Name: Occlusion bilatérale de lartère carotide commune comme un stimulus suffisant pour provoquer le préconditionnement précoce Tolérance ischémique à une ischémie cérébrale focale (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-09T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: Découvrez comment l'occlusion bilatérale des artères carotides communes induit une tolérance ischémique précoce chez la souris. Cette méthode utilise une sonde Doppler laser pour surveiller le flux sanguin cérébral et évaluer les lésions ischémiques focales.

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Toutes les procédures décrites dans cet article ont été réalisées en conformité avec les directives et règlements de l&#39;Landesamt für Gesundheit und Soziales, Berlin, Allemagne. Procédures pré-opératoires 1. Préparation des monofilaments <ol><li> Pour la préparation de filaments intraluminale, nylon 8-0 fils de suture de monofilament ont été utilisés et ont été coupées à une longueur de 13 mm chacun. </li><li> Pour le revêtement des monofilaments, Xantopren M muqueuse (Heraeus GmbH, Hanau, Allemagne) a été utilisé activée en ajoutant une goutte de solution d&#39;activateur (Activator, universel et, Heraeus GmbH, Hanau, Allemagne). </li><li> Le monofilament est lentement tiré à travers le silicone jusqu&#39;à ce qu&#39;elle soit complètement recouverte avec elle. Ce faisant, le monofilament serait uniformément recouvert de silicone. Éviter d&#39;attendre trop longtemps parce que le matériau de revêtement actif deviendra ferme et sèche rapidement. </li><li> Avant la silicone commence à se solidifier, Il est recommandé de dépouiller silicone excessive du filament en tirant sur une feuille de papier. Ce faisant, la couche de silicone peut être aminci à une épaisseur d&#39;environ 200 um. </li><li> La base du monofilament silicone recouvert était coincé dans la pâte à modeler afin de le laisser sécher pendant la nuit. </li></ol> Commentaire: Idéalement, seulement stérilisés ou au moins monofilaments désinfectés doivent être utilisés pour assurer la stérilité du site opératoire. Dans la pratique, la stérilisation ou la désinfection des monofilaments fabriqués à la main est très difficile parce que la qualité des monofilaments peut aggraver 9. Par conséquent, il pourrait être préférable d&#39;utiliser des monofilaments stériles disponibles dans le commerce à la place. 2. Préparation des instruments chirurgicaux et des animaux <ol><li> Tous les instruments chirurgicaux ont été conservées dans 70% d&#39;alcool éthylique. De plus, avant chaque nouvelle intervention chirurgicale, tous les instruments chirurgicaux ont été soigneusement nettoyés unend désinfecté à l&#39;aide de 70% d&#39;alcool éthylique. </li><li> La zone chirurgicale a été complètement désinfecté en utilisant 70% d&#39;alcool éthylique dans tous les animaux avant résection. Les sites de désinfectées ont été autorisés à sécher complètement avant d&#39;effectuer les incisions. Clipping supplémentaire de la fourrure n&#39;a pas été effectuée car cela pourrait provoquer microabrasions et l&#39;inflammation de la peau suite 9. </li></ol> Les interventions chirurgicales 3. Le positionnement de la sonde LDF et de surveillance de FDL <ol><li> Pour l&#39;induction de l&#39;anesthésie, les souris ont été exposées à un mélange gazeux constitué de 30% d&#39;oxygène, 70% de N 2 O et 2,5% d&#39;isoflurane aide d&#39;un vaporisateur. Pour l&#39;entretien de l&#39;anesthésie, de la concentration d&#39;isoflurane a été réduit à 1,5%. Les souris ont été respirent spontanément via le masque respiratoire durant toute la procédure chirurgicale. </li><li> Une sonde de température rectale a été inséré et les souris ont été fixés au châssis stéréotaxique exposer la tête pariétal. Pendant l&#39;opération, les souris ont été posés sur unethermostatée coussin chauffant, en assurant une température de base constante de 37,0 ± 0,5 ° C. Une incision médiane sagittale (~ 1 cm de longueur) a été réalisée pour exposer le crâne pariétal. </li><li> Le côté gauche du crâne a été soigneusement disséquée et une sonde à fibre optique a été fixé directement sur le crâne 2 mm caudale et 5 mm latéral du bregma l&#39;aide de colle instantanée. Ensuite, les bords de la plaie ont été soigneusement adaptés pour éviter l&#39;hypothermie cérébrale ainsi que des infections. </li><li> La souris a tourné autour d&#39;exposer la face ventrale du cou. La sonde à fibre optique a été relié au dispositif de LDF (PeriFLUX System 5000, Perimed, Järfälla, Suède) via adaptateur de raccordement de la sonde (Master Probe 418-1, Perimed; Järfälla, Suède). </li></ol> Commentaire: En tournant la souris, la sonde à fibre optique doit être plié avec soin afin d&#39;éviter qu&#39;il se détache du crâne. <ol start="5"><li> Le dispositif LDF a été connecté à un ordinateur portable comordinateur. L&#39;enregistrement en continu des valeurs de FDL a été lancée à l&#39;aide Perisoft pour Windows (Version 2.50, Järfälla, Suède). Figure 1 montre le cours moyen CBF obtenu à partir de dix enregistrements FDL lors BCCAO et la reperfusion. </li></ol> 4. Occlusion bilatérale de l&#39;artère carotide commune <ol><li> L&#39;anesthésie a été maintenue telle que décrite au point 3.1. Souris a été placée sur son dos. La queue et les pattes de l&#39;animal ont été fixés pour le coussin chauffant avec du ruban adhésif. Une