Name: Microgavage de larves de poisson zèbre (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 53 s
Description: Apprenez le microgavage de larves de Danio rerio pour administrer précisément des substances dans l'intestin. Cette technique sûre et contrôlée facilite l'étude du transport intestinal et des effets sur le développement larvaire.

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Nous remercions les membres du laboratoire Rawls pour leurs suggestions utiles sur le contenu, ainsi que le Dr Alan Fanning pour ses discussions précieuses sur la perméabilité en fonction de la taille des jonctions serrées et les méthodes de perturbation. Nous remercions également le Dr Michael Chua et le Dr Neal Kramarcy de la Michael Hooker Microscopy Facility pour leur soutien concernant le microscope confocal. Ce travail a été financé par des subventions des National Institutes of Health : T32 DK007737-15 (boursier J.L.C.), F32 DK094592 (attribuée à J.L.C.) et R01 DK081426 (attribuée à J.F.R.).

<ol><li>Kuhlman, J., Eisen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+screen+for+mutations+affecting+development+and+function+of+the+enteric+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Genetic screen for mutations affecting development and function of the enteric nervous system.</a> Dev. Dyn. 236, 118-127 (2007).</li>
<li>Pack, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+affecting+development+of+zebrafish+digestive+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mutations affecting development of zebrafish digestive organs.</a> Development. 123, 321-328 (1996).</li>
<li>Wallace, K. N., Pack, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+and+conserved+aspects+of+gut+development+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Unique and conserved aspects of gut development in zebrafish.</a> Dev. Biol. 255, 12-29 (2003).</li>
<li>Wallace, K. N., Akhter, S., Smith, E. M., Lorent, K., Pack, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+growth+and+differentiation+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Mech.+Dev%22%5BJournal%5D)">Intestinal growth and differentiation in zebrafish.</a> Mech. Dev. 122, 157-173 (2005).</li>
<li>Ng, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+the+digestive+system+in+zebrafish%3A+III.+Intestinal+epithelium+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Formation of the digestive system in zebrafish: III. Intestinal epithelium morphogenesis.</a> Dev. Biol. 286, 114-135 (2005).</li>
<li>Hama, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+zebrafish+digestive+organ+function+using+multiple+quenched+fluorescent+reporters%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Gastrointest.+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of zebrafish digestive organ function using multiple quenched fluorescent reporters.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 296, 445-453 (2009).</li>
<li>Carten, J. D., Bradford, M. K., Farber, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+digestive+organ+morphology+and+function+using+differential+fatty+acid+metabolism+in+live+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Visualizing digestive organ morphology and function using differential fatty acid metabolism in live zebrafish.</a> Dev. Biol. 360, 276-285 (2011).</li>
<li>Rich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+high-content+model+system+for+studies+of+gastrointestinal+transit%3A+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterol+Motil%22%5BJournal%5D)">A new high-content model system for studies of gastrointestinal transit: the zebrafish.</a> Neurogastroenterol Motil. 21, 225-228 (2009).</li>
<li>Bagnat, M., Cheung, I. D., Mostov, K. E., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+control+of+single+lumen+formation+in+the+zebrafish+gut%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Genetic control of single lumen formation in the zebrafish gut.</a> Nat. Cell Biol. 9, 954-960 (2007).</li>
<li>Bagnat, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cse1l+is+a+negative+regulator+of+CFTR-dependent+fluid+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Cse1l is a negative regulator of CFTR-dependent fluid secretion.</a> Curr. Biol. 20, 1840-1845 (2010).</li>
<li>Shepherd, I., Eisen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+zebrafish+enteric+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of the zebrafish enteric nervous system.</a> Methods Cell Biol. 101, 143-160 (2011).</li>
<li>Brugman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxazolone-induced+enterocolitis+in+zebrafish+depends+on+the+composition+of+the+intestinal+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Oxazolone-induced enterocolitis in zebrafish depends on the composition of the intestinal microbiota.</a> Gastroenterology. 137, 1757-1767 (2009).</li>
<li>Oehlers, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inflammatory+bowel+disease+%28IBD%29+susceptibility+genes+NOD1+and+NOD2+have+conserved+anti-bacterial+roles+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">The inflammatory bowel disease (IBD) susceptibility genes NOD1 and NOD2 have conserved anti-bacterial roles in zebrafish.</a> Dis. Model Mech. 4, 832-841 (2011).</li>
