Un désossage méthode manuelle en vigueur pour préparer Intact souris tissu nasal avec l'organisation anatomique préservée

Bonjour, je suis David Dunton du laboratoire du Dr Wung Lynn à l'UMBC. Dans cette vidéo, nous présentons une technique efficace pour préparer le tissu nasal de souris tout en préservant son organisation anatomique. Cette technique permet d'obtenir un échantillon unique contenant presque la totalité du tissu nasal, y compris les tissus respiratoire et olfactif, épithélial et sous-épithélial.

Nous détaillons la suppression pas à pas de divers os faciaux entourant le tissu nasal, une méthode qui préserve même les tissus les plus délicats, tels que les extrémités de l'épithélium olfactif principal. Notre méthode présente des avantages significatifs par rapport aux méthodes de décalcification, car elle évite les traitements chimiques agressifs et la suppression de l'os peut être réalisée en 20 à 30 minutes. D'autres avantages de cette technique sont qu'elle n'est pas limitée par l'âge de la souris et qu'elle peut être effectuée à l'aide de tissus fixés ou frais.

Ces avantages rendent notre technique idéale pour les études morphologiques, immunohistochimiques et physiologiques. Voici un schéma du aspect dorsal des os du crâne et du nez. Dans cette vidéo, nous allons nous concentrer sur la dissection des os du nez.

Il s'agit d'un schéma du aspect ventral des os du crâne et du nez. Il s'agit d'une vue dorsale avec, en haut, un crâne et un nez non disséqués, et en bas, un nez disséqué. Sont maintenant visibles les terminaisons de l'épithélium olfactif principal.

Ici, nous montrons les os du nez en partant de l'aspect dorsal. Il s'agit de la partie dorsale de la plaque zygomatique, suivie de l'arc zygomatique. Voici l'os nasal, puis on voit la plaque criblée située en position caudale.

La région antérieure très avancée correspond à l'emplacement du ganglion de Grüneberg. Depuis une vue latérale, nous montrons la portion de l'os ethmoïde qui recouvre la turbinale de l'épithélium olfactif humain, le ganglion de Grüneberg, la maxillaire et les incisives antérieures. En passant à une vue ventrale, nous avons montré les molaires, les incisives antérieures, l'os palatin et l'os vomer.

Commencez l'ablation de l'os vulnérable en examinant l'aspect ventral du nez. Pour enlever l'os vulnérable, utilisez une pince pour fracturer cet os selon sa longueur, puis retirez les fragments osseux en les écartant des tissus sous-jacents afin d'éviter d'endommager l'organe nasal RO. Pour cette étape, utilisez des ciseaux pour sectionner la partie ventrale des incisives antérieures.

Utilisez un mouvement de serrage et fracturez les incisives supérieures en direction de l'os ulmère. Une fois les incisives supérieures fracturées, retirez les fragments osseux restants qui sont attachés au tissu à l’aide d’une pince. Pour desserrer le maxillaire, commencez par l’aspect ventral et fracturez le maxillaire juste au-dessous des arcs zygomatiques.

Retournez le museau vers l'aspect dorsal et fracturez le maxillaire juste en avant de l'arc zygomatique. Pour desserrer le maxillaire afin de retirer la partie droite du nerf nasal, retirez le reste du tissu frontal adjacent à la partie droite du nerf nasal. Vous utiliserez des pinces Ron pour cette tâche.

Il est nécessaire de faire preuve de prudence lors de l'utilisation des curettes Ron pour éviter d'endommager la mince lame criblée, car une lésion de cette lame peut entraîner une fente du nez en deux parties. Relevez et retirez l'os fracturé. Ensuite, écartez la partie dorsale de la plaque zygomatique du tissu sous-jacent.

Séparez l'os nasal le long de sa ligne médiane. À l'aide d'une pince ou d'une gomme, saisissez cet os avec la pince et déplacez doucement l'os de côté à côté tout en le soulevant. Cette procédure doit être effectuée avec une certaine délicatesse, car il est facile d'endommager le tissu sous-jacent lors du retrait de l'os. Une fois l'os retiré, vous pouvez voir distinctement le tissu sous-jacent, tel qu'illustré sur cette image fixe.

Pour enlever l'os, il suffit de le couper à l'aide de pinces ou de ciseaux. Procédez maintenant à l'ablation de la maxillaire antérieure. Si elle n'a pas encore été retirée à ce stade, la maxillaire antérieure est déjà détachée ; retirez-la donc en rompant les éventuels liens résiduels avec les tissus.

Depuis une vue dorsale en U, retirer l'os frontal qui se trouve juste accolé du côté gauche de l'os nasal. Utiliser les ciseaux Ron pour briser l'os frontal. On peut utiliser des pinces brutes ou une pince pour enlever ce fragment de l'os frontal.

Vous pouvez également desserrer la mâchoire supérieure à ce stade, bien que cela ne soit pas nécessaire. Pour retirer le côté gauche de l'os nasal, utilisez la pince et séparez délicatement l'os nasal de nombreux os environnants. Saisissez ensuite cet os avec la pince et déplacez-le généralement de côté à côté tout en soulevant pour détacher l'os nasal du tissu sous-jacent.

