D)">The dopamine response in the nucleus accumbens core-shell border differs from that in the core and shell during operant ethanol self-administration.</a> Alcohol Clin. Exp. Res. 33, 1355-1365 (2009).</li>
<li>Doyon, W. M., York, J. L., Diaz, L. M., Samson, H. H., Czachowski, C. L., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+activity+in+the+nucleus+accumbens+during+consummatory+phases+of+oral+ethanol+self-administration%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin.+Exp.+Res%22%5BJournal%5D)">Dopamine activity in the nucleus accumbens during consummatory phases of oral ethanol self-administration.</a> Alcohol Clin. Exp. Res. 27, 1573-1582 (2003).</li>
<li>Pettit, H. O., Justice, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+dose+on+cocaine+self-administration+behavior+and+dopamine+levels+in+the+nucleus+accumbens%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of dose on cocaine self-administration behavior and dopamine levels in the nucleus accumbens.</a> Brain Res. 539, 94-102 (1991).</li>
<li>Paxinos, G., Kus, L., Ashwell, K. W. S., Watson, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22Chemoarchitectonic+Atlas+of+The+Rat+Forebrain%22">Chemoarchitectonic Atlas of The Rat Forebrain</a>. , Academic Press Inc. (1998).</li>
<li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Rat+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press Inc. (1986).</li>
<li>Skoog, D. A., Holler, F. J., Nieman, T. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSkoog%2C+DA+%22Principles+of+Instrumental+Analysis%22">Principles of Instrumental Analysis</a>. , 5th Edition, Thomson Learning, Inc. (1998).</li>
<li>Doyon, W. M., Anders, S. K., Ramachandra, V. S., Czachowski, C. L., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+operant+self-administration+of+10%25+ethanol+plus+10%25+sucrose+on+dopamine+and+ethanol+concentrations+in+the+nucleus+accumbens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Effect of operant self-administration of 10% ethanol plus 10% sucrose on dopamine and ethanol concentrations in the nucleus accumbens.</a> J Neurochem. 93, 1469-1481 (2005).</li>
<li>Carrillo, J., Gonzales, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+exposure+to+voluntary+ethanol+self-administration+produces+adaptations+in+ethanol+consumption+and+accumbal+dopamine+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol%22%5BJournal%5D)">A single exposure to voluntary ethanol self-administration produces adaptations in ethanol consumption and accumbal dopamine signaling.</a> Alcohol. 45, 559-5566 (2011).</li>
<li>Howard, E. C., Schier, C. J., Wetzel, J. S., Duvauchelle, C. L., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+shell+of+the+nucleus+accumbens+has+a+higher+dopamine+response+compared+with+the+core+after+non-contingent+intravenous+ethanol+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The shell of the nucleus accumbens has a higher dopamine response compared with the core after non-contingent intravenous ethanol administration.</a> Neuroscience. 154, 1042-1053 (2008).</li>
<li>Robinson, D. L., Lara, J. A., Brunner, L. J., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+Ethanol+Concentrations+in+the+Extracellular+Fluid+of+the+Rat+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Quantification of Ethanol Concentrations in the Extracellular Fluid of the Rat Brain.</a> J. Neurochem. 75, 1685-1693 (2000).</li>
<li>Gonzales, R. A., McNabb, J., Yim, H. J., Ripley, T., Bungay, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Microdialysis+of+Ethanol+in+Rat+Striatum%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin.+Exp.+Res%22%5BJournal%5D)">Quantitative Microdialysis of Ethanol in Rat Striatum.</a> Alcohol Clin. Exp. Res. 22, 858-867 (1998).</li>
</ol>

