Name: Les tissus dingénierie muscle squelettique de myoblastes murins cellules progénitrices et application dune stimulation électrique (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-19T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 38 s
Description: Découvrez l'ingénierie de tissus musculaires squelettiques à partir de myoblastes murins et l'application d'une stimulation électrique pour induire des contractions et analyser l'organisation sarcomérique.

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Les auteurs tiennent à remercier Yabin Wu pour la culture des tissus présentés dans la figure 2, l&#39;image a été prise par Bart van Overbeeke. Ce travail a été soutenu financièrement par SenterNovem, ISO 42022 subvention.

1. Culture de myoblastes murins cellules progénitrices ou des cellules C2C12 <ol><li> Isoler les cellules selon le protocole initialement publié par Shefer et ses collègues 10 et plus tard adapté par Collins et al. 11 et Boonen et al. 12 et les conserver dans l&#39;azote liquide. Cela nécessite la souris, par exemple C57BL / 6. D&#39;autres méthodes sont utilisées dans d&#39;autres laboratoires, par exemple, une méthode publiée dans le Journal of expériences visualisées par Li Y et al. 13. Pour les réactifs et les équipements sont renvoyés au tableau de la page 7 et 8. Depuis le muscle d&#39;une souris, vous aurez généralement obtenir suffisamment de cellules pour la cryoconservation environ 20 flacons dans l&#39;azote liquide. Ensuite, nous commençons le protocole de décongeler les cellules du stockage d&#39;azote liquide. </li><li> Placer les cellules du flacon 1 dans un 25 cm 2 Matrigel (1 mg / ml) revêtu flacon de culture tissulaire et ajouter le milieu de croissance (GM) constitué de (335 ml de DMEM advanced, 100 ml bovin foetale sérum (FBS), 50 ml SH, 5 ml de pénicilline / streptomycine, 5 ml de L-glutamine, 5 ml d&#39;extrait d&#39;embryon de poulet (CEE)). </li></ol> Remarque: manteau pendant 2 heures à température ambiante et retirez le Matrigel par aspiration. <ol start="3"><li> Sous-culture des cellules d&#39;environ 1:3 tous les 3 jours. Cela signifie: jour 3: cellules passage d&#39;un 25 cm 2 à un flacon de 75 cm2, le jour 6: cellules de passage d&#39;un flacon de 75 cm2 à deux flacons de 150 cm2 (avec 30 min de prédépôt dans des flacons non couchés). Le jour 9 transfert unique 150 cm 2 flacon de 1 triple ballon de 150 cm 2, ou à défaut à trois flacons de 150 cm 2 (si nécessaire preplate nouveau en fonction du phénotype des cellules). Le jour 12, les cellules sont prêtes pour l&#39;ensemencement dans une construction musculaire. </li></ol> Notes: - Par trois fois 150 cm 2 le nombre de cellules sera d&#39;environ 4,5 x 10 6 cellules. - Utilisez vials de isolements différents pour les mélanger pour obtenir une population mixte de cellules au moment de l&#39;ensemencement. Remarque: Si vous choisissez de ne pas travailler avec des cellules primaires, myoblastes C2C12 sont une bonne alternative. 2. Ingénierie des tissus musculaires squelettiques <ol><li> Préparer la colle silicone en mélangeant le &quot;élastomère&quot; avec le &quot;durcisseur&quot; (10:1). Couper + / - 5 mm segments carrés de Velcro avec un côté triangulaire (maison-comme la forme, la figure 1). Coller le velcro dans les puits d&#39;une plaque de culture à 6 puits dans un espace d&#39;environ 12 mm entre les carrés. </li></ol> Remarques: - Utilisez uniquement le côté doux du velcro et faire face à ce côté vers le haut. - Assurez-vous que les toits en face de l&#39;autre. - Ne couvrez le velcro avec colle silicone, colle ne se propagent pas à travers le puits. - Pour la stimulation électrique ultérieure, il est pertinent d&#39;aligner les constructions dans le sens vertical du puits jmangé (le long de l&#39;axe long). <ol start="2"><li> Laisser sécher une nuit dans un four sous vide, pas chauffé, principalement pour éliminer les bulles d&#39;air. Stériliser en ajoutant EtOH à 70% dans les puits et incuber pendant 15 min. Rincer 3x avec PBS et mis sous UV pendant 15 min. Retirez tous PBS dans les puits