Name: La transmission des virus de plante à laide aleurodes (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-08T08:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 22 s
Description: Découvrez les méthodes d'élevage de Bemisia tabaci pour la transmission de virus végétaux en conditions contrôlées. Ces protocoles optimisés permettent d'atteindre des taux de transmission proches de 100%.

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1. Whitefly entretien de la colonie <ol><li> Conditions environnementales: colonies aleurodes devraient être maintenus dans une chambre de croissance maîtrisée. Contrôle de l&#39;humidité relative, la température, la photopériode et intensité lumineuse sont essentiels pour la croissance des colonies optimale (figure 1). Une température de 28 ° C, 30-50% d&#39;humidité relative, et de 14 h photopériode donnera une colonie qui se développe à partir de l&#39;œuf à l&#39;émergence des adultes en 18 jours (cette durée varie avec la plante hôte). L&#39;humidité relative doit être maintenue en dessous de 70% pour décourager la croissance des insectes et de plantes pathogènes fongiques. les taux d&#39;engrais et l&#39;arrosage doit être réduite à décourager les pathogènes fongiques et l&#39;accumulation de sel. L&#39;intensité lumineuse de la colonie devrait être assez élevé. Ampoules fluorescentes VHO utilisés en nombre suffisant pour générer environ 800-1000 bougies pieds à la hauteur de la canopée sont suffisants pour la plupart des plantes (ie. Coton, haricot, haricot de Lima, tomate). La propreté est essentielle dansune colonie aleurode de maintenir des conditions optimales d&#39;élevage. </li><li> Cages Colony: aleurodes devraient être maintenus sur les plantes dans des cages, plutôt que gratuitement dans la chambre de croissance. Cages peuvent être construits de divers matériaux, mais doivent permettre: ventilation, la facilité d&#39;accès, la capacité d&#39;empêcher la fuite ou infiltration d&#39;aleurodes, et de taille suffisante pour maintenir suffisamment de plantes pour générer la population d&#39;aleurodes nécessaire. De bons résultats ont été obtenus avec organza dépistage aluminium (pour la force) ainsi que le dépistage aleurodes preuve (voir le tableau de l&#39;équipement et des fournitures spécifiques). </li><li> Colony Préparation de la plante: Les espèces de plantes choisies est une considération importante lors du démarrage d&#39;une colonie aleurodes. L&#39;usine devrait être en mesure de soutenir une forte population d&#39;insectes sans s&#39;effondrer. La plante choisie pour une colonie nonviruliferous doit être un non hôte pour le virus ou virus qui sont destinés à être transmis pour éviter la contamination de la colonie et si le maintien d&#39;un viruliferous colonie, il doit être l&#39;hôte du virus. Les plantes doivent croître assez rapidement pour soutenir l&#39;émergence de nouveaux adultes dans les 18 jours après avoir été mis en place à la colonie, mais pas aussi rapidement que pour dépasser les cages dans les quatre semaines. Nain, buisson, ou cultivars de plantes patio type sont recommandées car elles produisent souvent une zone de feuille semblable à cultivars de grande taille mais sans élongation de la tige. </li><li> Il est très important pour les plantes arrière pour la colonie en serre dans des cages qui excluent les aleurodes et autres insectes. L&#39;utilisation de plantes qui sont infestés par des aleurodes, les thrips, les acariens ou avant d&#39;entrer dans la colonie peut causer la colonie de s&#39;effondrer. Les plantes infestées ont également le potentiel d&#39;être infectées par des virus par les insectes qui vont interférer avec les études de transmission du virus. </li></ol> 2. Mise en place de Colony aleurode <ol><li> Démarrer une colonie pour la première fois en utilisant les aleurodes propres - ceux exempts de virus de plantes, d&#39;autres insectes et les pathogènes d&#39;insectes. Ceux-ci peuvent être obtenusdes collaborateurs ou sur le terrain. Si recueillies sur le terrain, les aleurodes devraient être élevés pendant au moins 8 semaines sur les plantes non-hôtes du virus de la plante, et vérifier l&#39;absence de symptômes de plantes pour être sûr qu&#39;ils sont exempts de virus de plantes. </li><li> Semaine 1: Introduire les aleurodes propres à la première cage de plantes. Les aleurodes peuvent être introduits par aspiration de numéros connus ou en secouant doucement aleurodes d&#39;une autre plante de la source en fonction de la demande sur la colonie. Au cours de la semaine 1, les aleurodes pondent sur la face inférieure de la surface des feuilles de la plante. Une taille approximative de la population peut être prédite pour chaque émergence basé sur le nombre d&#39;adultes utilisées pour pondre leurs œufs et le nombre moyen d&#39;œufs pondus par la femelle mouche blanche sur la