Question 1

Pourquoi la fixation des tissus est-elle nécessaire dans la préparation d'échantillons histologiques ?

Accepted Answer

La fixation des tissus préserve la structure cellulaire et tissulaire en empêchant la dégradation causée par les enzymes naturellement présents libérés après la mort cellulaire. La fixation inhibe l'activité enzymatique et rend les sites de clivage des protéines irreconnaissables. Les deux mécanismes principaux sont la réticulation, qui forme des liaisons covalentes pour rigidifier les tissus, et la coagulation, qui déshydrate les protéines en utilisant des alcools ou de l'acétone pour déformer leur structure.

Question 2

Quels sont les deux principaux mécanismes de fixation des tissus?

Accepted Answer

La réticulation implique la formation de liaisons covalentes à l'intérieur et entre les protéines, provoquant le durcissement des tissus et leur résistance à la dégradation. La coagulation déshydrate les protéines par des alcools ou de l'acétone, déformant leur structure tertiaire de sorte que les régions hydrophobes se déplacent vers la surface de la protéine. La fixation coagulatoire aide les médias d'inclusion comme la cire de paraffine à pénétrer plus efficacement dans les tissus.

Question 3

Comment le formol fonctionne-t-il comme fixatif dans la préparation des tissus?

Accepted Answer

Le formol, du formaldéhyde dissous dans l'eau, se fixe sur les amines primaires des chaînes latérales des acides aminés comme la lysine et la glutamine, formant des ponts méthylène stables. Ce processus de réticulation est intrinsèquement lent, nécessitant 1-2 jours pour être achevé. Le formol fonctionne mieux lorsqu'il est tamponné avec du phosphate pour maintenir un pH neutre et prévenir les artefacts tissulaires.

Question 4

Quels facteurs doivent être pris en compte avant de commencer la fixation des tissus?

Accepted Answer

Considérez la diffusivité de l'échantillon : les fixateurs pénètrent dans les tissus à des taux liés au coefficient de diffusion et au temps, donc les échantillons doivent être limités à une épaisseur de 4 mm pour une fixation approfondie. Considérez également le volume du fixateur et le pH. Le rapport fixateur/échantillon doit être d'au moins 40:1 pour éviter l'épuisement du réactif. Le formol doit être tamponné avec du phosphate pour maintenir un pH neutre et éviter les artefacts tissulaires.

Question 5

Quel est le but d'intégrer des médias dans la préparation histologique ?

Accepted Answer

L'incorporation de médias prend en charge des échantillons avec une rigidité mécanique similaire au tissu lui-même. La cire de paraffine est le milieu d'incorporation le plus courant. Le choix d'un milieu d'incorporation approprié est crucial car un milieu trop rigide ou trop faible provoque des défauts de sectionnement. Avant l'incorporation à la paraffine, les échantillons doivent être déshydratés en remplaçant l'eau par de l'éthanol, puis des xylènes, et enfin de la cire de paraffine chauffée.

Question 6

Comment le cryosectionnement diffère-t-il du sectionnement traditionnel par paraffine?

Accepted Answer

La cryosection évite la fixation en congelant rapidement le tissu dans un milieu OCT (température optimale de coupe) puis en le sectionnant avec un cryomicrotome maintenu à -20°C. Contrairement aux sections en paraffine qui nécessitent un traitement au bain d'eau, les sections congelées sont directement prélevées sur des lames de verre à charge positive immédiatement après la section. Cette méthode préserve mieux la structure des protéines pour le marquage par anticorps puisque la réticulation n'a pas lieu.

Question 7

Quelles sont les méthodes d'inclusion alternatives à la cire de paraffine?

Accepted Answer

L'incorporation d'Agar recouvre les échantillons avec du liquide agarose fraîchement préparé qui fixe le tissu en place lorsqu'il refroidit. Les vibrotomes avec des lames vibrantes coupent des sections épaisses de 50 à 1000 µm à partir d'échantillons incorporés dans l'agarose. Les échantillons sont généralement retirés de l'agarose avant la coloration et montés sur des lames avec de la graisse sous vide. Les sections épaisses d'agarose sont mieux visualisées à l'aide d'un microscope principe de la microscopie, instrumentation et applications pour une imagerie haute résolution.

Préparation des échantillons histologiques pour la microscopie optique - Quiz d'évaluation