et le Velcro et le lieu dans l&#39;incubateur jusqu&#39;à leur utilisation. </li><li> Décongeler la solution au réfrigérateur Matrigel et préparer la solution de collagène à la concentration désirée avant d&#39;effectuer rapidement les constructions 3D. Diluer le collagène stérile stock avec l&#39;acide acétique 0,02% (concentration finale de 3,2 mg / ml). </li></ol> Remarque: tout laisser sur la glace. <ol start="4"><li> Trypsiniser les cellules, remettre en suspension dans GM et le nombre. Laisser les cellules dans un tube de centrifugation dans l&#39;incubateur. </li><li> Ajouter la quantité voulue de solution de collagène pour le nombre de constructions que vous voulez faire un tube (selon le tableau 1), ajouter 0,5 M NaOH à cette solution de collagène jusqu&#39;à ce qu&#39;une lumière colo roseR indique un pH de 7,5. Mélanger doucement par pipetage de haut en bas et d&#39;éviter la formation de bulles. Puis ajouter le Matrigel et mélanger très délicatement mais soigneusement. Enfin, ajoutez le au mélange GM collagène / Matrigel (pour les quantités appropriées voir tableau 1). </li></ol> Notes: - Effectuez chaque étape sur la glace! Matrigel et du collagène sera facile de gel à température augmente. - Occupe-toi que la couleur est bien rose! L&#39;augmentation du pH va également induire une gélification rapide. - La concentration finale de collagène: 1,6 mg / ml. <ol start="6"><li> Centrifuger la quantité désirée de cellules à 1000 rpm pendant 5 min et éliminer le surnageant. </li></ol> Remarque: - En fonction de l&#39;activité des cellules du nombre de cellules par la construction doit être ajusté. En règle générale, le nombre de cellules se situe entre 750.000 et 1.250.000 cellules par construction. <ol start="7"><li> Utiliser une partie du mélange de gel pour remettre en suspension le culot cellulaireet transférer les cellules dans le mélange restant et mélanger soigneusement, mais sans introduire de bulles d&#39;air. </li><li> Prenez les assiettes préchauffées et hors de l&#39;incubateur et pipette de 0,35 ml -0.4 du mélange de cellules-gel dans le premier Velcro. Puis, commencez à introduire à la pipette le mélange du centre entre les sites de fixation et d&#39;étendre à la bande Velcro. Enfin, utiliser le reste de gel pour combler le fossé entre les ancrages velcro deux et pipettes autour des morceaux de Velcro. </li><li> Vérifiez soigneusement après 5-10 min si les gels sont suffisamment solides pour être transférés, c&#39;est-à tapoter doucement les plats et inspecter visuellement si le gel est rigide. Si c&#39;est le cas, placez soigneusement la vaisselle dans un incubateur. Habituellement, ils peuvent être ramassés au bout de dix minutes. Puis, après hr 1-2, doucement recouvrir chaque gel avec 4 ml d&#39;eau tiède GM. </li></ol> Remarque:-Ne faites pas de mouvements vigoureux lors de la manipulation des plaques. <ol start="10"><li> Remplacer par GM milieu de différenciation (milieu de croissancesans extrait d&#39;embryon de poulet) au bout de 24 h, et le remplacer par du milieu frais tous les 2-3 jours. Le jour 7, vous devez avoir obtenu fibres musculaires matures orientées, comme on peut être évaluée avec la coloration pour le développement striation transversale dans les fibres musculaires fusionnées. </li></ol> 3. Stimulation électrique <ol><li> Stériliser les électrodes de la plaque ionoptix (voir tableau des réactifs et du matériel) avant de l&#39;utiliser avec de l&#39;éthanol 70% puis séché sous UV dans une enceinte de sécurité. Placer la plaque d&#39;électrodes sur la plaque de culture avec les constructions et couvrir avec le couvercle de la plaque de culture et transfert dans un incubateur. Branchez le Ionoptix C-stimulateur avec les câbles appropriés. </li></ol> Remarque: Les électrodes sont placées parallèlement aux côtés de la construction musculaire (figure 2). <ol start="2"><li> Appliquer le protocole de stimulation comme prévu. </li></ol> Remarque: Nous utilisons généralement 4 V / cm,6 ms impulsions à une fréquence de 2Hz. Changer milieu de culture tous h 24 pendant la stimulation.