<li>Oehlers, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chemical+enterocolitis+model+in+zebrafish+larvae+that+is+dependent+on+microbiota+and+responsive+to+pharmacological+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">A chemical enterocolitis model in zebrafish larvae that is dependent on microbiota and responsive to pharmacological agents.</a> Dev Dyn. 240, 288-298 (2011).</li>
<li>Faro, A., Boj, S. F., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fishing+for+intestinal+cancer+models%3A+unraveling+gastrointestinal+homeostasis+and+tumorigenesis+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Fishing for intestinal cancer models: unraveling gastrointestinal homeostasis and tumorigenesis in zebrafish.</a> Zebrafish. 6, 361-376 (2009).</li>
<li>Fleming, A., Jankowski, J., Goldsmith, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+analysis+of+gut+function+and+disease+changes+in+a+zebrafish+larvae+model+of+inflammatory+bowel+disease%3A+a+feasibility+study%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm.+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">In vivo analysis of gut function and disease changes in a zebrafish larvae model of inflammatory bowel disease: a feasibility study.</a> Inflamm. Bowel Dis. 16, 1162-1172 (2010).</li>
<li>Kanther, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+colonization+induces+dynamic+temporal+and+spatial+patterns+of+NF-kappaB+activation+in+the+zebrafish+digestive+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Microbial colonization induces dynamic temporal and spatial patterns of NF-kappaB activation in the zebrafish digestive tract.</a> Gastroenterology. , (2011).</li>
<li>Rawls, J. F., Samuel, B. S., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gnotobiotic+zebrafish+reveal+evolutionarily+conserved+responses+to+the+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Gnotobiotic zebrafish reveal evolutionarily conserved responses to the gut microbiota.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 4596-4601 (2004).</li>
<li>Rawls, J. F., Mahowald, M. A., Goodman, A. L., Trent, C. M., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+and+genetic+analysis+link+bacterial+motility+and+symbiosis+in+the+zebrafish+gut%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging and genetic analysis link bacterial motility and symbiosis in the zebrafish gut.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104, 7622-7627 (2007).</li>
<li>Kanther, M., Rawls, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-microbe+interactions+in+the+developing+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Host-microbe interactions in the developing zebrafish.</a> Curr. Opin. Immunol. 22, 10-19 (2010).</li>
<li>Bates, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+signals+from+the+microbiota+promote+different+aspects+of+zebrafish+gut+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Distinct signals from the microbiota promote different aspects of zebrafish gut differentiation.</a> Dev. Biol. 297, 374-386 (2006).</li>
<li>Cheesman, S. E., Guillemin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((We+know+you+are+in+there%3A+conversing+with+the+indigenous+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Microbiol%22%5BJournal%5D)">We know you are in there: conversing with the indigenous gut microbiota.</a> Res Microbiol. 158, 2-9 (2007).</li>
<li>Bates, J. M., Akerlund, J., Mittge, E., Guillemin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+alkaline+phosphatase+detoxifies+lipopolysaccharide+and+prevents+inflammation+in+zebrafish+in+response+to+the+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Intestinal alkaline phosphatase detoxifies lipopolysaccharide and prevents inflammation in zebrafish in response to the gut microbiota.</a> Cell Host Microbe. 2, 371-382 (2007).</li>
<li>Camp, J. G., Jazwa, A. L., Trent, C. M., Rawls, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intronic+cis-regulatory+modules+mediate+tissue-specific+and+microbial+control+of+angptl4%2Ffiaf+transcription%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Intronic cis-regulatory modules mediate tissue-specific and microbial control of angptl4/fiaf transcription.</a> PLoS Genetics. , In Press (2012).</li>
<li>Cheesman, S. E., Neal, J. T., Mittge, E., Seredick, B. M., Guillemin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cell+proliferation+in+the+developing+zebrafish+intestine+is+regulated+by+the+Wnt+pathway+and+microbial+signaling+via+Myd88%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Epithelial cell proliferation in the developing zebrafish intestine is regulated by the Wnt pathway and microbial signaling via Myd88.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 4570-4577 (2011).</li>
<li>Field, H. A., Kelley, K. A., Martell, L., Goldstein, A. M., Serluca, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+gastrointestinal+physiology+using+a+novel+intestinal+transit+assay+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterol.+Motil%22%5BJournal%5D)">Analysis of gastrointestinal physiology using a novel intestinal transit assay in zebrafish.</a> Neurogastroenterol. Motil. 21, 304-312 (2009).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+Zebrafish+Book%22">The Zebrafish Book</a>. , 4 edn, University of Oregon Press. (2000).</li>
<li>Pham, L. N., Kanther, M., Semova, I., Rawls, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+generating+and+colonizing+gnotobiotic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Methods for generating and colonizing gnotobiotic zebrafish.</a> Nat. Protoc. 3, 1862-1875 (2008).</li>