Lorsque le tissu sous-jacent se détache de l'os, il est parfois possible d'utiliser un point de vue latéral pour observer le tissu encore relié à l'os. Utilisez la pince pour séparer délicatement le tissu attaché à l'os, puis retirez l'os avec des ciseaux ou la pince. Une fois le nerf nasal retiré, enlevez le maxillaire antérieur du côté gauche du nez en utilisant la même technique que celle employée pour retirer le maxillaire antérieur du côté droit du nez.

L'étape suivante consiste à retirer la plaque zygomatique du côté gauche du nez. Il se peut qu'il subsiste une certaine adhérence entre la plaque zygomatique et les tissus sous-jacents ; dans ce cas, vous pouvez utiliser les pinces brutes pour pincer délicatement et desserrer la partie dorsale de la plaque zygomatique. Examinez l'aspect ventral du nez.

Pour identifier les molaires et l'os palatin, l'une ou l'autre structure peut être retirée. Tout d'abord, ceci est une vue de l'aspect latéral du nez, et cette vue montre le retrait des molaires du côté droit du nez. À l'aide du crâne dont le maxillaire droit a été ôté, l'os palatin est ensuite enlevé.

Ensuite, fracturez la mâchoire supérieure et les molaires restantes et retirez tous les gros fragments osseux provenant de l’os palatin ou de la mâchoire supérieure. Détachez et retirez tous les fragments restants de l’os ethmoïde qui font saillie près de l’épithélium de la muqueuse nasale. Placez la pince fine sous l’os et soulevez l’os en le retournant pour le séparer du tissu sous-jacent.

Alternativement, utilisez le ciseau de Rogers comme indiqué ici pour briser l'os, puis utilisez la pince fine pour séparer l'os du tissu sous-jacent. Voici à quoi ressemble le cornet de l'épithélium olfactif humain. Une fois l'os moïde retiré, cet os sera enlevé.

Ensuite, il est situé en position antéro-interne par rapport à l'os nasal, et cet os sera retiré à l'aide d'un curet. Procédez avec précaution à cette étape afin d'éviter d'endommager la lame criblée. Une fois l'os fracturé, utilisez une pince pour enlever l'os.

Voici maintenant une vue du nez. Une fois que cet os a été retiré, il reste un dernier endroit à examiner autour de l'organe nasal V. En effet, un os sépare les tubes appariés de l'organe nasal V, que je suis justement en train de retirer lors de cette dissection.

Il s'agit de la vue dorsale d'un nez qui a été disséqué à l'aide de notre technique. Ensuite, nous avons fait pivoter un nez afin de montrer ses différents aspects. Voici la vue dorsale, suivie de la vue latérale du côté gauche du nez et de la vue ventrale.

Nous présentons maintenant en détail les caractéristiques d'un nez entièrement disséqué à l'aide de notre technique, en commençant par l'aspect dorsal du nez. La première partie que nous montrons correspond aux cornets de l'épithélium récepteur principal. Des bulles d'air sont présentes dans le tissu sous-jacent aux os nasaux, et ces bulles d'air sont éliminées en faisant le vide sur l'échantillon depuis une vue latérale.

Nous montrons le cornet intact de l'épithélium olfactif humain. Remarquez la présence de bulles d'air à l'intérieur des cornets. Le tissu glandulaire se situe en avant du cornet, et l'épithélium respiratoire est visible depuis ce point de vue latéral.

Depuis la vue ventrale, l'organe nasal vulnérable est visible. Cette image illustre une extension de notre technique de dissection, dans laquelle les bulbes olfactifs du cerveau et le nez sont retirés sur un même spécimen. Pour préparer le tissu en vue de la coupe, prenez d'abord un moule en plastique et remplissez-le de milieu à température optimale pour la coupe.

Placer le tissu d'intérêt dans le moule rempli et positionner le moule à l'intérieur d'un cercle de graisse silicone sur une boîte en plastique ; un flacon sera placé sur le cercle de graisse silicone afin de former un joint étanche pour le vide. Notre laboratoire utilise un vide créé par circulation d'eau. Une fois le vide établi par circulation, les bulles d'air sont extraites du tissu.

Le vide est arrêté en coupant l'eau et en relâchant le tube. Ensuite, récupérez le moule en plastique. Ici, je déplace le tissu dans l'orientation souhaitée avant de le congeler.

Notre laboratoire utilise de la glace carbonique pour congeler les tissus. Il s'agit de résultats représentatifs de la coupe d'un nez à l'aide de notre technique de dissection et de coloration au rouge neutre. Cette coupe horizontale montre les cornets, l'épithélium effecteur, le tissu glandulaire et l'épithélium respiratoire.

La deuxième section est une coupe coronale qui montre le motif de repliement sinueux des cornets de l'épithélium olfactif principal. Dans cette vidéo, nous présentons une technique permettant de désosser manuellement le nez et d'obtenir un spécimen idéal pour des études morphologiques, immunohistochimiques ou physiologiques.