plante hôte en question. </li><li> Semaine 2: Commencez autre cage en introduisant des aleurodes de nouvelles plantes-hôtes pour pondre leurs œufs. Les plantes dans la cage ouvertes en semaine 1 auront des œufs, et quelques aleurodes immatures couvrant la face inférieure des feuilles (Figure 2). Certainsaleurodes adultes introduites au cours de la semaine 1 seront encore en vie. </li><li> Semaine 3: Commencer une troisième cage en introduisant des aleurodes de nouvelles usines à pondre des oeufs. Les plantes dans la cage a démarré en semaine 1 aura immature ainsi que de nombreux nouveaux aleurodes adultes émergents et il devrait y avoir une augmentation très sensible de la population adulte aleurodes. Les plantes dans la cage ouvertes en semaine 2 auront beaucoup d&#39;oeufs et les aleurodes immatures couvrant la face inférieure des feuilles. </li><li> Semaine 4: Commencer une quatrième cage en introduisant des aleurodes de nouvelles usines à pondre des oeufs. Les plantes dans la cage ouvertes en semaine 1 auront beaucoup aleurodes adultes qui sont environ un poste émergence d&#39;une semaine. Les plantes dans la cage ouvertes en semaine 2 aura beaucoup de nouveaux aleurodes adultes émergents et il devrait y avoir une augmentation très sensible de la population d&#39;aleurodes. Les plantes dans la cage ouvertes au cours de la semaine 3 auront beaucoup d&#39;oeufs et les aleurodes immatures couvrant la face inférieure des feuilles. </li><li> Hebdomadaire après les 4 premiers weeKS: Chaque semaine, commencer une nouvelle cage en introduisant les aleurodes adultes à partir de la quatrième plus ancienne cage (la cage a commencé dans la semaine 1) sur de nouvelles plantes dans une nouvelle cage propre. La vieille cage doit être enlevé et jeté ses usines. Ces aleurodes sont environ 1 semaine de post-levée. Dans le cas de la colonie virulifères, ces aleurodes transmettent le virus aux nouvelles centrales ainsi que pondre des oeufs pour la prochaine génération des aleurodes. </li><li> expériences de transmission de plan d&#39;utilisation des aleurodes qui émergeront dans la cage de la troisième semaine. Si plus d&#39;aleurodes sont nécessaires, le nombre de plantes peuvent être augmentées et plus aleurodes peuvent être ajoutés à la semaine 1 cage d&#39;augmenter la population d&#39;aleurodes. </li></ol> 3. Méthode pour l&#39;inoculation de plantes d&#39;essai <ol><li> Pour assurer des taux élevés de transmission: 1) Les aleurodes doivent être manipulés aussi doucement que possible pour éviter d&#39;endommager l&#39;insecte qui permettra de réduire les taux de transmission; 2) Il doit y avoir de la surface foliaire suffisante disponible pour les aleurodes à l&#39;IETsa sonde ou animale. Une augmentation de la durée d&#39;acquisition ou d&#39;une augmentation du nombre de plantes hôtes d&#39;acquisition peut augmenter les taux faibles d&#39;infectiosité dans les usines d&#39;essai en raison de l&#39;encombrement soit l&#39;acquisition ou de la période d&#39;accès inoculation. </li><li> Collection de mouches blanches. Ce qui suit est une procédure pour la collecte et la circulation des chiffres précis d&#39;aleurodes nécessaires à des fins expérimentales. Pour déplacer un grand nombre de mouches blanches, comme cela est nécessaire pour le dépistage de la résistance par exemple, il suffit de secouer doucement les plantes aleurodes infestés sur les plantes d&#39;essai ou les hôtes d&#39;acquisition infectées par le virus (et plus tard les usines de test). Assurez-vous de secouer les plantes au cours de nombreux endroits pour minimiser les effets d&#39;agrégation. </li><li> Nouvellement apparus aleurodes adultes (1-3 jours après émergence) sont très actives et se nourrissent souvent de manière tendance à donner des taux de transmission plus élevés 4. Aleurodes plus âgés transmettent encore, mais à une fréquence inférieure. Aleurodes multiples par plante test (15-40 par l&#39;APLnt) doit être utilisé pour des taux élevés de transmission depuis un ratio de 1 aleurodes par plante se traduit souvent par un taux inacceptable de transmission faible 3,4. Le nombre nécessaire dépendra du virus et les espèces de l&#39;acquisition et de plantes d&#39;essai. </li><li> Assemblez dispositifs d&#39;aspiration et des flacons de collecte. (Figure 3) </li><li> D&#39;une main, maintenez une carte en plastique jaune à l&#39;intérieur de la cage de la colonie qui contient les aleurodes à collecter. Tapoter doucement les plantes pour encourager les aleurodes adultes de voler. Les aleurodes sont attirés par un carton jaune et voleront à partir de la plante à la carte où ils peuvent être recueillies à l&#39;aide d&#39;un aspirateur et un souffle très doux. Ne jamais aspirer aleurodes qui se nourrissent sur les plantes. Leurs stylets sont intégrés dans l&#39;usine tout en alimentant ainsi leur arrachant les