incision médiane ventrale sagittal (~ 1cm de longueur) a été réalisée. </li><li> Les deux glandes salivaire ont été soigneusement séparés et se sont mobilisés pour visualiser le sous-jacent de CCA. </li><li> Les deux CCA de ont été soigneusement séparés des nerfs vagues respectives et les veines d&#39;accompagnement sans nuire à ces structures. Manipulations des nerfs vagues pourraient conduire à un dysfonctionnement transitoire ou permanente du système nerveux parasympathique, qui a le potentiel pour l&#39;apparition d&#39;arr cardiaque significativehythmia ou même un arrêt cardiaque irréversible. Par conséquent, il est essentiel d&#39;éviter toute manipulation des nerfs vagues. Un lâche soie 5-0 boucle de suture a été faite autour de chaque CCA. </li><li> Un petit tube de silicium (diamètre 2 mm) a été inséré entre le CCA et des points de suture en soie de chaque côté. Ce tube a été utilisé comme une attelle de la CCA est en ordre pour éviter d&#39;endommager les parois artérielles lorsque les sutures ont été durcies (figure 4). </li><li> Tous deux ont été CCA de occlus pendant une minute en serrant les sutures de soie. Seules les souris, dans lequel le signal LDF a été réduit à &lt;10% du signal de référence ont été inclus dans l&#39;étude. Après la réouverture des deux CCA&#39;S, une période de cinq minutes de reperfusion a été lancé. Par LDF une reperfusion complète a été assurée. Les animaux atteints de reperfusion incomplète (ie récupération &lt;90% de la CBF rapport aux valeurs initiales CBF) ont été exclus. La séquence d&#39;une minute de BCCAO et à cinq minutes de reperfusion a été répétée deux fois pour un total de BCCAO DURATIsur de 3 min. Figure 1 montre l&#39;évolution moyenne CBF obtenu à partir de dix enregistrements FDL lors BCCAO et la reperfusion. Durant la procédure, il est recommandé de garder le cou enroulé humide en utilisant une solution saline normale. </li><li> Après la dernière reperfusion, tous les tubes et les sutures ainsi que la sonde à fibre optique fixé au crâne ont été enlevés, les plaies ont été suturées et de la lidocaïne pommade (Xylocain 2%; AstraZeneca GmbH, Wedel, Allemagne) a été appliquée à plusieurs reprises pour les blessures que nécessaire pour gestion analgésique. </li><li> Les souris ont été transférés à un pré-chauffé (30 ° C) boîte de récupération (MediHEAT. PecoServives Ltd Brough, Cumbria, Royaume-Uni) jusqu&#39;à ce qu&#39;ils aient repris conscience complète. Par la suite, les souris ont été retournés à leurs cages. </li></ol> 5. Moyen-occlusion de l&#39;artère cérébrale <ol><li> Les souris ont été re-anesthésié, une sonde de température rectale a été inséré et les souris ont été placé sur un coussin chauffant pour exposer la face ventrale du cou. Ensuite, ils were fixé comme décrit dans la section BCCAO. </li><li> Une ligature permanente à l&#39;aide d&#39;une longue 7-0 suture de soie a été faite autour de la CCA proximale gauche et le fil a été tiré doucement caudale à l&#39;aide d&#39;une pince moustique (Figure 4). </li><li> Un autre ligature permanente a été faite autour de l&#39;artère carotide externe gauche (CEA) et le fil a été tiré vers le côté droit de l&#39;animal (Figure 4). </li><li> Le tissu conjonctif qui entoure la CIA gauche a été soigneusement mobilisé et le nerf hypoglosse a été délicatement soulevé d&#39;obtenir un bon aperçu du cours distale de l&#39;ICA. Les virages ICA gauche vers la gauche tandis que l&#39;artère ptérygopalatine (PPA) suit le cours de l&#39;ICA proximale vers la droite (figure 4). </li></ol> Commentaire: Il ya une autre artère être identifiés qui tourne à droite en direction caudale. C&#39;est l&#39;artère occipitale, qui provient variable soit à partir de la bifurcation CCA ou de la proximal partie de l&#39;ECA (Figure 4). <ol start="5"><li> Une boucle de suture lâche a été faite autour de l&#39;ICA proximale à l&#39;aide d&#39;un fil de soie 5-0. </li><li> En utilisant une petite pince microvasculaire, l&#39;ICA a été temporairement occulté distale à l&#39;5-0 lâche boucle de suture (figure 4). </li><li> Une petite incision est faite dans la partie distale du CCA, juste avant la bifurcation CCA aide de ciseaux microvasculaires (figure 4). </li><li> A présélectionné monofilament silicone recouvert a été introduit dans le CCA par la petite incision et poussée dans l&#39;ICA jusqu&#39;à ce qu&#39;elle s&#39;arrête à la pince microvasculaire (Figure 4). </li><li> Le microCLAMP a été soigneusement retiré de la CIA, tandis que le monofilament a été avancé profondément dans la CIA jusqu&#39;à ce qu&#39;elle s&#39;arrête (Figure 4). Commentaire: En ce moment, retourner la pince dans la main gauche afin que vous ne le tenez pas comme un stylo. Cela permet de saisir le fil avec les pinces plus facilement.La vasculaire pince-applicateur doit être tenu dans la main droite. Il pourrait être nécessaire de serrer de près le lâche 5-0 suture autour de l&#39;ICA afin de prévenir les saignements du côté de l&#39;incision. </li><li> L&#39;emplacement exact de la pointe de monofilament a été identifiée pour vérifier si elle a été avancée dans l&#39;ICA et non dans le PPA. Si la pointe de monofilament a été introduit dans le PPA proximal, le filament a été légèrement tiré vers l&#39;arrière, juste avant la bifurcation ICA / PPA. Il a tenté de faire avancer le monofilament dans l&#39;ICA à nouveau, tout en