<ol><li>Langelaan, M. L. P., Boonen, K. J. M., Polak, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meet+the+new+meat%3A+tissue+engineered+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Food+Sci.+Tech%22%5BJournal%5D)">Meet the new meat: tissue engineered skeletal muscle.</a> Trends Food Sci. Tech. 21 (2), 59-66 (2010).</li>
<li>Shansky, J., Chromiak, J., Tatto, M., Vandenburgh, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+method+for+tissue+engineering+skeletal+muscle+organoids+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev.+Biol.+Animal%22%5BJournal%5D)">A simplified method for tissue engineering skeletal muscle organoids in vitro.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. Animal. 33 (9), 659-661 (1997).</li>
<li>Vandenburgh, H., Del Tatto, M., Shansky, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+skeletal+muscle+organoids+for+reversible+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered skeletal muscle organoids for reversible gene therapy.</a> Hum. Gene Ther. 7 (17), 2195-2200 (1996).</li>
<li>Yaffe, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retention+of+differentiation+potentialities+during+prolonged+cultivation+of+myogenic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Retention of differentiation potentialities during prolonged cultivation of myogenic cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 61 (2), 477-483 (1968).</li>
<li>Rando, T. A., Blau, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+mouse+myoblast+purification%2C+characterization%2C+and+transplantation+for+cell-mediated+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Primary mouse myoblast purification, characterization, and transplantation for cell-mediated gene therapy.</a> J. Cell Biol. 125 (6), 1275-1287 (1994).</li>
<li>Koning, M., Werker, P. M. N., vander Schaft, D. W. J., Bank, R. A., Harmsen, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-1+and+MicroRNA-206+Improve+Differentiation+Potential+of+Human+Satellite+Cells%3A+A+Novel+Approach+for+Tissue+Engineering+of+Skeletal+Muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-1 and MicroRNA-206 Improve Differentiation Potential of Human Satellite Cells: A Novel Approach for Tissue Engineering of Skeletal Muscle.</a> Tissue Eng. Part A. , (2011).</li>
<li>Darabi, R., Pan, W., Bosnakovski, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+myogenic+engraftment+from+mouse+iPS+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev%22%5BJournal%5D)">Functional myogenic engraftment from mouse iPS cells.</a> Stem Cell Rev. 7 (4), 948-957 (2011).</li>
<li>Langelaan, M. L. P., Boonen, K. J. M., Rosaria-Chak, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+maturation+by+electrical+stimulation%3A+Differences+in+response+between+C2C12+and+primary+muscle+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Tissue+Eng.+Regen.+Med%22%5BJournal%5D)">Advanced maturation by electrical stimulation: Differences in response between C2C12 and primary muscle progenitor cells.</a> J. Tissue Eng. Regen. Med. 5 (7), 529-539 (2011).</li>
<li>van der Schaft, D., van Spreeuwel, A. C., van Assen, H. C., Baaijens, F. Mechanoregulation of vascularization in aligned tissue engineered muscle; a role for VEGF. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3avan+der+Schaft%2C+D+%22Tissue+Eng.+Part+A%22">Tissue Eng. Part A</a>. , (2011).</li>
<li>Shefer, G., Wleklinski-Lee, M., Yablonka-Reuveni, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+satellite+cells+can+spontaneously+enter+an+alternative+mesenchymal+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Sci%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle satellite cells can spontaneously enter an alternative mesenchymal pathway.</a> J. Cell. Sci. 117 (Pt. 22), 5393-5404 (2004).</li>
<li>Collins, C. A., Olsen, I., Zammit, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+function%2C+self-renewal%2C+and+behavioral+heterogeneity+of+cells+from+the+adult+muscle+satellite+cell+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Stem cell function, self-renewal, and behavioral heterogeneity of cells from the adult muscle satellite cell niche.</a> Cell. 122 (2), 289-301 (2005).</li>
<li>Boonen, K. J. M., Rosaria-Chak, K. Y., Baaijens, F. P. T., van der Schaft, D. W. J., Post, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+environmental+cues+from+the+satellite+cell+niche%3A+optimizing+proliferation+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Essential environmental cues from the satellite cell niche: optimizing proliferation and differentiation.</a> Am. J. Physiol. Cell Physiol. 296 (6), C1338-C1345 (2009).</li>
<li>Li, Y., Pan, H., Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolating+Stem+Cells+from+Soft+Musculoskeletal+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolating Stem Cells from Soft Musculoskeletal Tissues.</a> J. Vis. Exp. (41), e2011(2010).</li>
<li>Boonen, K. J. M., Langelaan, M. L. P., Polak, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+a+combined+mechanical+stimulation+protocol%3A+Value+for+skeletal+muscle+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomech%22%5BJournal%5D)">Effects of a combined mechanical stimulation protocol: Value for skeletal muscle tissue engineering.</a> J. Biomech. 43 (8), 1514-1521 (2010).</li>
<li>Gawlitta, D., Boonen, K. J. M., Oomens, C. W. J., Baaijens, F. P. T., Bouten, C. V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+serum-free+culture+conditions+on+skeletal+muscle+differentiation+in+a+tissue-engineered+model%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">The influence of serum-free culture conditions on skeletal muscle differentiation in a tissue-engineered model.</a> Tissue Eng. Part A. 14 (1), 161-171 (2008).</li>
<li>Koning, M., van Luijn, M., van der Schaft, D. W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+skeletal+muscle+formation+and+engraftment+In+vivo+is+independent+of+preconditioning+In+vitro+with+HUVEC%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Human skeletal muscle formation and engraftment In vivo is independent of preconditioning In vitro with HUVEC.</a> , In revision (2013).</li>
<li>Levenberg, S., Rouwkema, J., Macdonald, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+vascularized+skeletal+muscle+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Engineering vascularized skeletal muscle tissue.</a> Nat. Biotechnol. 23 (7), 879-884 (2005).</li>
<li>Koffler, J., Kaufman-Francis, K., Yulia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+vascular+organization+enhances+functional+integration+of+engineered+skeletal+muscle+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Improved vascular organization enhances functional integration of engineered skeletal muscle grafts.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108 (36), 14789-14794 (2011).</li>
</ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à révéler.