<li>Shen, L., Weber, C. R., Raleigh, D. R., Yu, D., Turner, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tight+junction+pore+and+leak+pathways%3A+a+dynamic+duo%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Tight junction pore and leak pathways: a dynamic duo.</a> Annu. Rev. Physiol. 73, 283-309 (2011).</li>
<li>Van Itallie, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+density+of+small+tight+junction+pores+varies+among+cell+types+and+is+increased+by+expression+of+claudin-2%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Sci%22%5BJournal%5D)">The density of small tight junction pores varies among cell types and is increased by expression of claudin-2.</a> J. Cell. Sci. 121, 298-305 (2008).</li>
<li>Van Itallie, C. M., Anderson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+size-dependent+permeability+of+the+tight+junction+using+PEG+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Measuring size-dependent permeability of the tight junction using PEG profiling.</a> Methods Mol. Biol. 762, 1-11 (2011).</li>
<li>Watson, C. J., Rowland, M., Warhurst, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+modeling+of+tight+junctions+in+intestinal+cell+monolayers+using+polyethylene+glycol+oligomers%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Functional modeling of tight junctions in intestinal cell monolayers using polyethylene glycol oligomers.</a> Am. J. Physiol. Cell Physiol. 281, 388-397 (2001).</li>
<li>Rodgers, L. S., Fanning, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+epithelial+permeability+by+the+actin+cytoskeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Cytoskeleton+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Regulation of epithelial permeability by the actin cytoskeleton.</a> Cytoskeleton (Hoboken). 68, 653-660 (2011).</li>
<li>Gonzalez-Mariscal, L., Chavez de Ramirez, B., Cereijido, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tight+junction+formation+in+cultured+epithelial+cells+%28MDCK%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Membr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Tight junction formation in cultured epithelial cells (MDCK).</a> J. Membr. Biol. 86, 113-125 (1985).</li>
<li>Palant, C. E., Duffey, M. E., Mookerjee, B. K., Ho, S., Bentzel, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ca2%2B+regulation+of+tight-junction+permeability+and+structure+in+Necturus+gallbladder%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Ca2+ regulation of tight-junction permeability and structure in Necturus gallbladder.</a> Am. J. Physiol. 245, C203-C212 (1983).</li>
<li>Holmberg, A., Schwerte, T., Pelster, B., Holmgren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ontogeny+of+the+gut+motility+control+system+in+zebrafish+Danio+rerio+embryos+and+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Ontogeny of the gut motility control system in zebrafish Danio rerio embryos and larvae.</a> J. Exp. Biol. 207, 4085-4094 (2004).</li>
<li>Rich, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kit-like+immunoreactivity+in+the+zebrafish+gastrointestinal+tract+reveals+putative%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Kit-like immunoreactivity in the zebrafish gastrointestinal tract reveals putative.</a> 236, 903-911 (2007).</li>
<li>Holmberg, A., Olsson, C., Hennig, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TTX-sensitive+and+TTX-insensitive+control+of+spontaneous+gut+motility+in+the+developing+zebrafish+%28Danio+rerio%29+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">TTX-sensitive and TTX-insensitive control of spontaneous gut motility in the developing zebrafish (Danio rerio) larvae.</a> J. Exp. Biol. 210, 1084-1091 (2007).</li>
<li>Hennig, G. W., Costa, M., Chen, B. N., Brookes, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+peristalsis+in+the+guinea-pig+small+intestine+using+spatio-temporal+maps%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of peristalsis in the guinea-pig small intestine using spatio-temporal maps.</a> J. Physiol. 517 (Pt 2), 575-590 (1999).</li>
<li>Flynn, E. J. 3rd, Trent, C. M., Rawls, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ontogeny+and+nutritional+control+of+adipogenesis+in+zebrafish+%28Danio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Ontogeny and nutritional control of adipogenesis in zebrafish (Danio rerio.</a> J. Lipid Res. 50, 1641-1652 (2009).</li>
<li>Clifton, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+novel+inhibitors+of+dietary+lipid+absorption+using+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Identification of novel inhibitors of dietary lipid absorption using zebrafish.</a> PLoS One. 5, e12386(2010).</li>
<li>Jin, S. W., Beis, D., Mitchell, T., Chen, J. N., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+molecular+analyses+of+vascular+tube+and+lumen+formation+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Cellular and molecular analyses of vascular tube and lumen formation in zebrafish.</a> Development. 132, 5199-5209 (2005).</li>
<li>Berghmans, S., Hunt, J., Roach, A., Goldsmith, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+offer+the+potential+for+a+primary+screen+to+identify+a+wide+variety+of+potential+anticonvulsants%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsy+Res%22%5BJournal%5D)">Zebrafish offer the potential for a primary screen to identify a wide variety of potential anticonvulsants.</a> Epilepsy Res. 75, 18-28 (2007).</li>
</ol>