Cet article a été financée par les Associés Med, Inc

Applications et les limites L&#39;auto-administration de médicaments est utilisé chez les rongeurs à la toxicomanie modèle. Beaucoup de médicaments d&#39;abus qui sont modélisés dans ce mode peut être administré par voie intraveineuse, dans laquelle le médicament est administré directement dans le compartiment central. Cela permet une surveillance étroite de la dose au cours d&#39;une session d&#39;auto-administration. L&#39;éthanol est généralement auto-administré par voie orale, il est beaucoup plus difficile de surveiller les concentrations de médicaments dues aux différences individuelles dans l&#39;absorption et le métabolisme. En utilisant la microdialyse pour l&#39;échantillon de la région du cerveau d&#39;intérêt, nous sommes non seulement en mesure de suivre le modèle de l&#39;éthanol pour atteindre la région, mais nous sommes également en mesure de surveiller simultanément les modifications des neurotransmetteurs dans la même région au fil du temps au cours de chaque phase d&#39;auto-administration. Modifications neurochimiques induites par les médicaments et les réactions dans le cerveau sont associés à la toxicomanie et de la dépendance: ainsi, en même temps que la capacité de meaneurochimique et que les concentrations de médicament pendant certaines phases d&#39;auto-administration fournit un outil très puissant et unique. Une question à garder à l&#39;esprit pour corréler les concentrations d&#39;analytes dialysat ayant des comportements sont les caractéristiques physiques de la plomberie microdialyse. Plus précisément, le temps qu&#39;il faut pour que le fluide soit transféré à partir de la lumière de la sonde de microdialyse pour le tube collecteur est critique, et des temps plus courts sont meilleurs. Dans notre laboratoire, nous construisons les sondes de sorte que le temps est d&#39;environ 90 secondes. En utilisant ces conditions, nous avons constaté qu&#39;il ya une augmentation de la dopamine accumbal au début de la consommation d&#39;éthanol, ce qui diminue au cours des périodes de boissons et de post-boisson avec l&#39;augmentation de la concentration d&#39;éthanol de dialysat. 2,3,8,9 Ces expériences , lorsqu&#39;il est combiné avec des données provenant d&#39;études pharmacologiques, nous ont permis d&#39;analyser les effets pharmacologiques strictement d&#39;éthanol et de l&#39;auto-administration des signaux environnementaux associés à changes des concentrations de neurotransmetteurs. Il convient de noter que cette application particulière de combinés comportementale microdialyse techniques est adapté aux intérêts de recherche actuels de notre laboratoire. Il est conçu pour évaluer la structure temporelle de l&#39;éthanol atteint le cerveau par rapport à la tendance de l&#39;évolution des neurotransmetteurs dans la même région, de sorte que nous pouvons relier ces mesures synchrones auto-administration comportements. Les concentrations d&#39;éthanol provenant de dialysat ne sont pas corrigés pour la récupération in vivo sonde, et ne représentent qu&#39;une fraction de la concentration du tissu cérébral éthanol. Si microdialyse quantitative de l&#39;éthanol est requis, la fraction d&#39;extraction de l&#39;éthanol qui diffuse à partir de l&#39;espace extracellulaire dans la sonde doit être déterminée expérimentalement. Voir les publications antérieures de notre laboratoire pour les méthodes et la discussion plus loin. 10,11,12 Bien que ce protocole illustre l&#39;utilisation du gaz chromatography avec microextraction en phase solide de l&#39;éthanol à partir de l&#39;espace de tête d&#39;échantillons de microdialyse, d&#39;autres méthodes pour l&#39;analyse de la teneur en éthanol de l&#39;échantillon de micro-dialyse peut être utilisé. Toutefois, d&#39;autres méthodes peuvent souffrir de quelques inconvénients. Par exemple, moins sensibles méthodes analytiques peuvent exiger un plus grand volume d&#39;échantillon qui nécessite des temps d&#39;échantillonnage supérieure à la 5-7 min illustré ici. Le type de système discuté ici utilise une micro-extraction en phase solide qui concentre l&#39;éthanol dans la phase vapeur dans la cuvette pour échantillon scellé en permettant l&#39;absorption de la fibre placée dans l&#39;espace de tête du flacon. Ce qui améliore la limite de détection par rapport à l&#39;espace de tête de prélèvement direct qui permet typiquement 50-100 microlitres de la vapeur à injecter. Un autre avantage majeur de la méthode de l&#39;espace de tête est que l&#39;échantillon injecté pour l&#39;analyse est extrêmement propre et exempte de sels. L&#39;injection directe de l&#39;échantillon microdialyse liquide peut également être utilisé avec une plus grande SENSITivité, mais cela nécessitera plus de temps d&#39;arrêt instrument pour cause de maintenance régulière requise pour nettoyer les sels injectés. Dépannage et autres notes <ol><li> Avant que votre expérience commence, vous donner beaucoup de temps pour vérifier que vos microdialyse set-ups fonctionnent correctement et pour dépanner les problèmes éventuels. Nous suggérons que vous avez un supplément de set-up, perfusés avec ACSF, prêt à basculer avec un dysfonctionnement set-up pour gagner du temps, comme la plupart des séances opérant tendance à se produire à une heure précise chaque jour. </li><li> S&#39;assurer que les sondes de microdialyse sont insérés sur une période d&#39;environ 5 minutes à minimiser les dommages aux tissus produite par cisaillement du tissu que la sonde pénètre dans le cerveau. </li><li> Lors du transfert du rat dans la chambre opérante, il est utile d&#39;avoir une deuxième personne assister afin que la ligne de transfert (partie de la microdialyse set-up) ne devient embrouillée, et afin que le programme peut être opérant à initiated à temps. </li><li> Assurez-vous que vous donnez le bain d&#39;eau beaucoup passeur de temps pour atteindre la température appropriée. Notre système nécessite généralement deux heures pour atteindre 50 ° C. En outre, veiller à ce que vos échantillons sont entièrement vaporisé avant d&#39;analyser les échantillons. En général, nous confirmer visuellement que cela s&#39;est produit avant d&#39;entreprendre l&#39;analyse des échantillons. </li><li> Standard des bonnes pratiques de chimie analytique doivent être suivies. Ceux-ci incluent, mais ne sont pas limités à, la validation des individus, des équipements et des procédures. En bref, nous employons les lignes directrices suivantes: Les utilisateurs individuels doivent démontrer leur capacité à générer des valeurs reproductibles hauteur de pic des concentrations standard et linéaires courbes standard (R2 ≥ 0,99) sur plusieurs jours. Pour vérifier le système GC-FID fonctionne correctement, les normes doivent être toujours être analysés avant tout prélèvement d&#39;échantillons de dialysat sont injectés. La courbe standard générée doit avoir un R2 ≥ 0,99. </li><li> La plupart des équipements que nous utilisonsa été acheté par Varian, Inc, qui a été acquise par Agilent Technologies en 2010. A cette époque, Bruker Instruments scientifiques obtenus Varian laboratoire chromatographie en phase gazeuse instruments affaires. Pour les achats futurs, consultez quelconque de ces sociétés. </li><li> Le présent protocole indique comportement opérant sur des rats, mais le spectateur doit être conscient que plus la perturbation du comportement est susceptible de se produire avec le modèle plus petit de la souris. Une autre question à prendre en compte est que le placement d&#39;une sonde de microdialyse dans d&#39;autres régions cérébrales que le cortex médial préfrontal ou noyau accumbens peut perturber le comportement opérant à un degré plus élevé que montré ici. Il est important d&#39;examiner attentivement de nombreux paramètres comportementaux pour déterminer si les dommages causés par placement de la sonde produit des changements dans le comportement graves. </li></ol>