tirant doucement la CIA proximale un peu sur le côté droit. Ce faisant, le cours naturel de l&#39;ACI distale a été simulée qui rend plus facile d&#39;accéder à l&#39;ICA. </li><li> Après le monofilament a été avancé dans l&#39;ICA presque complètement, le lâche 5-0 boucle de suture autour de l&#39;ICA proximale a été renforcée afin de maintenir le filament en place. Ensuite, tous les fils de soie ont été raccourcies et la blessure de la peau a été suturée. </li><li> La perte de liquide pendant l&#39;intervention chirurgicale a été REPLENished par injection de 1,0 ml de solution saline normale ip Ensuite, la souris a été transféré à la boîte de récupération préchauffé jusqu&#39;à ce qu&#39;il a repris conscience complète. </li><li> Pour reperfusion, les souris ont été re-anesthésié et le monofilament a été enlevé après avoir desserré soigneusement la suture de soie 5-0 autour de l&#39;ICA proximal. Ensuite, le 5-0 suture a été resserré à nouveau soigneusement afin de prévenir les saignements. </li><li> Après confirmation de l&#39;hémostase complète, la blessure au cou a été suturée. </li><li> La lidocaïne pommade a été appliquée à plusieurs reprises localement sur la peau au besoin pour soulager la douleur et de la souris a été transféré à la pré-chauffé (30 ° C) boîte de récupération jusqu&#39;à ce qu&#39;il a repris conscience complète. </li><li> Dans un premier indice d&#39;une procédure MCAO succès, une approche indirecte gauche de l&#39;animal a été observé. La sévérité du déficit fonctionnel a été quantifiée en utilisant le score Bederson modifié pour les souris 10. Selon cette note Bederson modifié, les scores neurologiques nousre classés comme suit: 0 (fonction motrice normale), 1 (flexion du tronc et des membres antérieurs controlatéral lorsque la souris a été levée par la queue), 2 (encerclant le côté opposé lorsque la souris a été organisé par la queue sur une surface plane, mais normale posture au repos), 3 (s&#39;appuyant sur le côté contralatéral au repos), et 4 (pas l&#39;activité motrice spontanée ou mort). </li></ol> 6. BCCAO Sham chirurgie Pour les procédures fictives BCCAO, les souris ont été anesthésiées pour la durée d&#39;une véritable procédure de PC BCCAO, les glandes salivation ont été mobilisés et la CCA ont été exposés de. Il est crucial que les manipulations directes aux artères carotides ou des nerfs vagues sont évités pendant simulacre de procédure. Manipulations de la CCA peuvent endommager sa couche endothéliale, ce qui peut entraîner une libération de composés vasoactifs de l&#39;endothélium ou induire une thrombose locale dans la lumière artérielle. En conséquence, les événements thromboemboliques peuvent survenir après une intervention chirurgicale fictive. Ce serait un facteur de confusion important de the procédure. D&#39;autre part, les manipulations des nerfs vagues pourraient conduire à un dysfonctionnement transitoire ou permanente du système nerveux parasympathique, qui a le potentiel pour l&#39;apparition d&#39;une arythmie cardiaque significative ou un arrêt cardiaque voire irréversible. Par conséquent, il est essentiel d&#39;éviter toute manipulation des nerfs vagues pendant BCCAO. Procédures post-chirurgicales 7. Infarctus mesures de volume Pour l&#39;évaluation de la taille du myocarde, les souris ont survécu pendant 72 heures après MCAO. Ensuite, les animaux ont été profondément anesthésié, cerveaux ont été prélevés, congelés dans snap-méthylbutan, sectionnés et colorés avec de l&#39;hématoxyline (en utilisant le protocole Papanicolau) pour les mesures de volume de l&#39;infarctus. Coupes de cerveau ont été prélevés à des intervalles de 600 um et les volumes d&#39;infarctus ont été déterminés en utilisant un analyseur d&#39;image (IAM noyau 7.0 Rev.2.0, GE Healthcare Niagara Inc) et corrigée pour un oedème selon la méthode de Lin et al. 7,11 </sup&gt;. 8. Critères d&#39;inclusion Nous avons inclus les seuls animaux qui présentaient une réduction LDF-CBF mesurée par plus de 90% au cours de chacun des trois épisodes BCCAO. Idéalement, la surveillance LDF devrait être effectuée dans les deux hémisphères cérébraux au cours BCCAO. Pour praticabilité, nous avons effectué la surveillance de FDL seulement dans les hémisphères gauche, qui seront soumis à MCAO plus tard. Cette approche a été décrite avant 6,12. Reperfusion après chaque épisode BCCAO devait être complète (à savoir le retour aux valeurs de base). Pour des raisons de réduction du temps de durée des souris ont été maintenus sous anesthésie, nous n&#39;avons pas surveillons CBF pendant la chirurgie MCAO. Dans une étude pilote avec un groupe distinct des animaux cependant, nous avons suivi CBF par FDL en chirurgie MCAO. Dans ce groupe de souris, nous avons constamment mesuré une réduction de la CBF 90% par rapport à la valeur initiale avant la DPA occlusion. De plus, après le retrait de monofilaments CBF récupéré à&gt; 90% de la respectivevaleurs de base après CCA occlusion. Ces critères de FDL sont établis dans la littérature et le résultat des volumes d&#39;infarctus cohérents 7. Nous n&#39;avons inclus que les animaux qui avaient un score Bederson d&#39;au moins de 1 après la récupération de l&#39;anesthésie après MCAO. En outre, seuls les animaux qui ont survécu pendant 72 heures après MCAO et qui ne montraient aucun signe d&#39;hémorragie intracrânienne ont été inclus dans l&#39;étude.