Aucun conflit d'intérêts déclaré.

Dans ce travail, nous décrivons un nouveau protocole permettant l'administration directe de substances dans l'intestin de larves de poisson zèbre par microgavage. Plusieurs étapes critiques doivent être prises en compte tout au long de la procédure. Premièrement, les larves de poisson zèbre doivent être en bonne santé avant l'expérience de gavage afin d'éviter des décès non liés au traitement. Un autre facteur important est la qualité de l'aiguille de gavage. L'une des parties les plus délicates du protocole consiste à c...

<table><tbody><tr><td>Finquel (méthanesulfonate de tricaine)</td><td>Argent Chemical Laboratories</td><td>MS-222</td><td>Anesthésie des larves</td></tr><tr><td>Solution de rouge de phénol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0290-100 ml</td><td>0,5 % dans DPBS, testé pour la culture cellulaire</td></tr><tr><td>Huile minérale, claire, blanche (haute pureté)</td><td>Amresco</td><td>J217-500 ml</td><td>Pour le remplissage arrière des aiguilles et les tests de volume</td></tr><tr><td>Dextran marqué avec le Texas Red, poids moléculaire 10 000, fixable par la lysine</td><td>Invitrogen/ Molecular Probes</td><td>D-1863</td><td>Suspension à 1 % dans du PBS 1x/rouge de phénol</td></tr><tr><td>FM4-64FX</td><td>Invitrogen/ Molecular Probes</td><td>F34653</td><td>Solution mère à 5 mM dans l’eau</td></tr><tr><td>Méthylcellulose</td><td>MP Biochemicals</td><td>0215549590</td><td></td></tr><tr><td>Capillaires en verre borosilicaté</td><td>Drummond Scientific</td><td>3-000-203-G/X</td><td>Diamètre extérieur 1,14 mm, diamètre intérieur 0,53 mm, longueur 3,5 pouces</td></tr><tr><td>Embout en plastique pour la fabrication de moules</td><td>Adaptive Science Tools</td><td>TU-1</td><td></td></tr><tr><td>Unité de micro-injection Nanoject II</td><td>Drummond Scientific</td><td>3-000-204</td><td></td></tr><tr><td>Tire-lames Flaming Brown, filament large de 3,0 mm</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>P-97, FT330B</td><td>Préparation des aiguilles</td></tr><tr><td>Pince Dumont n°5 pour étudiants</td><td>Fine Science Tools</td><td>91150-20</td><td>0,1 x 0,06 mm, pour couper les aiguilles</td></tr><tr><td>Graticule oculaire, 5 mm - 100 divisions</td><td>Leica</td><td>10394771</td><td>Pour couper les aiguilles</td></tr><tr><td>Microforge</td><td>Narishige</td><td>MF-900</td><td>Coupe des aiguilles et polissage à la flamme</td></tr><tr><td>Aiguille pour seringue Tuberculin SlipTip</td><td>Becton Dickinson</td><td>309626</td><td>1 ml, aiguille 25G 5/8</td></tr><tr><td>Microsphères Fluoresbrite YG (2,0 &amp;mu;m)</td><td>Polysciences, Inc.</td><td>18338</td><td>Analyse de la motilité intestinale</td></tr><tr><td>Microscope stéréoscopique</td><td>Leica</td><td>S6E</td><td>Procédure de gavage</td></tr><tr><td>Microscope stéréoscopique à fluorescence</td><td>Leica</td><td>M205C</td><td>Essai de barrière au dextran</td></tr><tr><td>Microscope confocal</td><td>Zeiss</td><td>LSM510</td><td>Imagerie du dextran en circulation</td></tr></tbody></table>

microgavage de larves de poisson zèbre

Microgavage of Zebrafish Larvae

