Transplantation dans la chambre antérieure de l'oeil pour longitudinale, non-invasive In vivo Imagerie avec une seule cellule de résolution en temps réel

Bonjour, je suis moi Doretta de l’Institut de recherche sur le diabète de l’Université de Miami Miller School of Medicine. Je vais montrer dans cette vidéo comment transplanter des œillets pancréatiques dans la chambre intérieure de l’œil de souris. La procédure se déroule en deux étapes.

La première étape consiste à charger les œillets pancréatiques isolés dans la canule, et la deuxième étape est la procédure de transplantation proprement dite. Pour plus de détails sur l’instrumentation et les réactifs, veuillez vous référer au texte d’accompagnement. Nous mettons en évidence ici, l’enfonce-seringue motorisé avec la seringue montée et les accessoires du réservoir et de la canule, qui seront abordés dans la vidéo suivante.

Nous commençons par charger les œillets dans la canule. Toutes les procédures sont effectuées sous stéréoscope. Commencez par centrer les œillets en faisant tourner ou en tournant le plat en cercles.

Une fois centrée, débranchez la canule du réservoir et évacuez les bulles d’air en poussant le pousseur de seringue motorisé vers l’avant. Et cela se fait en appuyant sur la pédale avant. Lorsque vous êtes prêt, commencez à aspirer les œillets dans le réservoir en entraînant maintenant l’actionneur de seringue motorisé dans le sens inverse.

Et encore une fois, cela se fait en appuyant sur la pédale arrière. Remarquez comment les œillets ont tendance à s’accumuler au fond du réservoir. Reconnectez ensuite la canule au réservoir et éjectez les œillets hors du réservoir.

Ensuite, le tube dans la canule pour déloger les œillets du réservoir et les encourager à rester emballés dans le tube. Tapotez le réservoir pendant que vous faites avancer l’enfonce-seringue motorisé. Remarquez à quel point les œillets sont emballés dans le tube lorsqu’ils commencent à pénétrer à l’arrière de la canule.

À présent, vous devriez être prêt à transplanter les œillets. Placez la souris de taille NS sur un tapis et exposez ou éclatez l’œil à transplanter en tirant sur la peau de la tête avec votre index et votre pouce. Utilisation d’une aiguille neuve comme scalpel.

Approchez-vous de l’œil avec l’extrémité biseautée vers le bas pour éviter le contact et les blessures de l’iris. Pénétrez la pointe de l’aiguille dans la cornée et faites une incision latérale. Ensuite, introduisez la canule, préchargée avec des paupières dans la chambre intérieure à travers l’incision, et commencez à infuser à nouveau les œillets dans la chambre en poussant l’enfonce-seringue motorisé vers l’avant.

Ne vous inquiétez pas des bulles d’air qui pourraient être piégées à l’intérieur de la canule car elles se dissiperont plus tard. Et ils agiront comme une barrière naturelle pour minimiser ou prévenir le reflux des paupières hors de la chambre. Rétractez lentement et soigneusement la canule hors de la chambre intérieure.

Lavez maintenant l’œil avec du PBS stérile. Injectez votre analgésique préféré et, enfin, appliquez une pommade antibiotique ophtalmique. La transplantation est terminée.

Nous montrons maintenant des résultats représentatifs avec des paupières pancréatiques transplantées dans la chambre intérieure de l’œil. Pour les études d’imagerie longitudinale des œillets individuels le septième jour. Après la transplantation, les œillets sont clairement greffés sur le dessus de l’iris au 28e jour.

Les œillets sont aux mêmes endroits que ceux vus précédemment 42 jours après la transplantation. Les œillets sont clairement visibles aux mêmes endroits. Remarquez également à quel point l’incision a bien cicatrisé, excluant toute possibilité d’interférer avec l’imagerie des œillets individuels.