L&#39;ingénierie des tissus musculaires a un grand potentiel pour l&#39;utilisation comme un modèle de la maladie, pour le criblage de médicaments, la médecine régénérative et pour la production de viande. Toutefois, les exigences de ces applications varient. Nous avons choisi de travailler avec une combinaison de collagène et d&#39;matrigel, parce que le collagène permet l&#39;alignement des cellules et parce que les cellules progénitrices de myoblastes nécessitent la présence de protéines de membrane basale dérivés te...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires (optionnel) </td></tr><tr><td> Matrigel-facteur de croissance réduit </td><td> Beckton Dickinson et </td><td></td><td></td></tr><tr><td> DMEM (glycémie élevée) * </td><td> Gibco </td><td> 42430 </td><td></td></tr><tr><td> Avancée DMEM </td><td> Gibco </td><td> 12491 </td><td></td></tr><tr><td> Sérum de cheval </td><td> Gibco </td><td> 65050-122 </td><td></td></tr><tr><td> Sérum de veau fœtal </td><td> Greiner </td><td> 758075 </td><td></td></tr><tr><td> 0,45 et 0,22 um seringue filtre * </td><td> Whatmann (Schleicher et Scheull) </td><td> 10462100 </td><td></td></tr><tr><td> L-glutamine </td><td> Gibco </td><td> 25030024 </td><td></td></tr><tr&gt; <td> Pénicilline / streptomycine </td><td> Gibco </td><td> 10378016 </td><td></td></tr><tr><td> Amphotéricine </td><td> Gibco </td><td> 15290-018 </td><td></td></tr><tr><td> Culture en plastique </td><td> Greiner </td><td></td><td> Comprend des flacons de culture et de pipettes </td></tr><tr><td> Extrait d&#39;embryon de poulet </td><td> Etats-Unis biologique </td><td> C3999 </td><td></td></tr><tr><td> Pipette Pasteur * </td><td> Hilgenberg </td><td></td><td> Pipettes Pasteur, avec constriction, avec du coton, L pointe ouverte: 230 mm avec diamètre de pointe de 0,9 - 1,1 mm </td></tr><tr><td> Pipette Pasteur * </td><td> Hilgenberg </td><td></td><td> Pipettes Pasteur, avec constriction, avec du coton, L pointe ouverte: 230 mm avec diamètre de pointe de 1,4 - 1,6 mm </td></tr><tr><td> Pipette Pasteur </td><td> VWR </td><td> 612-1702 </td><td></td></tr><tr><td> Collagénase de type I* </td><td> Sigma </td><td> C0130-16 </td><td></td></tr><tr><td> 40 um tamis cellulaire * </td><td> BD Falcon </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> Aiguille 19G </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Élastomère </td><td> Dow Corning Corporation </td><td> 3097358-1004 </td><td> Silastic MDX 4-4210 # </td></tr><tr><td> Durcisseur </td><td> Dow Corning Corporation </td><td></td><td> Silastic MDX 4-4210 # </td></tr><tr><td> Velcro </td><td> Magasin ordinaire </td><td></td><td> Vous pouvez acheter ce dans un magasin régulier, utilisez uniquement le côté doux </td></tr><tr><td> Le collagène de type I, queue de rat </td><td> BD Biosciences </td><td> 3544236 </td><td></td></tr><tr><td> C-Pace Pacer Culture EP </td><td> Ionoptix </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Des boîtes de culture à 6 puits pour la stimulation électrique </td><td> Beckton Dickinson-Falcon </td><td> BD Falcon # 353846 </td><td></td></tr><tr><td> C-vaisselle électrodes boîte de culture </td><td> Ionoptix </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> * Nécessaire pour l&#39;isolement de cellules (point 1.1) # Ensemble dans un kit </td></tr></tbody></table>