plantes vont rompre leurs stylets et les rendant incapables de soit d&#39;acquérir ou de transmettre le virus (figure 4). </li><li> Recueillir 20 aleurodes adultes dans un seul colleflacon de ction pour minimiser les dommages physiques aux insectes des aspirations répétées (figure 5). </li><li> Pour changer le flacon de collection, tapotez doucement le flacon sur une surface dure et une casquette avec Parafilm tandis que les aleurodes sont désorientés à partir de la mise sur écoute. </li><li> Mettez un nouveau flacon recueillir sur l&#39;aspirateur et répéter jusqu&#39;à ce que le nombre d&#39;aleurodes nécessaires sont collectées. Les aleurodes peuvent rester dans les flacons de collecte à la température ambiante pendant plusieurs heures. </li><li> Acquisition. Aleurodes sont placées sur une plante infectée par le virus et autorisés à nourrir les plantes infectées pendant 48-72 h. les périodes d&#39;acquisition de plus de 72 heures ne sont généralement pas augmenter les taux de transmission. Pour les virus transmis de manière non persistante ou semipersistent, 1 heure et plusieurs heures, respectivement, sont des périodes d&#39;accès d&#39;acquisition suffisantes (tableau 1). Les meilleurs résultats sont obtenus lorsque les aleurodes ont librement accès à des plantes dans des cages qui enferment les insectes pour une seule plante ou d&#39;plusieurs usines. Cependant, certaines expériences nécessitent l&#39;acquisition de feuilles spécifiques auquel cas cages du clip peuvent être utilisés. Lors de l&#39;utilisation des cages de clip, il est important de tenir compte de la préférence alimentaire aleurode pour le dessous des feuilles. En outre, l&#39;encombrement des aleurodes dans des cages de clip peut réduire les taux de transmission - des taux acceptables de transmission ont été obtenus en utilisant 10 aleurodes femmes par clip cage de 2,5 cm de diamètre. </li><li> Inoculation. Préparer une cage adaptée à la taille de l&#39;inoculation et placer les plantes d&#39;essai à l&#39;intérieur. Si une seule usine doit être inoculé considérer une seule cage de l&#39;usine. Si plus d&#39;une installation doit être inoculé envisager un petit châssis en PVC / sac d&#39;organza cage ou une cage en aluminium (Figure 6). La taille de la cage utilisée pour l&#39;inoculation devrait être légèrement plus la taille de la plante (s) de se faire vacciner. Les taux de transmission plus élevés sont obtenus lorsque les aleurodes sont conservés à proximité du couvert végétal et ne reçoivent pas beaucoup d&#39;espace libre. </li><li> Collection des aleurodes des hôtes d&#39;acquisition dépend des besoins de l&#39;expérience. Si un petit nombre sont nécessaires, aspirer les aleurodes, comme décrit ci-dessus. Placer les flacons de collecte d&#39;aleurodes l&#39;intérieur de la cage près des plantes et retirez le couvercle (figure 7). Ouvrez le flacon et libérer les aleurodes ou inverser et tapotez doucement le flacon pour libérer les aleurodes. Si un grand nombre sont nécessaires simplement déplacer les plantes d&#39;acquisition avec les aleurodes dans les cages où les plantes d&#39;essai sont situés et secouez doucement les aleurodes de la plante hôte d&#39;acquisition. Pour les deux types de mise en place, veillez à répartir les aleurodes dans les plantes pour réduire l&#39;agrégation et assurer une inoculation uniforme. </li><li> Laisser les aleurodes à sonder ou se nourrissent de la quantité appropriée de temps, dépendant de nouveau sur le virus et dans une certaine mesure la plante hôte (tableau 1). </li><li> Vérifiez les aleurodes au moins une fois pendant la période d&#39;accès inoculation pour assurer que les aleurodes sontsondage ou alimentation par l&#39;ouverture de la cage et en tournant quelques feuilles sur chaque plante. </li><li> Pour les périodes d&#39;accès d&#39;inoculation plus, perturber les plantes doucement (en utilisant un bâton de bambou ou équivalent) pour badigeonner le dessus des plantes et d&#39;encourager les aleurodes à redistribuer sur les plantes. Redistribution des aleurodes permet d&#39;assurer un taux de transmission plus élevé en contrant la tendance naturelle des aleurodes au total. </li><li> Résiliation. La période d&#39;accès inoculation se termine par tuer les mouches blanches avec des produits chimiques approuvés. Appliquer deux insecticides uns après les autres: un insecticide de contact à mettre fin rapidement aleurodes adultes et un insecticide systémique de mettre fin aux aleurodes qui se développent dans les semaines qui suivent et ceux qui ont échappé à l&#39;insecticide de contact (figure 8). Un insecticide de contact tels que le savon insecticide et des insecticides systémiques tels que l&#39;imidaclopride ou pymetrozine ont été utilisés avec succès. </li></ol>

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Aucun conflit d&#39;intérêt déclaré.

