Préparation et inactivation des agents pathogènes des doubles produits Buffy Coat dose de plaquettes à l'aide du système sanguin INTERCEPT

Dans cette vidéo, un concentré de plaquettes à double dose sera préparé à partir d'un pool de sept culots globulaires et ensuite traité avec Intercept. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la production d'un concentré de plaquettes à double dose inactivé au niveau des agents pathogènes. Nous présentons d'abord un aperçu schématique, suivi d'une démonstration.

Les sept premières unités de sang total donné sont centrifugées et séparées afin d'obtenir sept unités de culot blanc répondant aux critères de volume et d'hématocrite. Les culots blancs sont reliés, regroupés et centrifugés. La suspension de plaquettes est ensuite séparée des globules rouges résiduels pour produire un concentré de plaquettes à double dose destiné à l'inactivation des agents pathogènes et des leucocytes.

Le concentré de plaquettes à double dose est traité à l'aide du système d'interception, qui crée des liaisons croisées entre les acides nucléiques. En fin de compte, cette procédure permet d'obtenir deux doses thérapeutiques de plaquettes présentant une qualité in vitro acceptable pendant sept jours de conservation, comme déterminé par l'évaluation du pH, du glucose, du lactate, du PO₂ et du PCO₂, ainsi que de l'And shallot doru. Un technicien de mon centre de transfusion démontrera la procédure, ainsi que les exigences de transformation que nous décrirons.

Tout d'abord, s'assurer que le concentré de plaquettes à double dose respecte les spécifications de traitement d'interception : un volume compris entre 300 et 420 millilitres, une dose de plaquettes de 2,5 à 7 × 10¹¹, et moins de 4 × 10⁶ par millilitre. Globules rouges Commencer cette procédure avec sept unités de sang total recueillies dans des jeux de collecte haut-bas de 450 millilitres.

Placer les poches de sang dans des godets de centrifugeuse et effectuer une centrifugation forte à 4 880 RCF pendant 11 minutes à température ambiante, avec le réglage de freinage B5, conformément aux instructions du fabricant. Après la centrifugation, le sang sera séparé en trois couches : les globules rouges, le buffy coat et le plasma. Transférer le plasma dans la poche satellite supérieure et les globules rouges dans la poche satellite inférieure, en laissant le buffy coat d’environ 48 millilitres et d’un hématocrite de 37 % dans le récipient de collecte.

Placer les culots globulaires sur un agitateur de plaquettes à température ambiante pendant la nuit. Relier de manière stérile sept culots globulaires et 300 millilitres de solution additive plaquettaire SSP plus, en configuration en série avec la solution additive en haut. Pincer la tubulure entre la solution additive et le premier culot globulaire comme indiqué ici. Ouvrir les soudures entre les unités de culot globulaire et laisser s'écouler dans le récipient du dernier culot globulaire.

Ensuite, ouvrez le clamp et la soudure entre la solution additive et le premier culot buffy, et laissez environ un tiers de la solution additive, soit environ 100 millilitres, rincer successivement chacun des récipients de culot buffy avant de refermer le clamp. Répétez ce lavage deux fois supplémentaires, en utilisant à chaque fois environ 100 millilitres de la solution additive. Déconnectez le récipient contenant le culot buffy mis en commun des récipients vides. Le volume total du culot buffy, incluant la solution additive, doit être d’environ 600 millilitres.

Placer les culots globulaires regroupés sur un agitateur pendant une heure à température ambiante. Ensuite, relier un contenant de stockage de plaquettes équipé d'un filtre intégré de réduction des leucocytes au sac contenant le culot globulaire regroupé. Placer les culots globulaires regroupés et le contenant de stockage des plaquettes dans une centrifugeuse et centrifuger à 462 RCF pendant neuf minutes et vingt secondes.

Après la centrifugation, exprimez la suspension de plaquettes à travers le filtre de réduction Luca dans le récipient de stockage des plaquettes. Le résultat est un concentré de plaquettes en double dose contenant environ sept fois 10 à la puissance 11 plaquettes dans 420 millilitres, qui peut subir une inactivation des agents pathogènes avec Intercept. Le concentré de plaquettes en double dose est traité à l’aide d’un ensemble de traitement Intercept, composé d’un récipient à antoine, d’un récipient d’illumination et de deux récipients de stockage.

Reliez le récipient contenant la suspension de plaquettes au récipient Amin du jeu de prélèvement Intercept. Ensuite, suspendez les plaquettes. Cassez la canule inférieure du récipient Amin pour permettre à la solution de s'écouler vers le récipient d'illumination.

Ensuite, cassez la canule supérieure sur le contenant d'Amin pour permettre aux plaquettes de s'écouler à travers le contenant d'Amin et d'atteindre le contenant d'illumination. Mélangez délicatement le mélange de plaquettes et d'amotosine. Pressez légèrement le contenant d'illumination pour chasser l'air contenu dans celui-ci.

Scellez le tube entre l'illuminateur et le contenant amato de sorte qu'aucun segment de plus de quatre centimètres de tube ne dépasse du contenant d'illumination. Retirez et jetez les contenants vides. Placez le jeu de traitement dans l'illuminateur avec le contenant d'illumination dans le grand compartiment à gauche et l'organisateur dans le compartiment plus petit du côté droit.

