Transplantation orthotopique aortique chez la souris pour l'étude des maladies vasculaires

Le but de cette procédure est de transplanter l’aorte abdominale d’une souris donneuse dans une souris receveuse allogénique. Ceci est accompli en obtenant d’abord l’aorte du donneur. Ensuite, le site de greffe est construit chez l’animal receveur.

L’aorte native de l’animal récepteur est ensuite disséquée et divisée. La dernière étape consiste à utiliser deux anastomoses vasculaires de bout en bout pour implanter l’aorte du donneur. En fin de compte, cette procédure peut être utilisée pour étudier le développement de maladies vasculaires post-transplantation dans des combinaisons de souches allogéniques.

L’avantage de cette méthode par rapport à la transplantation cardiaque hétérotopique, par exemple, est qu’il est plus facile de faire une analyse morphométrique car les vaisseaux sont de taille uniforme. De plus, le vaisseau n’est pas entouré de tissu parenchymateux, qui peut être entouré d’infiltrats cellulaires et d’autres choses qui peuvent compliquer l’analyse Les données générées. L’utilisation de cette technique peut être particulièrement utile pour illustrer les mécanismes impliqués dans la maladie vasculaire post-transplantation, qui signifie un problème insoluble dans la transplantation clinique humaine.

Pour minimiser les effets du stress et maximiser leurs réserves d’énergie, maintenez les animaux dans le vivarium pendant au moins 72 heures avant la chirurgie. Le jour de l’opération, placez une planche d’opération en métal sur un coussin chauffant réglé à 35 à 38 degrés Celsius. Ensuite, après anesthésie, retirez les poils sur l’abdomen ventral de l’animal.

Utilisez du ruban de laboratoire pour monter l’animal en position d’aigle étalé sur la table d’opération, puis désinfectez toute la zone rasée des animaux trois fois avec un désinfectant suivi d’éthanol à l’aide de ciseaux stériles. Ensuite, faites une incision à travers la paroi corporelle pour exposer les viscères abdominaux. Ensuite, utilisez un coton-tige stérile pour pousser les viscères sur le côté sur un morceau de gaze stérile imbibé d’une solution saline chaude, exposant les gros vaisseaux de l’abdomen.

Maintenant, émoussez très soigneusement, disséquez l’aorte abdominale loin des tissus environnants, y compris la veine caverneuse inférieure, puis soulevez et cautérisez soigneusement l’artère lombaire. La section de l’aorte pour la dissection doit se trouver sous les vaisseaux rénaux et au-dessus de la bifurcation de l’aorte dans les artères fémorales. Après avoir identifié la zone, la suture du pneu se trouve juste en dessous des artères rénales et une autre juste au-dessus de la bifurcation.

Ensuite, utilisez des ciseaux pour diviser l’aorte, puis tenez très soigneusement une extrémité du récipient et versez une solution saline héparinée pour qu’elle traverse le récipient par gravité. Ensuite, manipulez le moins possible les extrémités du récipient. Retirez le greffon et placez-le immédiatement dans un récipient de solution saline glacée.

Après avoir administré l’anesthésie et l’analgésie à l’animal receveur, rasez l’abdomen ventral comme nous venons de le voir. Appliquez une pommade ophtalmique à la gentamicine sur les yeux pour éviter qu’ils ne se dessèchent, puis désinfectez l’abdomen comme nous venons de le démontrer pour assurer une désinfection adéquate. Faites maintenant une incision médiane à travers la peau et la paroi corporelle par étapes.

Insérez ensuite un écarteur pour maintenir l’incision abdominale ouverte, en pointant l’ensemble de vis vers l’extrémité arrière de l’animal pour garder la majeure partie de la pince à l’écart. Ensuite, placez une gaze stérile imbibée de solution saline sur les intestins. Ensuite, maintenez doucement la gaze en place avec un doigt à l’intérieur.

Insérez un coton-tige stérile sous les intestins et réfléchissez-les doucement de manière à ce que les intestins reposent sur la gaze. Placez un autre morceau de gaze stérile sur les intestins et mouillez-le avec une solution saline. Après avoir délicatement retiré tout tissu adipeux recouvrant leur ATA et la veine caverneuse inférieure, utilisez une pince pour disséquer soigneusement l’aorte infrarénale de la veine caverneuse inférieure.