Les méthodes décrites ici ont été développés sur une période de deux décennies et sont basés sur les informations de base fournies par de nombreuses études sur la transmission aleurode, le comportement et la biologie. Comme il existe de nombreuses publications, ce manuscrit se réfère principalement aux critiques et à quelques publications spécifiques sélectionnés pour illustrer le type de données utilisées pour élaborer cette technique. Il est très important dans cette procédure que les aleurodes sont manipulés doucement depuis la rupture des pattes et des antennes peut conduire à des comportements anormaux et les faibles taux de transmission. Collection avec aspirateurs et autres appareils mécaniques d&#39;aspiration n&#39;a jamais donné de bons résultats. Une autre considération pour le succès est que le nombre de mouches blanches utilisées pour obtenir 100% de transmission des plantes d&#39;essai, doit être déterminé pour chaque combinaison de plante hôte et le virus. Ce ratio optimal ne doit être établi une fois. Les meilleurs résultats ont été obtenus en utilisant jeunes aleurodes adultes (1-3 jours émergence passé), car ils GDonner le plus haut taux de transmission. Les personnes âgées peuvent être utilisés, mais un plus grand nombre d&#39;aleurodes seront nécessaires pour compenser leurs taux réduits de transmission. Les femmes sont connues pour émettre à des taux plus élevés que les hommes, car ils se nourrissent plus souvent que les hommes. Toutefois, il est généralement ne vaut pas le temps de séparer les sexes pour la transmission. Cette procédure peut être modifiée de nombreuses manières en fonction des ressources et des besoins du chercheur. Lorsque l&#39;on travaille avec de nombreux virus, il est préférable de garder une seule colonie de mouches blanches sur les plantes non hôtes élevés du virus. Ces aleurodes peuvent être collectées placé sur les plantes infectées par le virus d&#39;acquisition et puis après acquisition des aleurodes peuvent être déplacées à nouveau pour les plantes d&#39;essai. Végétaux destinés à la colonie doivent être cultivées dans des serres dans des cages afin d&#39;éviter l&#39;introduction de mouches blanches qui pourraient infecter avec un autre virus. Infestation de ces plantes avec les acariens, les thrips et autres ravageurs des plantes peut compromettre l&#39;health de la colonie et la faire s&#39;effondrer. Enfin arrosage des plantes des colonies doit être fait avec soin. Ces plantes sont soumises à un stress extrême par l&#39;alimentation de tant d&#39;aleurodes et les conditions de lumière faible que la normale. Racine champignons de la pourriture qui sont introduits sur la tourbe dans les mélanges sans terre peut devenir un problème si les plantes sont trop mouillées, même une fois. Le prétraitement des plantes avec un fongicide arrosage peut éliminer certains des problèmes. Bien que la transmission aleurode des virus de plantes peut prendre du temps et nécessiter des ressources précieuses (telles que les salles de croissance), il est essentiel pour la transmission de certains virus pour lesquels nous n&#39;avons pas d&#39;autre moyen de transmission. C&#39;est aussi un moyen précieux d&#39;installations de criblage pour la résistance aux virus, car il utilise le même type de transmission qui seront appelés plantes dans le domaine de résister. L&#39;utilisation de moyens plus artificiels de transmission n&#39;ont pas toujours donné les meilleurs résultats dans les évaluations de matériel génétique pour virus-résistance.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Nom de l'élément&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Société&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;N° de catalogue&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Commentaires (facultatif)&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Écran anti-mouches blanches</td><td>Klayman Meteor Ltd. Petah Tikva 49130, Israël</td><td>---</td><td>Écran insecticide BioNet, maille 50, anti-virus</td></tr><tr><td>Écran anti-mouches blanches</td><td>Hummert International (www.hummert.com)</td><td>27-4050-1 - 27-4062-1</td><td>Écran insecticide BioNet, maille 50, anti-virus</td></tr><tr><td>Dispositifs de collecte de mouches blanches</td><td>BioQuip</td><td>1135A</td><td>Peuvent également être fabriqués à l’aide de pipettes, de tubes en plastique souple, d’adaptateurs plastiques pour vide et de gaze</td></tr><tr><td>Flacons de collecte</td><td>BioQuip</td><td>8909</td><td>Le choix des flacons dépend de l’aspirateur utilisé.</td></tr><tr><td>Cartes en plastique jaune</td><td>toute société</td><td>---</td><td>Toute carte en plastique jaune vif convient ; elles peuvent être achetées dans de nombreux endroits.