Le poisson zèbre s'est imposé comme un organisme modèle puissant pour l'étude du développement intestinal1-5, de la physiologie6-11, des maladies12-16 et des interactions hôte-microbe17-25. Les approches expérimentales destinées à étudier la biologie intestinale nécessitent souvent l'introduction in vivo de matériaux sélectionnés dans la lumière de l'intestin. Dans le modèle du poisson zèbre larvaire, cela est généralement réalisé en plongeant les poissons dans une solution contenant le matériau choisi, ou par injection à travers la paroi abdominale. Lorsqu'on utilise la méthode d'immersion, il est difficile de surveiller ou de contrôler précisément la voie ou le moment de l'administration du matériau dans l'intestin. Pour cette raison, l'exposition par immersion peut provoquer une toxicité non voulue et d'autres effets sur les tissus extraintestinaux, limitant ainsi la gamme possible de quantités de matériau pouvant être délivrées dans l'intestin. De plus, la quantité de matériau ingérée pendant l'exposition par immersion peut varier considérablement d'une larve à l'autre26. Bien que ces problèmes ne se posent pas lors d'une injection directe à travers la paroi abdominale, cette technique est délicate à réaliser et provoque des lésions tissulaires pouvant influencer les résultats expérimentaux. Nous présentons ici une méthode de microsondage chez les larves de poisson zèbre. L'objectif de cette méthode est de proposer un moyen sûr, efficace et reproductible de délivrer un matériau directement dans la lumière de l'intestin antérieur des larves de poisson zèbre, avec un contrôle précis du moment d'administration. Le microsondage utilise du matériel standard d'injection microscopique d'embryons et de stéréomicroscopie, couramment disponible dans la plupart des laboratoires travaillant sur le poisson zèbre. Une fois les poissons correctement positionnés dans la méthylcellulose, le sondage peut être effectué rapidement, à un rythme d'environ 7 à 10 poissons par minute, et le taux de survie après le sondage approche 100 %, selon la nature du matériau administré. Nous montrons également que le microsondage permet de charger la lumière intestinale avec des concentrations élevées de substances qui seraient létales pour les poissons en cas d'exposition par immersion. Afin d'illustrer l'utilité de cette méthode, nous décrivons un test de microsondage avec un dextran fluorescent, utilisable pour quantifier le passage du matériau depuis la lumière intestinale vers les espaces extraintestinaux. Ce test permet de vérifier l'exécution correcte de la procédure de microsondage, et fournit également un nouvel essai chez le poisson zèbre pour évaluer l'intégrité de la barrière épithéliale intestinale dans différentes conditions expérimentales (par exemple : manipulation génétique, traitement médicamenteux ou exposition à des facteurs environnementaux). En outre, nous montrons comment le sondage peut être utilisé pour évaluer la motilité intestinale en administrant des microsphères fluorescentes et en suivant leur transit ultérieur. Le microsondage peut être utilisé pour délivrer divers matériaux tels que des micro-organismes vivants, des facteurs ou toxines microbiens sécrétés, des agents pharmacologiques et des sondes physiologiques. Grâce à ces capacités, la méthode de microsondage chez les larves de poisson zèbre a le potentiel d'améliorer un large éventail de domaines de recherche utilisant ce système modèle.