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Nous n&#39;avons rien à révéler.

Dans notre étude, nous avons montré que trois séquences de BCCAO, chacune durant une minute et suivie d&#39;une reperfusion pendant cinq minutes, sont un PC stimulus ischémique suffisante pour induire tôt IT. En outre, nous avons démontré que le protocole de préconditionnement utilisée est une procédure invasive et sûre mineur sans morbidité postopératoire remarquable, aucun signe d&#39;apoptose dans le cerveau et aucune mortalité. Plusieurs protocoles de préconditionnement ont été décrits p...

L&#39;AVC ischémique est une maladie avec un taux de mortalité élevé et un énorme fardeau socio-économique 1. Malgré les efforts scientifiques expérimentales et cliniques intensives tout au long des dernières décennies, les options de traitement pour les patients victimes d&#39;AVC ischémiques aigus restent très limitées 2. Contrairement à cela, l&#39;augmentation du pourcentage de personnes âgées dans les pays développés augmentera considérablement l&#39;incidence et de prévalence des patients avec AVC ischémique dans les prochaines décennies 3. Par conséquent, il ya un besoin urgent de nouvelles stratégies de traitement chez les patients ayant subi un AVC ischémique. Une approche consiste à acquérir une meilleure compréhension des mécanismes d&#39;adaptation endogène du cerveau pour faire face à un stimulus nuisible. Cette neuroprotection dérivé du cerveau est également connu comme le préconditionnement ischémique (PC) ou la tolérance ischémique (IT) et décrit un phénomène dans lequel un stimulus nociceptif non dommageable au niveau du cerveau, induit une résistance transitoirecontre une suite dommageable ischémique insulte 4. Il se produit dans deux fenêtres de temps différents: au début, ce qui se produit en quelques minutes à quelques heures après PC et retardés IT, qui a besoin d&#39;un temps de latence de quelques heures à se produire 4. Jusqu&#39;à présent, la recherche sur l&#39;informatique dans le cerveau a mis l&#39;accent sur le retarder. On sait beaucoup moins sur les mécanismes de début IT. L&#39;objectif de cette étude est d&#39;établir bilatérale carotide commune occlusion de l&#39;artère (BCCAO) qui est un stimulus mis en place pour l&#39;inciter retardé, comme un PC stimulus suffisant pour induire tôt IT à transitoire ischémie cérébrale focale (induite par occlusion de l&#39;artère cérébrale moyenne, MCAO) dans des souris C57BL6 / J. Au cours des deux interventions chirurgicales (BCCAO et MCAO), suivi du flux sanguin cérébral (CBF) par laser Doppler (LDF) a été réalisée. BCCAO a été réalisée chez la souris anesthésiés et respirant spontanément. Les deux artères carotides communes (CCA) ont été exposéset occlusion pendant 60 sec puis 5 min de reperfusion. Cette séquence / reperfusion BCCAO a été répétée deux fois. Après la chirurgie, les souris sont rétablis rapidement et n&#39;ont montré aucun signe d&#39;altération fonctionnelle. Afin d&#39;exclure, que le protocole BCCAO décrit ci-dessus n&#39;a pas abouti à la mort cellulaire retardée dans le cerveau, nous avons réalisé une dUTP-biotine Nick étiquetage fin TdT médiée (TUNEL) coloration 72 heures après BCCAO (ou une intervention chirurgicale fictive) dans un groupe séparé. MCAO est un modèle largement établi pour l&#39;induction d&#39;une ischémie cérébrale focale chez les rongeurs 5-7. Les interventions chirurgicales ont été réalisées en utilisant des procédures normalisées d&#39;exploitation (SOP) 8. Après avoir exposé gauche CCA, un monofilament silicium recouverte a été introduit dans le CCA distale, avancé par l&#39;artère carotide interne (ACI) dans le polygone de Willis jusqu&#39;à l&#39;artère cérébrale antérieure (ACA) et de ce fait, l&#39;origine de l&#39;artère cérébrale moyenne ( MCA) a été occulté pendant une période de temps définie. Dans cette étude, nousutilisé 45 min de MCAO, ce qui se traduit généralement par une lésion ischémique dans le territoire MCA impliquant les zones du cerveau striatum et cortical. Dans notre étude, nous avons analysé le profil temporel de début IT utilisant BCCAO que le stimulus de PC. Nos données indiquent que le délai optimal entre BCCAO et MCAO pour induire tôt, il est de 30 min. Dans cette vidéo, nous allons donner une démonstration de deux interventions chirurgicales, à savoir BCCAO et MCAO.

<table><tbody><tr><td>Microscope chirurgical binoculaire</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000 C</td><td></td></tr><tr><td>Source lumineuse pour microscope</td><td>Zeiss</td><td>SteREO CL 1500 ECO</td><td></td></tr><tr><td>Plaque chauffante avec sonde rectale</td><td>FST</td><td>21061-10</td><td></td></tr><tr><td>Châssis stéréotaxique</td><td>David Kopf</td><td>Modèle 930</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux</td><td>FST</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td>Pinces de Dumont n°5</td><td>FST</td><td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Pinces de Dumont n°7</td><td>FST</td><td>11271-30</td><td></td></tr><tr><td>Pince microvasculaire</td><td>FST</td><td>00398-02</td><td></td></tr><tr><td>Applicateur de pince</td><td>FST</td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux à ressort</td><td>FST</td><td>15372-62</td><td></td></tr><tr><td>Porte-aiguille</td><td>FST</td><td>12010-14</td><td></td></tr><tr><td>Aiguilles</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td>BER 562-20</td><td></td></tr><tr><td>Filet de soie 5-0</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filet de soie 7-0</td><td>Feuerstein,Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filet de soie 8-0</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

occlusion bilatérale de l&#39;artère carotide commune comme un stimulus suffisant pour provoquer le préconditionnement précoce tolérance ischémique à une ischémie cérébrale focale

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

Il ya plus de preuves que le préconditionnement ischémique - un défi ischémique non dommageable pour le cerveau - confère une protection contre les transitoires à un accident ischémique dommageable ultérieure. Nous avons établi une occlusion de l&#39;artère carotide commune bilatérale comme un stimulus de préconditionnement pour induire début tolérance ischémique transitoire ischémie cérébrale focale dans souris C57BL6 / J. Dans cette vidéo, nous allons démontrer la méthodologie utilisée pour cette étude.