</td></tr><tr><td>Cages à mouches blanches</td><td>---</td><td>---</td><td>Ces cages ne sont pas disponibles commercialement et doivent être construites. Des cages de 60 cm × 60 cm × 60 cm conviennent bien à nos besoins. Nous préférons celles constituées d’un grillage d’aluminium, d’organdi de nylon, de plastique vinyle, avec une structure réalisée à partir de cadres de fenêtre en aluminium. Les portes sont fixées à l’aide de charnières à piano et scellées avec un joint d’étanchéité ; le dessus des cages est en plastique vinyle. Les cages peuvent également être fabriquées en : 1) plexiglas collé aux bords, avec des ouvertures grillagées découpées sur les côtés pour assurer la ventilation ; 2) grands sacs en organdi de nylon, en organza ou en écran anti-mouches blanches de maille 50, avec des supports internes constitués de tubes et raccords en PVC découpés aux longueurs souhaitées et assemblés à l’intérieur des sacs ; 3) structures en bois recouvertes d’organdi de nylon, d’organza ou d’écran anti-mouches blanches de maille 50.</td></tr></tbody></table>

la transmission des virus de plante à l&#39;aide aleurodes

Transmitting Plant Viruses Using Whiteflies

Aleurodes, Hemiptera: Aleyrodidae, Bemisia tabaci, un complexe d&#39;espèces morphologiquement indistinquishable 5, sont des vecteurs de nombreux virus de plantes. Plusieurs genres de ces virus végétaux transmis par les aleurodes (Begomovirus, Carlavirus, Crinivirus, ipomovirus, Torradovirus) comprennent plusieurs centaines d&#39;espèces d&#39;agents pathogènes économiquement importantes de nourriture importante et plantes à fibres (revue par 9,10,16) et émergents. Ces virus ne se répliquent pas dans leur vecteur, mais néanmoins se déplacent facilement d&#39;une plante à l&#39;aleurode adulte par divers moyens (revue par 2,6,7,9,10,11,17). Pour la plupart de ces virus alimentation aleurode est nécessaire pour l&#39;acquisition et l&#39;inoculation, tandis que d&#39;autres ne sondage est nécessaire. Beaucoup de ces virus sont incapables ou ne peut pas être facilement transmis par d&#39;autres moyens. Par conséquent l&#39;entretien des cultures de virus, biologiques et la caractérisation moléculaire (identification de la gamme d&#39;hôtes et symptômes) 3,13, L&#39;écologie 2,12, exiger que les virus sont transmis à des hôtes expérimentaux utilisant la mouche blanche. En outre, le développement de nouvelles méthodes de gestion, tels que l&#39;évaluation des nouveaux produits chimiques ou des composés 14 15, de nouvelles approches culturelles 1,4,19 ou la sélection et le développement de cultivars résistants 7,8,18, nécessite l&#39;utilisation d&#39;aleurodes pour la transmission du virus. L&#39;utilisation de transmission aleurode des virus de plantes pour la sélection et le développement de cultivars résistants dans les programmes de sélection est particulièrement difficile 7. Sélection efficace et le dépistage de la résistance emploie un grand nombre de plantes et il ya un besoin de 100% des plantes à être inoculés afin de trouver les quelques génotypes qui possèdent des gènes de résistance. Ces études utilisent un très grand nombre d&#39;aleurodes virulifères, souvent plusieurs fois par an. Entretien aleurode décrit ici peut générer des centaines ou des milliersdes aleurodes adultes sur les plantes chaque semaine, toute l&#39;année, sans la contamination d&#39;autres virus de plantes. Plantes libres des deux aleurodes et les virus doivent être produites à introduire dans la colonie aleurodes chaque semaine. Whitefly cultures doivent être exempts d&#39;agents pathogènes aleurodes, les parasites et parasitoïdes qui peuvent réduire les populations d&#39;aleurodes et / ou réduire l&#39;efficacité de la transmission du virus. Colonies produites de la manière décrite peuvent être rapidement mis à l&#39;échelle pour augmenter ou diminuer le nombre de la population selon les besoins, et peuvent être ajustés pour tenir compte des préférences alimentaires de l&#39;aleurode basée sur la plante hôte du virus. Il existe deux types de colonies de mouches blanches qui peuvent être maintenues: un nonviruliferous et une colonie aleurode virulifères. La colonie nonviruliferous est composé d&#39;aleurodes élevés sur les plantes exemptes de virus et permet la disponibilité hebdomadaire des aleurodes qui peuvent être utilisés pour transmettre les virus de différentes cultures. La colonie aleurode virulifères,composé d&#39;aleurodes élevés sur les plantes infectées par le virus, permet une disponibilité hebdomadaire des aleurodes qui ont acquis le virus en omettant donc une étape dans le processus de transmission du virus.