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td></tr><tr><td> Ethanol à 95% </td><td> AAPER alcool et Chemical Co., Shelbyville, KY </td><td> E190, 111000190 </td></tr><tr><td> Ultra-Pure saccharose </td><td> MP Biomedicals, LLC, Cleveland, OH </td><td> 821721 </td></tr><tr><td> Ultra High Purity hélium </td><td> Gaz Air </td><td> SE UHP300 </td></tr><tr><td> Air </td><td> Gaz Air </td><td> AIZ300 </td></tr><tr><td> Hydrogène </td><td> Gaz Air </td><td> AIZ300 </td></tr><tr><td> GC 2 flacons ml </td><td> Agilent </td><td> # 8010-0015 </td></tr><tr><td> Bouchons des flacons de GC avec PTFE / silicone septa </td><td> Agilent </td><td> # 8010-0084 </td></tr></tbody></table> Tableau 1. Réactifs spécifiques

microdialyse d&#39;éthanol au cours de l&#39;éthanol détermination opérant auto-administration et d&#39;éthanol par chromatographie en phase gazeuse

Microdialysis of Ethanol During Operant Ethanol Self-administration and Ethanol Determination by Gas Chromatography

Opérant auto-administration méthodes sont couramment utilisées pour étudier les effets comportementaux et pharmacologiques de nombreux médicaments d&#39;abus, y compris l&#39;éthanol. Cependant, l&#39;éthanol est généralement auto-administré par voie orale plutôt que par voie intraveineuse comme beaucoup d&#39;autres drogues. La pharmacocinétique des médicaments administrés par voie orale sont plus complexes que les médicaments administrés par voie intraveineuse. Parce que la compréhension de la relation entre les effets pharmacologiques et comportementaux de l&#39;éthanol nécessite la connaissance de l&#39;évolution dans le temps de l&#39;éthanol atteint le cerveau pendant et après avoir bu, nous utilisons la microdialyse in vivo et chromatographie en phase gazeuse avec détection par ionisation de flamme pour surveiller les concentrations cérébrales de dialysat éthanol au fil du temps. Combinés microdialyse-comportementales expériences impliquent l&#39;utilisation de plusieurs techniques. Dans cet article, la chirurgie stéréotaxique, la formation comportementale et microdialyse, qui peut être adapté pour tester une multitude d&#39;auto-administration et neupétrochimique hypothèses centrée, sont inclus uniquement pour illustrer la façon dont ils se rapportent à des phases ultérieures de prélèvement et d&#39;analyse d&#39;éthanol dialysat. Dialysat analyse de la concentration d&#39;éthanol par chromatographie en phase gazeuse avec détection à ionisation de flamme, qui est spécifique aux études d&#39;éthanol, est décrit en détail. Les données produites par ces méthodes révèlent le motif d&#39;éthanol atteint le cerveau au cours de la procédure d&#39;auto-administration, et quand il est associé avec l&#39;analyse neurochimique des échantillons de dialysat mêmes, permet de tirer des conclusions concernant les effets pharmacologiques et comportementaux de l&#39;éthanol.

Une méthode pour déterminer l&#39;évolution temporelle de la concentration d&#39;éthanol dans le cerveau des rats au cours de l&#39;éthanol opérant auto-administration est décrite. Chromatographie en phase gazeuse avec détection par ionisation de flamme est utilisée pour quantifier l&#39;éthanol dans les échantillons de dialysat, parce qu&#39;il a la sensibilité requise pour les petits volumes qui sont générés.

Microdialyse d&#39;éthanol au cours de l&#39;éthanol détermination opérant auto-administration et d&#39;éthanol par chromatographie en phase gazeuse

Les méthodes d'auto-administration opérante sont couramment utilisées pour étudier les effets comportementaux et pharmacologiques de nombreuses drogues d'abus, dont l'éthanol.