Lorsque la gavage est effectuée correctement, le matériel administré doit être entièrement contenu dans l'intestin antérieur, avec peu ou pas de résidu dans l'œsophage (Figure 3). Le volume administré doit être choisi de manière à pouvoir être contenu dans la bulle antérieure sans s'écouler par la cloaque ou l'œsophage. Si le volume de matériel ou la pression d'administration est trop élevé, la force physique du gavage peut endommager l'épithélium ou provoquer des fuites à travers celui-ci. Cela peut éga...

Nous présentons une nouvelle méthode de gavage microscopique de larves de poisson-zèbre utilisant du matériel standard d'injection microscopique d'embryons et de microscopie stéréo. Nous démontrons que le gavage microscopique est une technique sûre et efficace, utile pour délivrer des quantités contrôlées de divers matériaux directement dans la lumière intestinale des larves de poisson-zèbre.

Microgavage de larves de poisson zèbre

Le poisson-zèbre s'est imposé comme un organisme modèle puissant pour étudier le développement intestinal1-5, la physiologie6-11, les pathologies12-16 et les interactions hôte-microbe ...

L'objectif général de cette procédure est d'administrer par voie orale des substances dans la lumière intestinale de larves de poisson zèbre. Tout d'abord, les larves sont anesthésiées et placées sur un moule d'injection recouvert de méthylcellulose. Ensuite, les larves sont doucement immergées dans le moule et alignées selon l'angle de l'aiguille de gavage et du micromanipulateur.L'aiguille est ensuite insérée dans la bouche de la larve et dirigée vers la vésicule intestinale. Une fois en place, le matériel est libéré dans la lumière. La dernière étape consiste à extraire la larve de la méthylcellulose et à la placer dans un milieu frais pour qu'elle se remette de l'anesthésie.En fin de compte, cette méthode peut être utilisée pour délivrer des matériaux spécifiquement dans la lumière intestinale de larves de zebrafish, où le transport au sein de l'intestin ou dans les tissus extraintestinaux peut être étudié. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, telles que l'immersion dans de l'eau contenant le matériau d'intérêt, est que la quantité de matériau délivrée à l'animal, ainsi que le moment et la dose, peuvent être rigoureusement contrôlés. Cel

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Cette vidéo montre comment morpholino ou ARNm peut être injecté dans des embryons de poisson zèbre au stade d'une cellule pour diminuer ou augmenter le niveau des produits de gènes spécifiques au cours du développement ultérieur.

Microinjection d&#39;embryons de poissons zèbres pour analyser la fonction génique

Source : Li, J., et al. Développement d’un modèle larvaire d’infection par le poisson-zèbre pour Clostridioides difficile. J. Vis. Exp. (2020).Cette vidéo illustre la procédure de microgavage, où une larve de poisson-zèbre anesthésiée est immobilisée dans de l’agarose et injectée par voie orale avec une bactérie pathogène à l’aide d’une aiguille guidée par un traceur. L’accouchement non invasif imite l’infection naturelle, permettant d’analyser la réplication bactérienne, la libération de...