Ces méthodes d&#39;établissement aleurode de la colonie et de maintenance, ainsi que la manipulation de transmettre des virus de plantes ont été utilisées avec succès dans un certain nombre d&#39;études 4,11,12,14 ainsi que beaucoup d&#39;autres non cités. En utilisant ces méthodes avec des virus transmis persistante, nous avons régulièrement obtenu les taux souhaités de transmission de 100% à la sélection pour la résistance, le dépistage insecticides pour leur capacité à interférer avec la transmission (et évaluation de composés inducteurs de résistance) 13,14,17,18 ( Figure 9). Les procédures décrites ici peuvent et ont été être adaptées à de nombreux endroits dans les établissements de recherche publics et privés. <table border="1"><tbody><tr><td> Type de transmission </td><td> Acquisition Période d&#39;accès (heure) </td><td> Inoculation Période d&#39;accès (heure) </td><td> Réf. </td></tr><tr><td> Nonpersistent </td><td> 1 </td&gt; <td> 2-24 </td><td> 10 </td></tr><tr><td> Semipersistent </td><td> 6-24 </td><td> 8-24 </td><td> 10, 16 </td></tr><tr><td> Persistent </td><td> 48-72 </td><td> 48-72 </td><td> 3, 6, 8, 9 </td></tr></tbody></table> Tableau 1. Fois estimés, qui peuvent être utilisés pour produire des taux élevés de transmission du virus à différents types de relations avec leurs vecteur Bemisia tabaci espèces complexes. Fois estimatifs sont basés sur les temps minimales publiées nécessaires à la transmission de 80-100% et modifié dans certains cas pour tenir compte des périodes de latence et les différences entre les populations d&#39;aleurodes, les virus et les plantes hôtes. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig1.jpg" /> Figure 1. Un exemple d&#39;une colonie aleurode virulifères. Cette chambre de croissance contient des cages de plantes infectées par un begomovirus et infested avec aleurodes virulifères. <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig2.jpg" /> Figure 2. Gauche: immatures stades de l&#39;aleurode, Bemisia tabaci MEAM clade sensu De Barro 6 environ 1 semaine post-émergence et la droite: un adulte aleurodes, un vecteur efficace de nombreux virus de plantes. <img alt="Figure 3" fo:content-width="5.5in" fo:src="/files/ftp_upload/4332/4332fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig3.jpg" /> Figure 3. Les types de dispositifs de collecte qui peuvent être utilisés pour collecter les aleurodes pour la transmission de virus de plante. <img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig4.jpg" /> Figure 4. À gauche: carte en plastique jaune servant à recueillir les adultes d&#39;aleurodes montrant aleurodes prêt pour la collecte<html> . Droite: Collecte aleurodes à partir d&#39;une carte en plastique jaune. Les mouches blanches sont visibles sur la carte sous forme de petites taches blanches / gris. <img alt="Figure 5" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig5.jpg" /> Figure 5. Les aleurodes recueillies par aspiration (20 dans un flacon) de la colonie soit prêt pour l&#39;acquisition ou l&#39;inoculation. <img alt="Figure 6" fo:content-width="5.5in" fo:src="/files/ftp_upload/4332/4332fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig6.jpg" /> Figure 6. En haut à gauche:. Cages de plantes unique utilisé soit pour l&#39;acquisition ou l&#39;inoculation haut à droite: Grandes cages faites de tuyaux en PVC et organza. Basse: Aluminium / écran et cages d&#39;organdi dans une serre contenant des plantes destinées à une colonie de mouches blanches. 32fig7.jpg &quot;/&gt; Figure 7. Les aleurodes sont transférées à une seule usine pour l&#39;inoculation (ou l&#39;acquisition). <img alt="Figure 8" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig8.jpg" /> Figure 8. Ajout d&#39;un insecticide systémique arrosage de mettre fin à la période d&#39;accès inoculation aleurodes. <img alt="Figure 9" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig9.jpg" /> Figure 9. plantes sur le terrain en cours d&#39;évaluation pour la résistance au jaune virus de l&#39;enroulement des feuilles de tomate. Toutes les plantes ont été inoculées dans 5 semaines vieux plants et ensuite transplantées dans le domaine de l&#39;évaluation. Les plantes au premier plan sont une ligne de germoplasme résistant, plantes en arrière-plan sont en ligne de matériel génétique susceptible.

L&#39;amélioration de notre compréhension et notre capacité à gérer la plupart des virus de plantes transmises par les insectes nécessite l&#39;utilisation du vecteur. Transmission par les insectes de virus de plantes est une interaction tritrophique, et à ce titre nécessite la manipulation d&#39;insectes, virus, et les plantes. Vecteurs doivent être élevés en grand nombre et manipulés de manière à assurer des taux élevés de transmission des plantes d&#39;essai. Les bases de l&#39;élevage et la manipulation de l&#39;aleurode,<em&gt; Bemisa tabaci</em&gt; (<em&gt; Hemiptera: Aleyrodidae</em&gt;), Un vecteur de virus de plantes appartenant à plusieurs genres émergeant du virus de la plante, ce qui représente un grand nombre de virus économiquement significatifs sont présentés.