Numériser l'identifiant du don. Code produit et traitement. Saisir le numéro de lot dans l'éclairage.

Fermez le couvercle métallique et le tiroir. Appuyez sur démarrer pour commencer l'illumination. L'illuminateur délivre une dose contrôlée de lumière UVA au mélange de plaquettes et d'amin dans le récipient d'illumination.

Les amines s'intercalent entre les paires de bases des acides nucléiques des agents pathogènes, qui peuvent être présents dans l'unité de plaquettes. Lors de l'illumination, des liaisons croisées permanentes se forment, fixant l'ADN ou l'ARN ensemble, de sorte que les agents pathogènes ne peuvent plus se répliquer ni provoquer de maladie chez le receveur du produit sanguin. Après l'illumination, retirez le jeu de perfusion.

Ensuite, déballez les contenants de l'organisateur, suspendez les plaquettes et le jeu de conditionnement. Cassez la canule à la sortie du contenant d'illumination et laissez les plaquettes s'écouler dans le contenant CAD. À l'intérieur du contenant CAD se trouve une pastille équipée de billes de polystyrène macroporeuses immobilisées qui réduisent les niveaux d'amin résiduel dans le produit sanguin.

Veiller à ne pas plier la plaquette CAD. Expulser l'air du récipient CAD dans le récipient d'illumination. Fermer le tube près de l'orifice d'entrée du récipient CAD.

Retirez et jetez le contenant d'illumination vide. Placez le contenant CAD avec les conteneurs de stockage attachés sur un agitateur à plaquettes pendant six à 16 heures. Cela entraînera une réduction de l'amyline résiduelle à une concentration inférieure ou égale à deux micromoles par litre.

Après le traitement par CAD, retirez les unités de plaquettes de l'agitateur, suspendez les plaquettes, cassez la canule à la sortie du récipient CAD et laissez les plaquettes s'écouler vers les deux récipients de stockage. Ensuite, exprimez l'air contenu dans les récipients de stockage. Scellez le tube au-dessus du raccord en Y et retirez le récipient CAD.

Le résultat est deux concentrés de plaquettes inactivés au niveau des agents pathogènes, destinés à évaluer la fonction plaquettaire in vitro. La dose de plaquettes, le pH, la PCO₂, la production de lactate et la consommation de glucose ont été mesurés au point d'intersection. Les concentrés de plaquettes ont été déterminés jusqu'au septième jour de stockage.

Cette figure montre la dose moyenne initiale de plaquettes du concentré de plaquettes en double dose avant le traitement par interception, ainsi que la dose moyenne de plaquettes dans chacun des produits fractionnés traités jusqu'au septième jour de conservation. Comme on peut le voir ici, la perte de plaquettes pendant la conservation était d'environ 9 %. Cette réduction n'est pas différente de la perte attendue de plaquettes pendant la conservation de plaquettes conventionnelles. Selon les exigences européennes, le pH des plaquettes doit rester supérieur à 6,4 jusqu'à la fin de la durée de conservation.

Pendant le traitement, le pH des concentrés de plaquettes diminue légèrement en fonction du volume de concentration plaquettaire et de la perméabilité au gaz du récipient de stockage des plaquettes. Ce graphique montre le pH des produits plaquettaires fractionnés sur sept jours de stockage ; le pH reste stable et bien maintenu dans les limites requises pour le traitement. Le métabolisme aérobie devrait se poursuivre dans les plaquettes stockées et constitue un indicateur de la capacité des plaquettes à fonctionner in vivo après transfusion à un patient.

La consommation de O₂ et la production de CO₂ par les plaquettes indiquent une respiration continue des plaquettes interceptées dans le contenant PL 24 10 pendant sept jours de stockage. De même, le métabolisme anaérobie devrait se poursuivre dans les plaquettes conservées. Ainsi, la consommation de glucose et la production de lactate constituent également des indicateurs de la capacité des plaquettes à fonctionner après transfusion.

Ces deux figures montrent les niveaux de lactate et de glucose sur sept jours de stockage. La consommation de glucose par les plaquettes et la production de lactate sont cohérentes entre elles. Au cours des sept jours de stockage, cinq unités ont présenté des concentrations de glucose inférieures à 1,11 millimole par litre, ce qui correspond à la limite inférieure de dosage du glucose.

La préparation du code Buffy et la validation du regroupement ont produit des concentrés de plaquettes qui répondent aux critères d'entrée pour le traitement d'interception, notamment en ce qui concerne le volume, le nombre de plaquettes, le rapport plasma et la contamination par les globules rouges. Les unités finales satisfont aux critères de validation pendant sept jours de stockage, y compris la dose de plaquettes et le pH. Le principal avantage de cette technique par rapport à la méthode conventionnelle de préparation du code Buffy, qui produit un concentré de plaquettes à dose unique, est qu'elle maximise le rendement des composants à partir des prélèvements sanguins, réduit les frais de fonctionnement grâce à une technique à double dose et améliore la sécurité des patients en inactivant les agents pathogènes transmissibles par transfusion.