L'objectif général de cette procédure est de surveiller les concentrations d'éthanol dans le dialysat cérébral au cours d'une séance d'auto-administration d'éthanol. Afin de comparer cette mesure aux comportements d'auto-administration synchrones, on commence par implanter chirurgicalement une canule-guide de microdialyse, une canule et un dispositif d'ancrage, puis on entraîne des rats à s'auto-administrer de l'éthanol de manière opérante. La deuxième étape consiste à habituer les rats au dispositif d'ancrage crânien afin qu'il ne gêne pas l'auto-administration d'éthanol pendant la microdialyse.Ensuite, une microdialyse est réalisée pendant une séance d'auto-administration d'éthanol, au cours de laquelle une partie du dialysat est préparée pour l'analyse de l'éthanol. Puis, les échantillons de dialysat sont analysés pour déterminer la concentration d'éthanol à l'aide d'un chromatographe en phase gazeuse équipé d'un détecteur à ionisation de flamme. Enfin, les résultats obtenus montrent l'évolution temporelle de la concentration d'éthanol dans la région cérébrale d'intérêt au cours d'une séance d'auto-administration d'éthanol.Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, telles que la ponction de la veine caudale ou saphène, est que cette procédure est minimalement invasive au moment du prélèvement et permet la mesure du médicament dans le temps au niveau de la région cérébrale d'intérêt pendant que l'animal effectue une tâche comportementale. En général, les personnes novices dans cette méthode éprouveront des difficultés car elle requiert plusieurs compétences spécialisées, dont beaucoup ne peuvent être acquises qu'au travers d'une pratique ou d'une expérience répétée. La démonstration de la procédure sera assurée par Jeffrey Dilley, un assistant de recherche étudiant de notre laboratoire.Toutes les procédures animales décrites ont été approuvées par le comité institutionnel de soins aux animaux et d'utilisation de l'Université du Texas et suivent toutes les directives réglementaires relatives aux soins et à l'utilisation des animaux de laboratoire. L'Université du Texas à Austin est un établissement accrédité par l'ALAC utilisant des rats Long Evans bien habitués, munis chirurgicalement d'une canule de 21 gauge placée au-dessus de la région cérébrale d'intérêt, pour ces expériences comportementales de microdialyse. Tous les animaux doivent bénéficier d'au moins une semaine de soins postopératoires et de récupération, et être en bonne santé avant de commencer les procédures suivantes.Placer le rat dans une chambre opérante Med Associates équipée d'un levier rétractable Lichter et d'un tube distributeur, et l'entraîner à appuyer sur le levier pour accéder à une solution de saccharose à 10 %. Une fois que le rat est entraîné à répondre pour obtenir la solution de saccharose, commencer un programme d'entraînement approprié au cours duquel de l'éthanol est progressivement ajouté à la solution au cours de plusieurs séances de consommation la nuit précédant l'avant-dernière séance opérante. Après avoir anesthésié l'animal et vérifié le niveau de sédation, fixer le ressort de la liaison au boulon de fixation situé sur le support crânien du rat afin de l'habituer à l'appareil, composé d'un levier équilibreur, d'un bras, d'une liaison rotative, d'un ressort et d'un support à anneaux.Laisser le rat passer la nuit dans la chambre opératoire, dans sa cage d'origine, avec accès libre à la nourriture et à l'eau, puis réaliser la séance d'entraînement du lendemain avec le câble de raccordement et le matériel associé mis en place la veille de l'expérience de microdialyse. Après avoir anesthésié le rat à l'isoflurane, vérifier l'état de sédation en effectuant une pression sur l'orteil, puis insérer une sonde de microdialyse perfusée avec un liquide céphalo-rachidien artificiel. Fixer correctement la sonde, puis régler le débit de la sonde à 0,2&nbsp;µL par minute.Placer le rat dans sa cage d'origine dans la salle conditionnelle pour y passer la nuit, tout l'équipement de dialyse en place, et fournir de la nourriture et de l'eau ad libitum. Le jour suivant l'insertion de la sonde, au moins deux heures avant le début de l'expérience, augmenter le débit de la sonde jusqu'à atteindre son débit de fonctionnement. À l’aide d’une seringue Hamilton, vérifier que le débit de la sonde est constant et représente au moins 90 % du débit prédéfini.Si l'on évalue les neurotransmetteurs dans les échantillons de dialyse, prélevez des échantillons durant toutes les phases de l'expérience. Commencez par recueillir des échantillons de dialyse pendant que l'animal se trouve dans sa cage d'origine. Conservez les échantillons de manière appropriée en vue d'une analyse ultérieure.Transférez soigneusement le rat dans la chambre opérante et démarrez le programme opérant qui contrôle la chambre. Continuez à prélever des échantillons pendant que le rat attend que le levier s'étende dans la chambre, deux échantillons avant que le levier ne s'étende. Commencez à recueillir une portion de chaque échantillon de dialysat pour l'analyse de l'éthanol en pipettant un aliquot approprié de dialysat dans un flacon en verre de deux millilitres et en scellant le flacon avec une septum étanche, pipetez et scellez rapidement les échantillons d'éthanol.