La transmission des virus de plante à l&#39;aide aleurodes

Les aleurodes, Hemiptera : Aleyrodidae, Bemisia tabaci, un complexe d'espèces morphologiquement indiscernables5, sont des vecteurs de nombreux virus végétaux. Plusieurs...

L'objectif général de l'expérience suivante est de transmettre des virus végétaux à l'aide de mouches blanches. Cela est réalisé en établissant et en maintenant une colonie de mouches blanches fournissant chaque semaine des adultes récemment émergés, non contaminés par d'autres vecteurs ou agents pathogènes potentiels. Les colonies sont maintenues en ajoutant régulièrement des mouches blanches à des jeunes plantes exemptes d'insectes, à partir desquelles de nouveaux adultes sont produits.Après 17 à 20 jours, les adultes nouvellement émergés peuvent être transférés sur des plantes témoins afin d'acquérir ou de transmettre le virus. Des efficacités proches de 100 % sont généralement obtenues, et les taux de transmission sont habituellement faibles au départ, puis augmentent grâce à une optimisation systématique. L'aspect le plus délicat de l'utilisation des aleurodes pour inoculer des virus consiste à élever ces insectes de manière à exclure les pathogènes et insectes indésirables.Les agents pathogènes, en particulier les champignons provoquant la pourriture des racines et les brûlures foliaires, réduiront la qualité des plantes hôtes du virus. Les insectes indésirables, tels que les thrips, peuvent inhiber la reproduction des aleurodes tout en compromettant la qualité de la plante hôte du virus. Les procédures seront démontrées par Heather Capa Bianco, technicienne de mon laboratoire.Les colonies de mouche blanche doivent être maintenues dans une chambre de croissance propre et contrôlée. La régulation de l'humidité relative, de la température, de la période photopériodique et de l'intensité lumineuse est essentielle pour une colonie qui se développe de l'œuf à l'adulte en 18 jours ; utilisez les paramètres suivants. La température doit être fixée entre 26 et 30 degrés Celsius, et l'humidité relative devrait idéalement se situer entre 30 et 50 %. Si l'humidité relative dépasse 70 %, les insectes et les champignons pathogènes des plantes risquent de devenir un problème.La période photopériodique idéale est de 14 heures. L'intensité lumineuse doit être assez élevée, et des lampes fluorescentes VHO peuvent produire entre 800 et 1000 bougies-pied au niveau de la canopée végétale. Les doses d'engrais et l'arrosage doivent également être réduits afin de limiter les agents pathogènes fongiques, ainsi que l'accumulation de sels. Les cages pour aleurodes doivent permettre une bonne ventilation, un accès facile et un espace suffisant pour une population croissante d'aleurodes.De bons résultats ont été obtenus avec un organza organique associé à un tamisage en aluminium, ainsi qu'à un écran blanc. L'identification de l'espèce végétale constitue un paramètre important. Premièrement, elle doit présenter une croissance rapide, sans toutefois envahir excessivement la chambre. Deuxièmement, la plante doit être suffisamment robuste pour supporter une population élevée d'insectes sans s'effondrer.Pour ces raisons, les cultivars nains ou buissonnants constituent de bons choix végétaux. Troisièmement, la plante doit être capable, selon le type de colonie élevée, d'héberger ou de ne pas pouvoir héberger le virus utilisé. Étant donné que la colonie peut s'effondrer en raison des acariens, des THP, des mouches blanches sauvages ou d'autres insectes envahissants, les cultivars choisis doivent être cultivés dans un environnement protégé permettant d'exclure les autres insectes.Les premières mouches blanches d'une nouvelle colonie doivent être exemptes de virus végétaux, d'autres insectes et de pathogènes entomologiques. Si les mouches blanches sont collectées sur le terrain, élevez-les pendant au moins huit semaines sur des plantes qui ne sont pas des hôtes du virus pendant cette période, puis vérifiez l'absence de symptômes végétaux. Une fois des mouches blanches saines obtenues, introduisez entre 20 et 100 individus dans une cage de plantes par aspiration ou en les secouant délicatement à partir d'une autre plante source.Chaque semaine, une nouvelle cage doit être mise en place. Pendant les trois premières semaines, utilisez les aleurodes provenant des plantes non-ST pour établir la nouvelle cage. À partir de la quatrième semaine, utilisez les jeunes adultes aleurodes provenant de la cage âgée de trois semaines pour établir la cage suivante.Au cours de la première semaine en cage, les aleurodes pondent des œufs sur la face inférieure des feuilles des plantes. La deuxième semaine, les stades immatures d'aleurodes deviennent visibles et certains adultes sont encore vivants. La troisième semaine, de nombreux nouveaux adultes émergent, et l'on observe une augmentation très nette de la population d'aleurodes adultes.Ces