Notre protocole BCCAO a entraîné des réductions CBF immédiats et profonds (&gt; 90%) lorsque les deux CCA ont été de occlus (Figure 1). Réouverture de la CCA DEL pour compléter reperfusion comme surveillé par FDL (Figure 1). Après PC, les animaux n&#39;ont montré aucun signe d&#39;incapacité fonctionnelle. En outre, il n&#39;y avait pas de mortalité. Coloration TUNEL effectué 72 heures après BCCAO dans un groupe distinct des animaux ne présentaient aucun signe de mort cellulaire retardé...

Il ya plus de preuves que le préconditionnement ischémique (PC) - un défi ischémique non dommageable pour le cerveau - confère une protection contre les transitoires à un accident ischémique dommageable ultérieure. Nous avons établi bilatérale carotide commune occlusion de l&#39;artère (BCCAO) comme un stimulus de préconditionnement pour induire une tolérance ischémique précoce (IT) à transitoire ischémie cérébrale focale (induite par occlusion de l&#39;artère cérébrale moyenne, MCAO) dans souris C57BL6 / J.

Occlusion bilatérale de l&#39;artère carotide commune comme un stimulus suffisant pour provoquer le préconditionnement précoce Tolérance ischémique à une ischémie cérébrale focale

De plus en plus de preuves suggèrent que le préconditionnement ischémique — un stress ischémique non dommageable appliqué au cerveau — confère une protection transitoire à un...