les tissus d&#39;ingénierie muscle squelettique de myoblastes murins cellules progénitrices et application d&#39;une stimulation électrique

Engineering Skeletal Muscle Tissues from Murine Myoblast Progenitor Cells and Application of Electrical Stimulation

Les tissus musculaires modifiées peuvent être utilisées à des fins différentes, qui comprend la production de tissus pour une utilisation en tant que modèle in vitro la maladie, par exemple pour étudier les escarres, pour la médecine régénérative et en tant que solution de rechange 1 viande. Les premières constructions rapportées musculaires 3D ont été faites il ya plusieurs années et pionniers dans le domaine sont Vandenburgh et ses collègues 2,3. Les progrès réalisés dans l&#39;ingénierie des tissus musculaires ne sont pas seulement le résultat du gain vaste connaissance des facteurs biochimiques, les cellules souches et les cellules progénitrices, mais sont en base notamment sur les connaissances acquises par les chercheurs que les facteurs physiques jouent un rôle essentiel dans le contrôle du comportement cellulaire et développement du tissu. State-of-the-art musculaire ingénierie construit actuellement composé de constructions d&#39;hydrogel cellules peuplées. Dans notre laboratoire, ceux-ci sont généralement constitués de cellules murines souches isolées à partir de myoblastes murins, les muscles des membres postérieurs ou une ligne de myoblastes murins C2C12, mixe avec un mélange de collagène / Matrigel et étalées entre deux points d&#39;ancrage, mimant les ligaments musculaires. D&#39;autres cellules peuvent être pris en compte, par exemple, des lignées cellulaires alternatives telles que les myoblastes de rat L6 4, néonatale cellules musculaires précurseurs dérivés 5, les cellules dérivées de tissus musculaires adultes d&#39;autres espèces telles que 6 humaine ou même cellules souches pluripotentes induites (cellules iPS) 7 . La contractilité cellulaire provoque l&#39;alignement des cellules le long de l&#39;axe long de la construction et de 8,9 différenciation des cellules progénitrices musculaires après environ une semaine de culture. En outre, l&#39;application d&#39;une stimulation électrique peut améliorer le processus de différenciation dans une certaine mesure 8. En raison de sa taille limitée (8 x 2 x 0,5 mm), le tissu complet peut être analysée en utilisant la microscopie confocale à surveiller la viabilité, par exemple, la différenciation et l&#39;alignement des cellules. Selon l&#39;application spécifique, les exigences relatives à l&#39;ingéle tissu musculaire rouge varie; par exemple l&#39;utilisation pour la médecine régénérative nécessite la mise à l&#39;échelle de la taille et de la vascularisation des tissus, tandis que pour servir de translation alternatif de la viande à d&#39;autres espèces est nécessaire.