aleurodes peuvent être utilisés pour des expériences de transmission. Durant la quatrième semaine, les adultes âgés d'une semaine doivent être transférés dans une nouvelle cage. L'ancienne cage doit être retirée et ses plantes éliminées. Précis.Le transfert délicat des mouches blanches s'effectue à l'aide d'un dispositif d'aspiration et de flacons de collecte, sans jamais aspirer directement. Les mouches blanches qui se nourrissent sur les plantes ont leurs stylets alimentaires insérés dans la plante, et ceux-ci se briseraient si on les arrachait. Cela rendrait la mouche blanche inutilisable. Pour collecter les mouches blanches, tenez-en une dans une main, et avec l'autre main, placez un capot plastique jaune à l'intérieur de la cage de la colonie.Tapotez doucement les plantes pour inciter les aleurodes adultes à s'envoler. Les aleurodes seront attirés par la carte jaune, où ils peuvent être collectés. À l'aide de l'aspirateur et d'une aspiration très douce, ajoutez au maximum 20 aleurodes dans chaque flacon de collecte.Ensuite, tapez légèrement sur le flacon pour désorienter les mouches et boucher le flacon avec du parafilm. Pour assurer une transmission virale réussie, essayez de transférer de 15 à 40 adultes jeunes provenant de plantes infectées par le virus vers des plantes saines, selon le virus et la plante hôte. D'autres protocoles, comme le criblage de résistance, nécessitent des populations initiales plus importantes.Dans ce cas, secouez les plantes infectées par le virus, infestées de mouches blanches, au-dessus des plantes qui doivent être inoculées. Une fois que les mouches blanches sont placées sur une plante infectée par un virus, laissez-les s'alimenter pendant 48 à 72 heures afin qu'elles acquièrent les virus transmis de façon persistante. Un temps plus long n'augmente généralement pas le taux de transmission pour les virus transmis de manière non persistante ou persistante circonspecte.Une période d’acquisition plus courte, allant d’une heure à un jour, suffit pour les expériences nécessitant un prélèvement sur des feuilles spécifiques. Des cages à pince peuvent être utilisées ; installez la cage de manière à ce que l’infrastructure de la feuille soit accessible, et n’utilisez pas plus de 10 femelles de mouches blanches par cage de 2,5 centimètres de diamètre, car le taux de transmission diminuerait en raison de l’affluence. Pour l’innoculation des plantes, choisissez la cage appropriée en fonction du nombre de plantes.Une plante, par exemple, nécessite uniquement une petite cage légèrement plus grande qu'elle-même ; pour plusieurs plantes, choisissez entre une petite cage en tube PVC, une cage sur structure métallique ou une cage plus grande à montant en aluminium. Plus l'espace autour de la canopée de la plante est réduit, mieux c'est. Une fois les mouches blanches ajoutées à la nouvelle plante, la durée nécessaire pour l'innoculation dépend du virus et de la plante hôte.Comme pour l'acquisition, la durée requise pour la transmission dépend du mode de transmission. La transmission non persistante nécessite un temps d'accès beaucoup plus court que la transmission semi-persistante ou persistante. Vérifiez que les aleurodes effectuent des piqûres ou s'alimentent pendant la période d'accès à l'inoculation.Ouvrez la cage et examinez la face inférieure de quelques feuilles sur chaque plante. Pour les périodes d'inoculation plus longues, perturbez périodiquement les plantes doucement afin d'encourager une redistribution des organismes sur les plantes.Cela augmentera le taux de transmission en contrant la tendance naturelle des mouches blanches à s'agglomérer, mettant ainsi fin à la période d'inoculation. Tuer les mouches blanches à l'aide de deux insecticides appliqués l'un après l'autre. Appliquer d'abord un insecticide de contact afin de supprimer rapidement les adultes, comme un savon insecticide.Deuxièmement, appliquez un insecticide systémique pour éliminer les aleurodes qui pourraient se développer au cours des semaines suivantes. Les composés arid ou pyrazine constituent des choix efficaces contre les adultes restants. En suivant ces procédures, il est possible d'obtenir régulièrement des taux de transmission du virus de 100 %. De tels taux élevés de transmission sont essentiels lors du criblage de plantes témoins pour leur résistance au virus, et souhaitables lors de l'évaluation de l'efficacité de composés chimiques quant à leur capacité à interférer avec la transmission du virus.Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment élever des aleurodes et les utiliser pour transmettre des virus végétaux. Ces procédures peuvent être utilisées à des fins de recherche ou pour le développement commercial de plantes résistantes aux virus, ou encore pour tester des composés afin d'évaluer leur capacité à interférer avec la transmission des virus.

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