L'objectif général de l'expérience suivante est de montrer que l'occlusion bilatérale des artères carotides communes induit un état transitoire de tolérance ischémique face à une ischémie cérébrale dans une fenêtre temporelle précoce. Ceci est réalisé en positionnant une sonde laser Doppler à fibre optique au-dessus du cortex afin de surveiller en continu le débit sanguin cérébral. Dans un second temps, une occlusion bilatérale des artères carotides communes est réalisée, ce qui induit une tolérance ischémique précoce.Une occlusion ultérieure de l'artère cérébrale moyenne est réalisée afin d'induire une ischémie cérébrale focale. Les résultats obtenus montrent des différences dans la taille des lésions ischémiques entre les animaux préconditionnés et ceux qui ne l'ont pas été, selon les mesures du volume d'infarctus histologique. Les méthodes décrites seront utilisées pour répondre à la question suivante : la tolérance ischémique, qui constitue un stimulus établi dans la fenêtre temporelle différée, peut-elle également induire une tolérance ischémique dans la fenêtre temporelle précoce ? Après l'induction de l'anesthésie à l'aide de 2,5 % d'ISO (fluorane), fixez l'animal dans le cadre stéréotaxique, puis insérez une sonde rectale afin de surveiller sa température. Placez la souris sur un tapis chauffant contrôlé par thermostat afin de maintenir une température centrale constante de 37 ± 0,5 °C durant la chirurgie.Ensuite, nettoyez et désinfectez le site chirurgical. Pratiquez une incision médiane sagittale d'environ un centimètre afin d'exposer le crâne pariétal au microscope. Retirez soigneusement le tissu conjonctif à l’aide d’une paire de forceps.Fixez ensuite une sonde en fibre optique directement sur le crâne, à deux millimètres caudal et à cinq millimètres latéral par rapport au BRE MA, à l’aide de colle instantanée. Ensuite, retournez la souris afin d’exposer la face ventrale du cou. Puis, reliez la sonde en fibre optique au dispositif de LDF à l’aide de l’adaptateur de la sonde.Le logiciel Peri soft est utilisé pour enregistrer la valeur de LDF. Dans cette procédure, réalisez une incision sagittale ventrale médiane d'environ un centimètre. Séparez les glandes salivaires droite et gauche l'une de l'autre.Dissez soigneusement les nerfs vagues et les veines environnantes afin d'exposer les artères carotides sous-jacentes. Ensuite, faites une boucle lâche de suture en soie 5/0 autour de chaque ACC. Puis, insérez un petit tube en silicone de deux millimètres de diamètre entre les ACC et les sutures en soie de chaque côté de l'artère carotide commune.Ce tube est utilisé comme attelle pour les ACI afin d'éviter d'endommager les parois artérielles lorsque les fils de suture sont serrés. Ensuite, occlure les deux ACI pendant une minute en resserrant les sutures en soie. Inclure uniquement la souris présentant une réduction du signal DFL inférieure à 10 % du signal de base dans l'étude.Après la réouverture des ACI, initier une période de reperfusion de cinq minutes. Répéter la séquence d'une minute B-C-C-A-O et de cinq minutes de reperfusion jusqu'à un total de trois minutes de B-C-C-A-O. Entre-temps, après la dernière reperfusion, utiliser du sérum physiologique pour maintenir la plaie du cou humide, puis retirer tous les tubulures et fils de suture.Fermer la plaie avec un point de suture. Ensuite, appliquer la pommade à la lidocaïne sur le site chirurgical pour assurer l'analgésie. Puis, retourner la souris.Retirez la sonde en fibre optique fixée au crâne, sutures la plaie et appliquez de la lidocaïne ment. Ensuite, transférez la souris dans une boîte de récupération préchauffée. Retournez-la dans la cage à animaux après qu'elle ait retrouvé complètement conscience sous le microscope.Réalisez une ligature permanente autour de l'artère carotide commune proximale à l'aide d'un fil de soie 7-0 long. Tirez doucement sur le fil à l'aide d'une pince