Évaluer murin Fonction Artère résistance à l'aide myographie de pression

L’objectif général de l’expérience suivante est de déterminer la réactivité vasculaire en temps réel d’une artère résistante chez la souris in vitro dans des conditions physiologiques proches. Ceci est réalisé en montant un petit segment du récipient sur deux micro-canules et en le maintenant à une pression luminale physiologique. Le vaisseau est ensuite resserré avec une phényléphrine, un agoniste du récepteur alpha un, pour étudier la capacité de tout médicament à dilater le vaisseau.

Le fait de mettre au défi le vaisseau rétréci avec de l’acétylcholine évalue sa capacité à se dilater en temps réel via un mécanisme dépendant de l’endothélium. Les résultats montrent le pourcentage de variation du diamètre de la lumière en réponse à l’acétylcholine et vérifient que le déficit en SGC alpha one entraîne une altération de la vasodilatation dépendante de l’endothélium. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes comme la mamographie à fil, est que la mammographie à pression permet de caractériser les petits micro-vaisseaux, qui sont plus pertinents pour maintenir l’homéostasie de la pression artérielle que les vaisseaux à conductance plus grands.

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine cardiovasculaire, comme l’hypertension, où les vaisseaux macro-résistants jouent un rôle essentiel. Commencez par euthanasier une souris avec du pentobarbital. Ouvrez maintenant la cavité abdominale et commencez à disséquer le tissu mésentérique.

Identifiez maintenant une artère mésentérique de troisième ordre et isolez-la du tissu conjonctif et adipeux. La différenciation entre les artères et les veines au niveau des microvaisseaux est problématique lorsqu’il n’y a pas de sang dans les vaisseaux. Il est donc préférable de le faire chez l’animal intact.

Ensuite, coupez un segment de deux à trois millimètres de long de l’artère mésentérique de troisième ordre et placez-le dans un plat contenant des tas. Tampon PSS. Le segment artériel ne doit pas contenir de ramification.

Préparez la chambre myo en remplissant doucement les canules à travers des vannes d’entrée et de sortie avec une solution PSS en tas À partir d’une seringue de 10 millilitres, sachez qu’une pression excessive peut endommager le fragile transducteur connecté aux canules. Après avoir bien rempli les canules, fermez les deux vannes. Transférez maintenant le segment artériel isolé dans la chambre et montez une extrémité du vaisseau sur la canule droite.

En l’attachant soigneusement avec un fin brin de suture en nylon à l’aide d’une seringue, rincez et remplissez le récipient avec une solution en tas via la valve d’entrée. Montez maintenant l’autre extrémité du vaisseau sur la canule gauche et fixez la canule au vaisseau avec la suture en nylon. Remplissez la chambre avec jusqu’à 10 millilitres de solution de tas.

Vérifiez s’il y a une fuite en poussant doucement la solution en tas via la valve d’entrée à l’aide d’une seringue. Placez maintenant la chambre sous la caméra vidéo. Démarrez l’oxygène et chauffez la chambre à 37 degrés Celsius pendant que la soupape d’entrée est fermée, connectée au tube P un du premier réservoir de solution en tas.

Laissez passer les bulles et les solutions dans le tube jusqu’à ce qu’il n’y ait plus de bulles dans le tube. Ouvrez ensuite la vanne. Connectez-vous à la valve gauche de la chambre avec le tube P deux.

En venant du régulateur de pression, assurez-vous qu’il n’y a pas de bulles ou de fuites dans l’ensemble du système. Allez dans le menu de pression sur le panneau d’interface myo ou dans le logiciel et allumez la pompe tout en coupant le débit. Ouvrez le programme et cliquez sur collecter.

La surveillance et l’analyse de la lumière du vaisseau, du diamètre du vaisseau et de l’épaisseur de la paroi sont désormais possibles. Pour augmenter progressivement la pression interluminale, sélectionnez la pression P un et entrez une séquence de pression ascendante. Valeurs de cinq à 60 millimètres de récipients de mercure, parfois tordus ou alvéolés lorsque la pression augmente, alors ajustez la tension ou la déformation en conséquence à l’aide d’un micro-positionneur vertical ou longitudinal.

Une fois que la pression est à 60 millimètres et que le bain est à 37 degrés Celsius, équilibrez le récipient pendant au moins 45 minutes et jusqu’à une heure pendant la période d’équilibre. Changez la solution du bain une fois avec des tas de préchauffage. Maintenant que la section artérielle est équilibrée, appliquez 10 millilitres de solution dépolarisante de chlorure de potassium à 37 degrés Celsius.

Le muscle lisse se dépolarisera complètement et atteindra une constriction maximale. Après avoir obtenu une constriction stable, rincez le bain avec une solution en tas trois fois à 10 minutes d’intervalle. Vérifiez maintenant la viabilité du vaisseau et l’intégrité de l’endothélium.

Tout d’abord, pré-resserrez le vaisseau en ajoutant de la phényléphrine pour tendre vers moins cinq moles par litre. Lorsqu’une constriction stable a été obtenue, effectuer une courbe de réponse de vasodilatation de concentration cumulative par addition séquentielle de doses croissantes d’acétylcholine de 10 à la négative, de neuf à 10 à moins cinq moles par litre après la dernière dose d’acétylcholine. Rincez la préparation à l’aide de tas trois fois à 10 minutes d’intervalle.

Maintenant, déterminez le diamètre de la lumière passive en appliquant du PSS sans calcium contenant deux millimoles d’EGTA par litre à partir des tracés enregistrés. Mesurez le diamètre du lumen pour chaque relation dose-réponse, qui sera utilisé pour calculer tous les paramètres. Exprimer la réponse de relaxation de l’acétylcholine sous forme de comparaison entre le traitement avec l’agoniste et le tampon sans calcium en termes de combien chacun a altéré le diamètre de la lumière à partir de la constriction induite par la phényléphrine.

La myographie a été utilisée pour étudier la relaxation vasculaire en réponse à l’acétylcholine dans les artères de résistance mésentérique isolées de souris knock-out de type sauvage et SGC alpha one sur les fonds S six et black six et pré-resserrées avec de la phényléphrine. Le déficit en SGC alpha one était associé à la diminution de la capacité de l’acétylcholine à induire une relaxation vasculaire, quel que soit le patrimoine génétique des souris étudiées. Cependant, la relaxation dépendante de l’endothélium des souris nulles SGC Alpha one était plus nettement altérée dans le fond S six que dans le fond noir six Fond.

Ensemble, ces résultats suggèrent que la diminution de la sensibilité du système vasculaire à la relaxation dépendante de l’endothélium peut contribuer à l’hypertension spécifique de la souche chez les souris SGC Alpha one knock-out Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en une ou deux heures si elle est effectuée correctement. En plus de cette procédure, d’autres méthodes comme la microscopie confocale peuvent être effectuées simultanément sur les vaisseaux sanguins vivants. Cela permettrait, par exemple, de mesurer les concentrations intracellulaires de fer qui peuvent aider à identifier les mécanismes de signalisation sous-jacents.