Question 1

Quelle est la différence entre les lignées cellulaires immortalisées et les lignées de cellules souches?

Accepted Answer

Les lignées cellulaires immortalisées proviennent d'organismes multicellulaires avec des mutations affectant la régulation du cycle cellulaire, permettant une prolifération indéfinie. Les lignées de cellules souches sont générées en isolant des cellules multipotentes auto-renouvelantes à partir de tissus adultes ou embryonnaires. Les deux peuvent être maintenues indéfiniment en culture dans des conditions appropriées, mais les cellules souches conservent la pluripotence tandis que les cellules immortalisées ne le font pas.

Question 2

Pourquoi est-il important de changer régulièrement le milieu de culture cellulaire?

Accepted Answer

Les métabolites toxiques s'accumulent dans les milieux de culture cellulaire au fil du temps, abaissant le pH et réduisant la disponibilité des nutriments. Un milieu frais maintient la santé cellulaire et soutient une expansion continue. Les indicateurs de couleur du milieu comme le rouge phénol signalent quand des changements sont nécessaires—l'orange indique un milieu frais, le jaune indique des conditions acides nécessitant un changement de milieu immédiat, et le rose suggère que le pH est trop basique.

Question 3

Qu'est-ce que signifie une confluence de 90% et pourquoi est-ce important pour le passage cellulaire ?

Accepted Answer

La confluency fait référence au pourcentage de la surface du conteneur de culture couverte par les cellules. À 90% de confluency, les cellules adhérentes couvrent la majeure partie du fond du conteneur et doivent être passées pour prévenir la surcroissance et maintenir la santé des cellules. La surveillance de la confluency assure que les cellules sont divisées au moment optimal pour l'expansion et prévient l'accumulation de métabolites toxiques.

Question 4

Quels sont les composants essentiels d'un milieu de culture cellulaire complet?

Accepted Answer

Les milieux complets nécessitent du sérum tel que du Sérum Bovin Fœtal traité thermiquement pour les facteurs de croissance, des antibiotiques comme la pénicilline et la streptomycine pour prévenir la contamination, et des facteurs de croissance additionnels tels que le facteur de croissance des fibroblastes pour prolonger l'expansion. Chaque lignée cellulaire nécessite un cocktail spécifique de suppléments de croissance adapté à ses besoins. Conservez les milieux complets à 4°C lorsqu'ils ne sont pas utilisés.

Question 5

Comment la trypsine est-elle utilisée pour retirer les cellules adhérentes des plaques de culture?

Accepted Answer

La trypsine est une enzyme digestive qui clive les protéines liant les cellules aux surfaces en plastique. Les cellules sont d'abord lavées avec une solution saline tamponnée de phosphate sans calcium ni magnésium, puis la trypsine est ajoutée et incubée à 37°C pendant environ 5 minutes. Un chronométrage soigneux est essentiel pour éviter d'endommager les protéines de surface cellulaire. Un nouveau milieu est ajouté pour arrêter la protéolyse avant de transférer les cellules dans un tube conique pour le décompte en utilisant des méthodes et des applications d'hémacytométrie.

Question 6

Quelles sont les méthodes alternatives pour éliminer les cellules trop adhérentes pour un traitement au trypsine standard ?

Accepted Answer

Pour les cellules sensibles à la digestion enzymatique ou extrêmement adhérentes aux plaques, un grattoir à cellules peut retirer délicatement les cellules du fond du récipient de culture. Alternativement, une pipette sérologique peut être utilisée avec un mouvement de grattage ferme tout en rinçant avec le milieu. La dissociation mécanique nécessite de la prudence, car les cellules délicates peuvent être endommagées par ces méthodes.

Question 7

Comment les cultures cellulaires peuvent-elles être développées plus rapidement que ce que permettent les flacons à couche unique?

Accepted Answer

Les flacons multicouches augmentent les cultures cellulaires de 3 à 5 fois par rapport aux flacons à couche unique, permettant une mise à l'échelle plus rapide et plus reproductible de l'expansion cellulaire. Ces récipients de culture spécialisés offrent une surface accrue pour la croissance cellulaire, les rendant idéaux pour générer efficacement un grand nombre de cellules tout en maintenant des conditions de culture appropriées.

Passage des cellules - Quiz d'évaluation