hémostatique fine. Ensuite, réalisez une autre ligature permanente autour de l'artère carotide externe.Tirez le fil vers le côté droit de l'animal. Ensuite, retirez le tissu conjonctif entourant l'artère carotide interne. Soulevez délicatement et soigneusement le nerf hypoglosse afin d'obtenir une bonne vue d'ensemble du trajet distal de l'ACI, courbez l'ACI gauche vers la gauche tandis que l'artère tégo-palatine suit le trajet de l'ACI proximale vers la droite.Ensuite, faites une boucle de suture lâche autour de l'artère carotide interne proximale à l'aide d'un fil de soie 5/0. À l’aide d’un petit clamp microvasculaire, fermez temporairement l’artère carotide interne en aval de la boucle de suture lâche 5/0 afin d’empêcher tout saignement rétrograde provenant de l’artère carotide interne. Ensuite, pratiquez une petite incision dans la partie distale de l’artère carotide commune, juste avant la bifurcation de l’artère carotide commune, à l’aide de ciseaux microvasculaires.Introduire un monofilament pré-sélectionné recouvert de silicone dans l'artère carotide commune (CCA) par la petite incision jusqu'à ce qu'il bute contre le clamp microvasculaire. Ensuite, retirer soigneusement le clamp microvasculaire de l'artère carotide interne (ICA) en même temps que l'on avance davantage le monofilament dans l'ICA, jusqu'à ce qu'il s'arrête après que le monofilament ait presque entièrement été introduit dans l'ICA. Serrer la boucle lâche du fil 5/0 autour de l'ICA proximale afin de maintenir le filament en place, puis vérifier s'il est bien positionné dans la bonne artère.Le premier signe indiquant une procédure MCAO réussie est le mouvement circulaire de l’animal dans le sens horaire et son inclinaison d’un seul côté lorsqu’il est soulevé par la queue ; la gravité du déficit fonctionnel peut être quantifiée. À l’aide du score de Peterson modifié pour les souris en cas de reperfusion, réanesthésiez la souris et retirez le monofilament après avoir soigneusement desserré la suture en soie 5/0 autour de l’artère carotide primitive proximale, puis resserrez délicatement la suture 5/0 afin d’éviter tout saignement. Cette figure montre l’évolution des valeurs moyennes de CVF mesurées par DFL pendant la reperfusion B-C-C-A-O.Voici le profil temporel des volumes d'infarctus à différents intervalles de temps entre l'occlusion de l'artère cérébrale moyenne (MCAO) et l'occlusion des artères carotides bilatérales et de l'artère aortique (B-C-C-A-O). Une réduction significative des volumes d'infarctus a été observée par rapport au groupe témoin lorsque la B-C-C-A-O était réalisée 30 minutes avant la MCAO. En outre, les volumes d'infarctus ont été réduits lorsque la MCAO était réalisée deux heures et 24 heures après la B-C-C-A-O.Un délai de 24 heures entre le B-C-C-A-O et le MCAO constitue la fenêtre temporelle optimale pour la tolérance ischémique retardée. On peut donc conclure que la fenêtre temporelle optimale pour la tolérance ischémique précoce utilisant le B-C-C-A-O comme stimulus de conditionnement précoce est de 30 minutes avant l'induction d'une ischémie cérébrale focale transitoire. De manière générale, cette méthode convient pour fournir des données fiables dans les domaines de la tolérance ischémique.Lors de la réalisation de cette procédure, il est important d'utiliser des monofilaments ayant une coudure d'oreille normalisée en longueur, ou d'utiliser des filaments disponibles dans le commerce avec une taille prédéfinie.

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Médecine

Cette vidéo montre la procédure d’occlusion distale permanente de l’artère cérébrale moyenne, ou MCAO, avec la ligature de l’artère carotide commune, ou ligature CCA, chez des rats âgés pour modéliser l’AVC ischémique. Cela bloque le flux sanguin vers le cerveau, entraînant la mort neuronale et générant un modèle pour étudier les mécanismes de l’AVC et les traitements potentiels.