Maintenant, dégagez une zone suffisamment grande pour laisser de la place pour deux pinces, et avec suffisamment de vaisseaux pour qu’une fois divisés, il y ait suffisamment de vaisseaux sur lesquels le greffon puisse être suturé. Notez que la suture noire peut être utilisée pour sentir votre poids le long du vaisseau. Lors de la dissection, recherchez les branches des vaisseaux, en cautérisant les branches avec un cautériseur à basse température si nécessaire.

Ensuite, insérez une pince vasculaire juste en dessous de l’artère rénale et une autre pince vasculaire juste au-dessus de la bifurcation. Coupez ensuite l’aorte. Dans ce cas, la coupe est faite plus près de la bifurcation parce qu’un vaisseau de branche a été cautérisé près du milieu des deux pinces, ce qui en fait un site poreux pour l’anastomose, les extrémités de l’aorte se rétractent généralement, laissant un espace d’environ cinq millimètres.

Vérifiez l’hémostase. Si les pinces fonctionnent correctement, seule une petite quantité de sang doit s’échapper après la coupe. Ensuite, rincez les extrémités coupées de l’aorte avec une solution saline héparinisée, puis écouvillonnez la solution supplémentaire.

Maintenant, clouez le greffon en place à l’aide de trois sutures discontinues à chaque extrémité. Suturez ensuite un côté de l’anastomose à chaque extrémité et remplissez le reste avec sept à huit sutures discontinues. Si une suture courante est préférée, veillez à ce que les parois des vaisseaux restent détendues et à ce qu’une sténose à l’anastomose ne soit pas provoquée.

Retirez maintenant avec précaution la pince à l’extrémité crânienne de l’aorte et recherchez des fuites au niveau des lignes de suture. Ensuite, appuyez doucement sur l’aorte au-dessus du site d’anastomose avec un applicateur en coton mouillé et retirez la deuxième pince. Appuyez légèrement et relâchez l’aorte plusieurs fois pour vérifier que le vaisseau est perméable. Le greffon sera perfusé immédiatement et un pouls devrait être visible.

Maintenant, retirez la gaze qui recouvre les intestins et remettez-les en place, en maintenant leur orientation anatomique normale et en évitant de les tordre. Utilisez une suture Vicryl à cinq zéros pour fermer la couche musculaire, puis fermez la peau avec une suture à cinq zéro ou six zéro proline. Traitez la souris par voie sous-cutanée avec du carprofène pour augmenter l’analgésie avant de mettre fin à l’anesthésie, puis donnez à la souris 0,5 à 0,8 millilitres de solution saline par la même racine.

Enfin, placez la souris dans une cage chauffée pour la récupérer et surveillez attentivement l’animal. 12 et 24 heures après l’opération, administrer la buprénorphine et le carprofène par voie sous-cutanée à l’animal respectivement. Cette première figure montre une greffe aortique.

Notez les lignes de suture indiquées par les flèches blanches ici. Une expérience typique dans laquelle la survie du receveur a été suivie pendant une période de 56 jours est décrite. Le groupe témoin était composé de souris sauvages de type C 57 BL six par receveuses de FVB transplantées avec l’aorte C de l’intestin.

Le groupe expérimental était composé de C 57 BL six par des receveurs de FVB, déficients en expression de l’hème oxygénase un. Cette inactivation entraîne une thrombose des greffons dans les 24 heures. Notamment, cela a entraîné la mort de tous les récipiendaires.

Cette dernière figure montre les mesures échographiques de la veine inférieure, de la spéléologie et de l’aorte abdominale chez un animal normal et chez un greffé. Notez que le greffon est perméable et d’apparence similaire à l’aorte non transplantée. Comme vous l’avez vu, les tissus sont très délicats et petits, vous devez donc garder à l’esprit que cette procédure est définitivement une compétence acquise et qu’il faudra donc un peu de pratique avant que la procédure puisse être effectuée avec succès, régulièrement, une fois maîtrisée.

Cette technique peut être réalisée en moins d’une heure si elle est exécutée correctement.