Étant donné que l'éthanol est volatil et que le volume d'échantillon est faible, une préparation incohérente ou lente des échantillons entraînera des résultats inexacts. Conserver le reliquat pour l'analyse des neurotransmetteurs. La période de consommation de 20 minutes commence après que le programme informatique de Med Associates ait sorti le levier dans la chambre et que le rat appuie dessus pour accéder à une bouteille de solution buvable.Continuer à prélever des échantillons tout au long de la période de consommation de boisson. Une fois la période de boisson terminée, le programme informatique retire la bouteille de la chambre. Maintenir l’animal dans la chambre pendant une période postérieure supplémentaire de 20 minutes à la fin de l’expérience de microdialyse. Après avoir anesthésié le rat, retirer la sonde.Si l’animal n’est pas euthanasié de manière humanitaire immédiatement, remplacez l’obturateur afin d’assurer la visualisation du trajet de la sonde. Prélevez le cerveau dans les trois jours suivant l’expérience. Analysez les échantillons conjointement avec des étalons externes d’éthanol à l’aide d’un chromatographe en phase gazeuse muni d’un détecteur à ionisation de flamme, d’un échantillonneur automatique en espace de tête chauffé à 50 degrés Celsius, et d’une colonne capillaire utilisant l’hélium comme phase mobile.Pour enregistrer et analyser les chromatogrammes, utilisez un logiciel de station de travail en chromatographie afin de préparer le système pour l'analyse de l'éthanol. Utilisez un bain-marie à circulation d'eau pour chauffer la plaque de l'échantillonneur automatique et ouvrez les bouteilles d'air et d'hydrogène. Ensuite, lancez le programme de démarrage.Lorsqu'elle est prête, initier une combustion de 20 minutes, qui décontamine la fibre. Préparer des étalons à l'aide d'une fiole jaugée de 100 millilitres en diluant 238 microlitres d'éthanol à 95 % avec de l'eau jusqu'à un volume final de 100 millilitres. Utiliser une dilution sérielle un-à-un pour créer les étalons.Prélèvez les étalons à l’aide d’une pipette et placez-les dans des vials en verre que vous scellerez exactement comme les échantillons préparés. Veillez à inclure un blanc d’eau parmi vos étalons. Placez les étalons et les échantillons dans le plateau de l’auto-échantillonneur, puis chauffez-les jusqu’à ce que toute la prise aliquote liquide soit complètement vaporisée.Pour exécuter les échantillons et les standards, créez une liste d'échantillons indiquant quel échantillon se trouve dans chaque emplacement du carrousel automatique, et précisez que chaque échantillon doit être perforé. Une fois les fichiers de données dirigés vers un dossier sélectionné, choisissez une méthode appropriée pour les échantillons et lancez l'analyse. Après que le système ait traité tous les échantillons, vérifiez que le programme a correctement intégré chaque pic.Tracez la hauteur des pics en fonction de chaque étalon externe connu. Concentration en éthanol. Utilisez la fonction linéaire fournie par les points pour interpoler la concentration en éthanol de chaque échantillon de dialysat.Cette figure présente des exemples de chromatogrammes pour trois concentrations d'étalons d'éthanol et un échantillon de dialysat de rat recueilli à la fin de la séance d'auto-administration d'éthanol. Les pics d'éthanol doivent être relativement symétriques, présenter des temps de rétention constants et un rapport signal sur bruit supérieur à 10. L'incapacité à satisfaire à ces critères indique que le système nécessite un entretien, une chromatographie de qualité, et que les étalons correctement préparés produisent une courbe d'étalonnage linéaire utilisée pour calculer la concentration d'éthanol dans les échantillons de dialysat prélevés chez les animaux s'auto-administrant de l'éthanol au cours de leur séance d'auto-administration.Les concentrations d'éthanol dérivées dans le dialysat ne sont pas corrigées en fonction du rendement du capteur in vivo et ne représentent qu'une fraction de la concentration tissulaire cérébrale en éthanol. Si une microdialyse quantitative de l'éthanol est requise, la fraction d'extraction de l'éthanol qui diffuse depuis l'espace extracellulaire vers le capteur est déterminée expérimentalement. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en quatre à cinq heures environ, si elle est effectuée correctement.Cela variera en fonction de la durée de la session comportementale. La réussite de la phase de microdialyse de l'expérience dépend grandement de la qualité des phases préparatoires. Lors de la réalisation de cette procédure, il est essentiel de s'assurer que vos rats sont bien manipulés et qu'ils ont été habitués à tout stimulus potentiellement perturbateur pouvant survenir pendant l'expérience de dialyse, afin que le comportement d'automédication de l'animal ne soit pas affecté.