Le produit final sera constructions musculaires, comme indiqué à la figure 3. La taille du tissu sera d&#39;environ 8 mm de long, 2 mm de large et 0,5 mm d&#39;épaisseur. La stimulation électrique au cours de la différenciation va changer l&#39;expression des isoformes de myosine à chaîne lourde, mais n&#39;a pas grandement améliorer le processus de différenciation induite par le support 8 différenciation, mais la stimulation électrique peut également être appliqué à la fin du processus pour vérifier la...

Tissu musculaire d&#39;ingénierie a un grand potentiel pour la médecine régénératrice, comme modèle de la maladie et aussi comme une source alternative pour la viande. Nous décrivons ici la technique d&#39;une construction musculaire, dans ce cas, à partir de cellules souches de souris myoblastes, ainsi que la stimulation par des impulsions électriques.

Les tissus d&#39;ingénierie muscle squelettique de myoblastes murins cellules progénitrices et application d&#39;une stimulation électrique

Les tissus musculaires d'ingénierie peuvent être utilisés à plusieurs fins différentes, notamment la production de tissus destinés à servir de modèle de maladie in vitro, par exemple pour...

L'objectif général de cette procédure est de produire des tissus musculaires ingénierisés. Cela est réalisé en premier lieu en cultivant des cellules satellites ou une lignée cellulaire de myoblastes afin d'obtenir le nombre requis de cellules. La deuxième étape consiste à fabriquer les points d'ancrage.Ensuite, les cellules sont mélangées à un gel et le mélange obtenu est coulé entre les points d'ancrage. La dernière étape consiste à différencier les cellules en tissu musculaire. Enfin, une stimulation électrique peut être utilisée pour induire la contraction des cellules, et une coloration fluorescente ainsi que la microscopie fluorescente ou confocale peuvent être utilisées pour détecter l'organisation sarcomérique du cytosquelette dans les cellules musculaires différenciées.Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes est que les cellules musculaires s'alignent dans une seule direction au sein de ces tissus. Cette technique présente également des implications pour les patients souffrant de perte musculaire. Si nous utilisons, par exemple, à l'avenir les cellules du patient lui-même pour fabriquer ces tissus, ceux-ci pourront être utilisés à des f

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La technique de micro-disséqués explants est une méthode robuste et fiable pour isoler proliférative des cellules musculaires squelettiques de juvéniles, adultes ou embryonnaires muscles comme source de cellules souches du muscle squelettique. Uniquement, ces cellules ont été tirés par clonage pour produire des lignes squelettiques musculaires cellules souches utilisées pour la transplantation in vivo.

Adultes et embryonnaires Culture squelettique Microexplant musculaire et isolement de cellules souches du muscle squelettique

Un modèle murin de la stimulation électrique neuromusculaire (NMES), une modalité sûre et peu coûteuse clinique, aux muscles compartiment antérieur est décrit. Ce modèle a l'avantage de la modification d'un dispositif de facilement disponibles clinique dans le but de provoquer des contractions musculaires ciblées et spécifiques chez la souris.

Un modèle murin de la formation du muscle par stimulation neuromusculaire électrique

Isolement et culture des fibres musculaires est...