Induction d’une ischémie par occlusion de l’artère cérébrale moyenne et de l’artère carotide commune dans un modèle de rat

Source : Zheng, Y., et al. Modèles expérimentaux pour étudier la neuroprotection du post-conditionnement acide contre l’ischémie cérébrale. J. Vis. Exp. (2017)Cette vidéo démontre l’application du postconditionnement acide (APC) pour évaluer ses effets neuroprotecteurs contre les lésions ischémiques dans un modèle murin d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne (MCAO). Il décrit les étapes impliquées dans la reperfusion dans le modèle MCAO et l’application de l’APC pendant la reperfusion pour...

 Évaluation des effets neuroprotecteurs du postconditionnement acide dans un modèle murin d’ischémie cérébrale

Ce protocole décrit un préconditionnement hypoxique répétitif, ou de brèves expositions à une hypoxie systémique qui réduisent les volumes d’infarctus et la perturbation de la barrière hémato-encéphalique suite à une occlusion transitoire de l’artère cérébrale moyenne chez la souris. Il détaille également la double quantification du volume de l’infarctus et de la perturbation de la barrière hémato-encéphalique après un AVC afin d’évaluer l’efficacité de la protection neurovasculaire.

Quantification de la protection neurovasculaire Après répétitive hypoxique préconditionnement et transitoire Moyen Cerebral Artery Occlusion chez la souris

Nous présentons ici un protocole pour produire une occlusion permanente distale de l'artère cérébrale moyenne chez les rats femelles âgées avec occlusion simultanée des artères carotides de produire de grandes infarctus corticaux et des déficits subis. Nous montrons la confirmation de la taille de la lésion en utilisant l'IRM structurelle à 24 h et 8 semaines après un AVC.

Exécution distale permanente Moyen cérébrale avec l&#39;artère carotide commune occlusion chez les rats âgés pour étudier corticale ischémie avec une incapacité prolongée

Intraluminale filament une occlusion de l’artère cérébrale moyenne est le modèle le plus souvent utilisé en vivo d’accidents cérébrovasculaires chez les rongeurs. Une autre approche chirurgicale pour permettre la réparation de l’artère carotide commune est effectuée ici, qui permet à la reperfusion de l’artère carotide commune et une reperfusion intégrale sur le territoire de l’artère cérébrale moyenne.

Occlusion de l’artère cérébrale moyenne permettant une Reperfusion par l’intermédiaire de réparation de l’artère carotide commune chez les souris

Un modèle murin d’ischémie-reperfusion cérébrale est mis en place pour étudier la physiopathologie des accidents vasculaires cérébraux. Nous distalement ligaturer l’artère cérébrale moyenne droite et artère carotide commune droite et restaurer le flux sanguin après 10 ou 40 min d’ischémie.

Modèle de souris de deux vaisseaux Occlusion d’ischémie-reperfusion cérébrale

Ce protocole présente un guide étape par étape pour les chercheurs afin d’effectuer la procédure d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne sur des souris en utilisant la méthode modifiée de l’artère carotide externe Longa. Les modifications présentées dans cet article visent à augmenter la précision de l’occlusion de l’artère cérébrale moyenne et à assurer une reperfusion complète.

Optimisation de la méthode d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne Longa pour une reperfusion complète

Ce protocole décrit le processus de préparation à la reperfusion de l’occlusion de l’artère cérébrale moyenne via l’artère carotide commune.

Préparation d’un modèle modifié pour la reperfusion de l’occlusion de l’artère cérébrale moyenne

La méthode de l’aiguille de la sténose asymétrique bilatérale de l’artère carotide commune est proposée pour créer un modèle murin de déficience cognitive vasculaire et de démence. Elle donne des résultats à plus long terme par rapport aux modèles précédemment établis et est compatible avec l’IRM en direct. La représentation visuelle démontrant la procédure fournit des conseils pour maîtriser la chirurgie.

Un modèle murin de déficience cognitive vasculaire et de démence basé sur la sténose bilatérale asymétrique de l’artère carotide commune guidée par aiguille

Ce protocole décrit le processus d’induction d’un modèle de coma ischémique cérébral à l’aide d’une méthode d’occlusion modifiée à quatre vaisseaux.

Modèle de coma ischémique cérébral induit par une occlusion modifiée à quatre vaisseaux

Découvrez comment l'occlusion bilatérale des artères carotides communes induit une tolérance ischémique précoce chez la souris. Cette méthode utilise une sonde Doppler laser pour surveiller le flux sanguin cérébral et évaluer les lésions ischémiques focales.

Occlusion bilatérale de lartère carotide commune comme un stimulus suffisant pour provoquer le préconditionnement précoce Tolérance ischémique à une ischémie cérébrale focale (Vidéo) | JoVE Journal

Occlusion bilatérale de l'artère carotide commune comme un stimulus suffisant pour provoquer le préconditionnement précoce Tolérance ischémique à une ischémie cérébrale focale

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