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Voici un protocole pour le modèle 2BC/CIE de dépendance à l’alcool chez la souris afin d’étudier les troubles liés à la consommation d’alcool.

L’exposition chronique intermittente à la vapeur d’éthanol associée au choix de deux bouteilles pour modéliser le trouble lié à la consommation d’alcool

Ce protocole décrit un paradigme standard de consommation en cage domestique à accès intermittent à deux bouteilles pour modéliser la consommation d’alcool chez les rats. De plus, il fournit des instructions étape par étape pour compléter le protocole standard avec un système de détection de léchage DIY qui permet une analyse microstructurelle du comportement de consommation.

Modélisation de la consommation d’alcool chez les rongeurs à l’aide de la consommation en cage à domicile et de l’analyse microstructurelle

L'auto-administration de drogue et les vocalisations ultrasoniques (USV) sont utilisés comme des évaluations comportementales dans la recherche animale, mais rarement en association. Le but de cet article est de décrire les avantages de l'USV enregistrement pendant l'auto-administration de drogue procédures pour évaluer les réponses affectives à l'expérience de drogue.

Évaluation de vocalisations ultrasoniques Pendant médicaments auto-administration chez le rat

Apprenez la microdialyse cérébrale chez le rat pour surveiller l'éthanol pendant l'auto-administration opérante. Cette méthode par chromatographie en phase gazeuse permet une analyse en temps réel des mécanismes d'addiction.

Microdialyse déthanol au cours de léthanol détermination opérant auto-administration et déthanol par chromatographie en phase gazeuse (Vidéo) | JoVE Journal

Microdialyse d'éthanol au cours de l'éthanol détermination opérant auto-administration et d'éthanol par chromatographie en phase gazeuse

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