Développement d’un modèle d’infection larvaire par poisson-zèbre utilisant le microgavage

L'utilisation croissante de poisson zèbre comme modèle animal nécessite le développement de méthodes efficaces pour la livraison de quantités connues de composés et des solutions. La procédure décrite ci-dessous permet de gavage pour l'administration orale de volumes précis de solution fiable, sûre et efficace pour le poisson zèbre adulte.

Gavage poisson zèbre pour adultes

Le poisson-zèbre est un excellent système modèle pour les études génétiques et développementales. L’implantation de billes est une technique précieuse de manipulation tissulaire qui peut être utilisée pour interroger les mécanismes de développement en introduisant des altérations dans les environnements cellulaires locaux. Ce protocole décrit comment effectuer l’implantation de microbilles dans l’embryon de poisson-zèbre.

Microbead implantation dans l&#39;embryon de poisson zèbre

Les manipulations ciblées pour provoquer un stress dirigé ou la mort dans des cellules individuelles ont été relativement difficiles à réaliser. Ici, une approche d’ablation à résolution cellulaire unique pour stresser et tuer sélectivement des cellules individuelles dans des cultures cellulaires et des animaux vivants est décrite sur la base d’un laser UV confocal standard.

Déclenchement Stress cellulaire et la mort Utilisation conventionnelle UV Laser Microscopie confocale

Nous présentons ici un protocole pour isoler gonades des larves de poisson zèbre, ce qui facilitera les enquêtes de la différenciation sexuelle et l'entretien du poisson zèbre.

Dissection de tissu gonadique Larval Zebrafish

L’ablation au laser est une technologie largement applicable pour étudier la régénération dans les systèmes biologiques. Le protocole présenté décrit l’utilisation d’un microscope confocal standard de laser-balayage pour l’ablation de laser et la formation image time-lapse suivante des cellules interuromast régénérantes dans la ligne latérale de zebrafish.

Essai confocal d’ablation et de régénération au microscope dans les cellules interuromast de Zebrafish

La clarté optique est un avantage majeur pour le travail biologique et physiologique cellulaire chez le poisson zèbre. Des méthodes robustes de mesure de la croissance cellulaire chez des animaux individuels sont décrites qui permettent de mieux comprendre comment la croissance des muscles squelettiques et des tissus voisins est intégrée à la croissance du corps entier.

Mesure en temps réel et répétée de la croissance musculaire squelettique chez un poisson-zèbre vivant soumis à une activité électrique altérée

Ce protocole démontre la micro-injection de lipopolysaccharide dans la région ventriculaire du cerveau dans un modèle larvaire de poisson zèbre pour étudier la réponse neuroinflammatoire et la neurotoxicité qui en résultent.

Microinjections ventriculaires cérébrales de lipopolysaccharide dans des larves de poisson-zèbre pour évaluer la neuroinflammation et la neurotoxicité

Nous faisons la démonstration d’une méthode qui tire parti de la microscopie confocale à balayage rapide pour effectuer une imagerie en direct des cellules microgliales dans le tectum optique du poisson-zèbre en développement, permettant ainsi l’analyse de la dynamique de ces cellules in vivo.

Imagerie en direct et caractérisation de la dynamique de la microglie chez l’embryon de poisson-zèbre

Ce protocole décrit une procédure de dépistage de médicaments chez les larves de poisson-zèbre 3 à 7 jours après la fécondation, suivie d’une évaluation morphologique.

Dépistage de petites molécules et essais de toxicité chez les larves de poisson-zèbre à un stade précoce

Apprenez le microgavage de larves de Danio rerio pour administrer précisément des substances dans l'intestin. Cette technique sûre et contrôlée facilite l'étude du transport intestinal et des effets sur le développement larvaire.

Microgavage de larves de poisson zèbre

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