Isolement et culture des fibres musculaires individuelles et de leurs cellules satellites du muscle squelettique adulte

Les progéniteurs myogéniques dérivés de cellules souches pluripotentes induites (csps) sont des candidats prometteurs pour les stratégies de thérapie cellulaire visant à traiter les dystrophies musculaires. Ce protocole décrit la transplantation et les mesures fonctionnelles exigées pour évaluer l’engraftment et la différentiation des mesoangioblasts iPSC-dérivés (un type de progéniteurs de muscle) dans des modèles murins de régénération aiguë et chronique de muscle.

Transplantation de progéniteurs myoangioblastes dérivés de cellules souches pluripotentes induites dans des modèles murins de régénération musculaire

Ce protocole utilise l’électroporation pour introduire et exprimer des protéines marquées par fluorescence dans les fibres musculaires de souris. Après récupération après électroporation, les fibres sont isolées. Les fibres individuelles sont ensuite imagées à l’aide de la microscopie confocale à haute résolution pour visualiser la structure musculaire.

ADN électroporation, isolement et d&#39;imagerie de myofibres

Les auteurs décrivent une nouvelle technique expérimentale que nous appelons minimalement Invasive Muscle Embedding (MIME), qui repose sur la preuve que le tissu musculaire squelettique contienne des cellules myogènes viables pouvant faciliter la myogenèse donneur-cell-mediated lorsqu’elles sont implantées dans un muscle de l’hôte.

Mini-Invasive Muscle enrobage (MIME) - une nouvelle Technique expérimentale pour faciliter des donateurs-Cell-Mediated myogenèse

Nous présentons ici un protocole pour la formation d’une population de cellules à l’aide de stimuli électriques et mécaniques, émulant la physiologie cardiaque. Cette stimulation électromécanique améliore le potentiel de cardiomyogénique des cellules traitées et est une stratégie prometteuse pour autre thérapie cellulaire, modélisation de la maladie et dépistage des drogues.

Stimulation électrique et mécanique simultanée pour promouvoir le potentiel de cellules Cardiomyogénique

Les myoblastes sont des cellules précurseurs proliférantes qui se différencient pour former des myotubes polynucléés et éventuellement des myofibres musculaires squelettiques. Ici, nous présentons un protocole pour l'isolement efficace et la culture des myoblastes primaires des muscles squelettiques de souris jeunes adultes. La méthode permet des études moléculaires, génétiques et métaboliques des cellules musculaires en culture.

Isolement et différenciation des myoblastes primaires des explantations de muscle squelettique de souris

Dans ce protocole, une méthode de culture in vitro et d’analyse fonctionnelle des cellules souches musculaires est décrite, qui préserve la plupart de leurs interactions avec leur niche endogène.

Essai de culture de myofibère unique pour l’évaluation de la fonctionnalité des cellules souches musculaires adultes Ex Vivo

Ce manuscrit décrit un protocole détaillé pour produire des réseaux de microtissus musculaires squelettiques humains en 3D et des tests de fonction in situ en aval mini-invasifs, y compris des analyses de force contractile et de manipulation du calcium.

Évaluation des mesures fonctionnelles de la santé des muscles squelettiques dans les microtissus musculaires squelettiques humains

La clarté optique est un avantage majeur pour le travail biologique et physiologique cellulaire chez le poisson zèbre. Des méthodes robustes de mesure de la croissance cellulaire chez des animaux individuels sont décrites qui permettent de mieux comprendre comment la croissance des muscles squelettiques et des tissus voisins est intégrée à la croissance du corps entier.

Mesure en temps réel et répétée de la croissance musculaire squelettique chez un poisson-zèbre vivant soumis à une activité électrique altérée

Découvrez l'ingénierie de tissus musculaires squelettiques à partir de myoblastes murins et l'application d'une stimulation électrique pour induire des contractions et analyser l'organisation sarcomérique.

Les tissus dingénierie muscle squelettique de myoblastes murins cellules progénitrices et application dune stimulation électrique (Vidéo) | JoVE Journal

Les tissus d'ingénierie muscle squelettique de myoblastes murins cellules progénitrices et application d'une stimulation électrique

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